目的從新型冠狀病毒肺炎（COVID-19）患者鼻/咽拭子樣本中分離、培養(yǎng)嚴(yán)重急性呼吸綜合征冠狀病毒2（SARS-CoV-2）。方法將來自上海市COVID-19患者的3份鼻/咽拭子樣本以TPCK胰酶處理,然后接種Vero E6細(xì)胞;待大部分細(xì)胞出現(xiàn)明顯病變時(shí),取細(xì)胞培養(yǎng)上清用qRT-PCR法檢測(cè)病毒核酸,并用反轉(zhuǎn)錄PCR擴(kuò)增病毒受體結(jié)合區(qū)（RBD）基因片段;將病毒擴(kuò)增培養(yǎng)后感染接種于96孔板中的Vero E6細(xì)胞,觀察細(xì)胞病變效應(yīng),并用免疫熒光法檢測(cè)病毒蛋白。結(jié)果 2份COVID-19患者鼻/咽拭子樣本接種的Vero E6細(xì)胞出現(xiàn)明顯細(xì)胞病變效應(yīng),細(xì)胞培養(yǎng)上清中檢測(cè)出新復(fù)制產(chǎn)生的SARS-CoV-2核酸,擴(kuò)增出的RBD序列與早期分離出的SARS-CoV-2相應(yīng)序列完全一致;病毒感染的Vero E6細(xì)胞病變迅速,并能與SARS-CoV-2核衣殼蛋白（N蛋白）單克隆抗體、刺突蛋白（S蛋白）單克隆抗體及COVID-19患者恢復(fù)期血清發(fā)生反應(yīng)。結(jié)論從2份COVID-19患者鼻/咽拭子樣本中成功分離出SARS-CoV-2,為后續(xù)開展SARS-CoV-2感染與致病機(jī)制研究、防治藥物與疫苗的研發(fā)奠定了... 

【文章來源】：第二軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào). 2020年04期 第365-370頁 北大核心

【文章頁數(shù)】：6 頁

【部分圖文】：

免疫熒光檢測(cè)SARS-CoV-2蛋白

用反轉(zhuǎn)錄PCR分別擴(kuò)增S2、S3株SARS-CoV-2 S基因的RBD區(qū)序列,測(cè)序結(jié)果如圖4所示,2株病毒的S基因RBD區(qū)序列與最早完成基因組測(cè)序的SARS-CoV-2 病毒株(GenBank登錄號(hào):NC＿045512)RBD區(qū)序列一致。圖2 SARS-CoV-2感染的Vero E6細(xì)胞的細(xì)胞病變效應(yīng)

SARS-CoV-2感染的Vero E6細(xì)胞的細(xì)胞病變效應(yīng)

【參考文獻(xiàn)】：
期刊論文
[1]新型冠狀病毒上海株（nCoV-SH01）的分離和鑒定[J]. 張榮,易志剛,王玉燕,滕崢,徐巍,宋武慧,蔡霞,孫志平,谷陳建,周艷秋,陳洪友,葉榮,韓文東,朱云凱,馮飛,房方皓,李崇山,張曦,瞿滌,付晨,謝幼華,袁正宏.  微生物與感染. 2020(01)
[2]冠狀病毒的致病性及防控[J]. 聞?dòng)衩?  微生物與感染. 2020(01)



本文編號(hào)：2900895