目的評價(jià)陽性藥物利巴韋林治療人副流感2型病毒（HPIV-2）感染恒河猴腎細(xì)胞(LLC-MK2后甘油醛-3-磷酸脫氫酶（GAPDH）、次黃嘌呤磷酸核糖轉(zhuǎn)移酶1（Hprt1）、β-肌動(dòng)蛋白（β-actin）、肽基脯氨酰異構(gòu)酶A（Ppia）、β2微球蛋白（B2M）5種內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性。方法 HPIV-2感染LLC-MK2 48h和72h,采用real-time PCR法測定病毒組、利巴韋林治療組和正常細(xì)胞對照組中上述5種內(nèi)參基因的表達(dá)水平,利用geNorm程序?qū)λ鼈兊姆�(wěn)定性進(jìn)行評價(jià)。結(jié)果 5種內(nèi)參基因均能穩(wěn)定表達(dá),其中GAPDH和Hprt1在感染后48h穩(wěn)定度相同,且最穩(wěn)定;Ppia和Hprt1在感染后72h穩(wěn)定度相同,且最穩(wěn)定。結(jié)論 Hprt1、GAPDH和Ppia是抗HPIV-2藥物體外篩選和研究HPIV-2與LLC-MK2相互作用最理想的內(nèi)參基因。 

【文章來源】：重慶醫(yī)學(xué). 2020年17期 第2861-2866頁

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

接種HPIV-2 72h后病毒組、正常細(xì)胞對照組和利巴韋林治療組LLC-MK2細(xì)胞形態(tài)學(xué)觀察

以Ct值為縱坐標(biāo)，相對拷貝數(shù)為橫坐標(biāo)構(gòu)建GAPDH、Hprt1、β-actin、Ppia、B2M 5個(gè)基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線，結(jié)果各內(nèi)參基因的擴(kuò)增效率在89.4%～94.3%，各內(nèi)參基因的標(biāo)準(zhǔn)曲線決定系數(shù)（R2）均大于98%，具有良好的線性關(guān)系，滿足qPCR條件，見表2。2.4 內(nèi)參基因的表達(dá)穩(wěn)定性

通過geNorm程序分析5個(gè)內(nèi)參基因在HPIV-2感染LLC-MK2 48h后的病毒組、利巴韋林治療組和正常細(xì)胞對照組平均表達(dá)穩(wěn)定度，得到內(nèi)參基因的平均表達(dá)穩(wěn)定度排列順序?yàn)镚APDH=Hprt1(M=0.115)>B2M(M=0.218)>Ppia(M=0.362）>β-actin(M=0.450），它們的M值均小于1.5，說明這5個(gè)內(nèi)參基因均能在LLC-MK2感染HPIV-2及利巴韋林治療48h后穩(wěn)定表達(dá)，其中GAPDH和Hprt1是表達(dá)最穩(wěn)定的內(nèi)參基因，見圖4A。geNorm程序內(nèi)參基因標(biāo)準(zhǔn)化因子配對變異分析Vn/（n+1）顯示，Vn/（n+1）值均低于0.15，其中，V2/3為0.088，提示使用2個(gè)內(nèi)參基因即可，沒有必要再選第3個(gè)或3個(gè)以上數(shù)目內(nèi)參基因進(jìn)行校正，見圖4B。圖4 geNorm程序分析HPIV-2感染LLC-MK2 48h時(shí)的理想內(nèi)參基因

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]H1N1豬流感病毒感染豬血管內(nèi)皮細(xì)胞后內(nèi)參基因的篩選[J]. 朱鑫,吳巧,馮曉輝,湯承,岳華.  西南民族大學(xué)學(xué)報(bào)(自然科學(xué)版). 2014(04)



本文編號(hào)：2901666