目的建立乙型肝炎病毒（HBV）B、C基因型中國(guó)流行株腺相關(guān)病毒介導(dǎo)的乙肝病毒（AAV-HBV）小鼠模型,并研究其病毒學(xué)變化特征。方法以B、C基因型HBV流行株序列為基礎(chǔ),并參照常用D基因型病毒序列,分別構(gòu)建出攜帶1.3×基因組的腺相關(guān)病毒載體質(zhì)粒:p AAV-HBV1.3×（B）、pAAV-HBV1.3×（C）和pAAV-HBV1.3×（D）。通過(guò)三質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染方法在293細(xì)胞中包裝成三種成熟的腺相關(guān)病毒載體rAAV-HBV 1.3（B）、rAAV-HBV 1.3（C）與rAAV-HBV1.3（D）。C57BL/J小鼠通過(guò)尾靜脈注射相同劑量的AAV-HBV病毒載體,在注射后不同時(shí)間點(diǎn),用ELISA方法檢測(cè)血清中HBsAg和HBeAg表達(dá)水平,用熒光定量PCR（Q-PCR）方法檢測(cè)小鼠血清中HBV DNA拷貝數(shù)。結(jié)果新構(gòu)建B、C基因型兩株病毒有更高HBsAg表達(dá)水平,B基因型小鼠血清中HBsAg檢測(cè)值（均值）波動(dòng)在957.67～2 590.04 IU/mL,C基因型小鼠血清HBsAg波動(dòng)在725.21～3 195.16 IU/mL,D基因型小鼠血清HBsAg波動(dòng)在153.4～531.8 I... 

【文章來(lái)源】：熱帶醫(yī)學(xué)雜志. 2020年03期 第297-302+308頁(yè)

【文章頁(yè)數(shù)】：7 頁(yè)

【部分圖文】：

B、C、D基因型AAV-HBV小鼠血清中HBsAg表達(dá)水平

注射AAV-HBV病毒第7天、第10天、第2周、第3周、第4周、第6周、第8周，各組小鼠均檢測(cè)到HBeAg表達(dá)。由于無(wú)HBeAg的定量檢測(cè)試劑盒，本研究中使用了OD450讀值來(lái)表示HBeAg的表達(dá)水平。B、C、D基因型AAV-HBV小鼠中第2周血清HBeAg表達(dá)水平均較第7天顯著上升，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖2A、B、C。比較不同基因型第8周的HBeAg表達(dá)水平，各基因型之間差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見圖2D。2.3 B、C、D三種基因型HBV病毒在小鼠中HBV DNA變化特征

HBV病毒有A～J 10個(gè)基因型，HBV基因型是影響臨床表現(xiàn)的重要因素之一。我國(guó)臺(tái)灣學(xué)者發(fā)現(xiàn)，在臺(tái)灣，C基因型與嚴(yán)重肝臟疾病密切相關(guān)，B基因型與年輕人中無(wú)肝纖維化階段肝癌發(fā)生相關(guān)，但是在日本和我國(guó)大陸地區(qū)B基因型有更好預(yù)后，并且很少進(jìn)展到肝癌階段[9]。但30多年HBV基礎(chǔ)研究歷程中，B、C基因型病毒應(yīng)用較少，而D基因型病毒一直占據(jù)研究的中心地位，包括細(xì)胞系HepG2.2.15、HepAD38、HepDE19、黑猩猩感染模型、HBV轉(zhuǎn)基因小鼠模型、模擬HBV感染質(zhì)粒水動(dòng)力高壓注射模型、AAV-HBV小鼠模型[10-19]。我國(guó)大陸學(xué)者也有使用其它基因型質(zhì)粒高壓注射構(gòu)建小鼠模型的報(bào)道[20-21]，也發(fā)現(xiàn)B基因型有與D基因型HBV病毒表現(xiàn)特征不同。我們從臨床上分別選擇了B、C基因型病毒各1株，構(gòu)建了AAV-HBV小鼠模型，并在小鼠模型中進(jìn)行了8周的病毒學(xué)指標(biāo)檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)這兩株病毒與常用的D基因型病毒有不同的表現(xiàn)特征。本研究成功建立了HBV B、C基因型的中國(guó)大陸流行株的AAV-HBV小鼠模型。圖4 B、C、D基因型AAV-HBV小鼠血清中HBsAg與HBV DNA比值變化特征


本文編號(hào)：2902615