目的:分析閉合蛋白的2個胞外環(huán)結構域在小鼠TM4細胞緊密連接中的功能。方法:利用基因工程的方法,分別或者同時缺失掉閉合蛋白的2個胞外環(huán),將缺失了胞外環(huán)3個閉合蛋白基因序列,分別克隆入pcDNA3.1表達載體,再轉入TM4細胞。用RT-PCR和Western印跡分析閉合蛋白表達量,用緊密連接的體外細胞模型來分析閉合蛋白的胞外環(huán)對緊密連接程度的影響。結果:測序結果表明pcDNA3.1-occludinΔOCC1、pcDNA3.1-occludinΔOCC2和pcDNA3.1-occludinΔOCC1+OCC2表達載體已經(jīng)構建成功。RT-PCR和Western印跡結果顯示3個缺失組閉合蛋白的mRNA和蛋白質(zhì)的表達量都顯著高于對照組。體外緊密連接模型分析結果表明閉合蛋白2個胞外環(huán)都能夠增加TM4的緊密連接程度,其中,pcDNA3.1-occludinΔOCC1轉染組每天的大分子通過率均比pcDNA3.1-occludinΔOCC2轉染組顯著降低（P<0.05）,表明閉合蛋白第二個胞外環(huán)對緊密連接的影響程度比第一個胞外環(huán)要高。結論:閉合蛋白2個胞外環(huán)都能夠影響小鼠TM4細胞緊密連接的程度... 

【文章來源】：中華男科學雜志. 2020年08期 第675-680頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

Western印跡檢測Occuldin的表達

為分析閉合蛋白2個不同胞外環(huán)對緊密連接的影響,設計了不同的缺失載體,分別缺失或者同時缺失閉合蛋白的胞外環(huán)堿基,將其轉入體外緊密連接細胞模型后,用大分子通過率來衡量緊密連接的緊密程度。各組的大分子通過率見圖4。從第3～6天,大分子通過率逐步下降,表明TM4細胞從第3天開始形成緊密連接,到第6天時,緊密連接完全形成�？瞻讓φ战M、陰性對照組和同時缺失組(pcDNA3.1-occludinΔOCC1+OCC2)每天的大分子通過率,經(jīng)過ANOVA分析,差異無顯著性。從第3～6天,pcDNA3.1-occludinΔOCC1轉染組和pcDNA3.1-occludinΔOCC2轉染組每天的大分子通過率均顯著低于陰性對照組(P<0.05),表明閉合蛋白2個胞外環(huán)都能夠增加TM4的緊密連接程度。其中,pcDNA3.1-occludinΔOCC1轉染組每天(3～6 d)的大分子通過率均顯著低于pcDNA3.1-occludinΔOCC2轉染組(P<0.05),表明閉合蛋白第二個胞外環(huán)對緊密連接的影響程度比第一個胞外環(huán)要高。圖4 各組TM4每天的大分子通過率

各組TM4每天的大分子通過率


本文編號：2906071