腸道病毒感染可引發(fā)手足口�。℉FMD）,HFMD屬于急性傳染病,嬰幼兒為主要發(fā)病人群。臨床上患者年齡越小對身體危害越為嚴(yán)重,常出現(xiàn)發(fā)病迅速、病情加重趨勢明顯,愈后不理想等臨床癥狀。目前,HFMD已經(jīng)對嬰幼兒的身體健康甚至生命安全造成了嚴(yán)重威脅。腸道病毒71型（EV71）作為HFMD主要病原體之一,感染性強(qiáng),可以導(dǎo)致HFMD較高的發(fā)病率,癥狀嚴(yán)重者則表現(xiàn)出神經(jīng)系統(tǒng)癥狀,且已有死亡病例出現(xiàn)。目前,EV71常見檢測方法有:細(xì)胞接種、乳鼠接種、血清中和試驗(yàn)以及RT-PCR方法,這些方法成本高,耗時長且RT-PCR常易出現(xiàn)假陽性,給早期臨床診斷帶來了一定的困擾。因此,建立一種又快又準(zhǔn)且易于操作的檢測方法,已經(jīng)成為當(dāng)前EV71診斷工作的迫切要求。本試驗(yàn)結(jié)合單抗和ELISA方法的優(yōu)勢,開展EV71 VP1單抗的制備,并以此為基礎(chǔ),建立了EV71雙抗夾心ELISA方法。本論文以真核表達(dá)載體EV71 PcDNA3.1-VP1質(zhì)粒為免疫抗原,通過細(xì)胞融合及三次亞克隆篩選,獲得了EV71 VP1單抗兩株,分別命名為單抗CL-I和單抗CL-II。本論文應(yīng)用在線分析軟件對EV71 VP1基因進(jìn)行生物信息學(xué)分析,... 

【文章來源】：長春理工大學(xué)吉林省

【文章頁數(shù)】：47 頁

【學(xué)位級別】：碩士

【部分圖文】：

EV71病毒[15]

單克隆抗體制備流程

表 2-4 血清檢測結(jié)果× 400× 800× 1600× 3200× 6400× 12800× 陰8 1.486 1.379 1.213 0.896 0.698 0.526 0.11 11.79 10.94 9.63 7.11 4.54 4.17所有實(shí)驗(yàn)組免疫鼠血清抗體水平，檢測 P/N≥2.1，免疫以進(jìn)行細(xì)胞融合。細(xì)胞株建立合、篩選和 3 次亞克隆，最后獲得 2 株分泌抗 EV71 VP單抗 CL-I、單抗 CL-II。見圖 2.1。

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]手足口病實(shí)驗(yàn)室檢測方法的研究進(jìn)展[J]. 歐曉燕,許彬.  分子診斷與治療雜志. 2018(06)
[2]2016-2017年鹽城地區(qū)手足口病病原譜構(gòu)成及EV71型腸道病毒VP1基因特征[J]. 陳國清,李春香,王瑤,李峰,徐士林,李長城,邵榮標(biāo).  現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué). 2018(13)
[3]腸道病毒71型鼠源性中和單克隆抗體的制備[J]. 朱文兵,嚴(yán)麗蔚,鞏蔚,張雪梅,吳忠香,徐婧雯,宋杰,董少忠.  中國生物制品學(xué)雜志. 2018(03)
[4]腸道病毒71型免提取核酸的熒光RT-PCR檢測方法的建立及應(yīng)用[J]. 吳曉衛(wèi),翟建新,朱歡,鐘文楊,王樂,張利.  華南預(yù)防醫(yī)學(xué). 2018(01)
[5]吉林省2013年腸道病毒71型VP1編碼區(qū)基因特征分析[J]. 魏雷雷,周劍惠,楊堯,沈博,單元春,黃飚.  中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志. 2016(10)
[6]2014—2015年我國新發(fā)傳染病臨床診治與相關(guān)研究進(jìn)展[J]. 張昕,徐哲,陳威巍,姜天俊,王福生.  傳染病信息. 2016(01)
[7]人腸道病毒71型高致病性毒株及其體外適應(yīng)株cDNA感染性克隆的構(gòu)建[J]. 張永欣,李曉宇,黃宇明,周永東,畢勝利,岑山.  病毒學(xué)報(bào). 2014(06)
[8]pH值對膠體金標(biāo)記單克隆抗體性能的影響[J]. 孫園園,王云龍,李玉林,王繼創(chuàng),程蕾,鄧?yán)枥?  細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志. 2014(11)
[9]抗腸道病毒71型特異性卵黃抗體的制備及鑒定[J]. 朱思思,趙肅清,李月明,溫俊林.  中國免疫學(xué)雜志. 2011(10)
[10]EV71非結(jié)構(gòu)蛋白的結(jié)構(gòu)和功能及其為靶點(diǎn)的藥物研究進(jìn)展[J]. 秦咸蘊(yùn),林霖,楊燕,張書香,孔建強(qiáng),程克棣,趙云峰,王偉.  藥學(xué)學(xué)報(bào). 2011(07)

博士論文
[1]抗EV71病毒單克隆抗體及柯薩奇病毒病毒樣顆粒的制備研究[D]. 張瀟.北京工業(yè)大學(xué) 2015
[2]2009-2011年廣東EV71致手足口病臨床病原特征及EV71衣殼蛋白P1單克隆抗體制備[D]. 余楠.南方醫(yī)科大學(xué) 2012

碩士論文
[1]胞內(nèi)分枝桿菌ELISA檢測試劑盒的研制[D]. 宋力強(qiáng).長春理工大學(xué) 2018
[2]腸道病毒71型結(jié)構(gòu)蛋白VP1及其肽段的生物學(xué)活性研究[D]. 馬英偉.山東大學(xué) 2016



本文編號：2903786