本文關鍵詞：基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法的建立及應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：機體氧化應激產生的過量自由基,可直接或間接損傷DNA、蛋白質和脂質,使機體的氧化與抗氧化平衡系統(tǒng)被打破,利用外源性抗氧化活性物質對抗體內過量自由基是醫(yī)學領域的主要手段。傳統(tǒng)的抗氧化活性評價方法,因其各自的技術缺陷,嚴重制約著抗氧化活性物質的發(fā)現。因此,亟需建立一種新的抗氧化活性評價方法。細胞代謝組學是系統(tǒng)生物學的一個分支,因其靈敏度高、選擇性好、快速、準確性高、可控性強等多種優(yōu)點,可發(fā)展為一種新的抗氧化活性評價方法。與化學評價方法相比較,基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法以細胞為載體,未脫離生物體本身,更接近于生物體氧化反應過程;與細胞學評價方法相比較,基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法運用細胞代謝組學研究方法,可全面反映細胞內代謝物信息。本研究采用細胞代謝組學研究方法,以HepG2細胞為研究對象,基于HPLC-DAD-MS技術平臺,通過對細胞代謝物的分析,結合多種模式識別技術,獲取與抗氧化活性相關的代謝物靶標,構建基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法,并應用該方法評價鎖陽提取物。主要研究內容如下:(1)細胞樣品前處理及HPLC分析方法的研究。為最大限度地提取代謝物并取得可靠的分析結果,對細胞樣品前處理及HPLC分析方法進行了系統(tǒng)優(yōu)化。細胞代謝物用㧟20°C預冷的60%甲醇淬滅、超聲波破碎、60%甲醇提取進樣分析。HPLC色譜條件為:流速1.0 mL/min;柱溫30°C;色譜柱Agilent ZORBAX SB-Aq(250 mm×4.6 mm,5μm);流動相為1.93 g/L醋酸銨(pH=4.81)和乙腈;溶劑洗脫梯度為0.5-5%乙腈(0-10 min)、5-95%乙腈(10-60 min);檢測波長為254 nm。(2)基于細胞代謝組學的氧化應激生物標記物的發(fā)現。通過MTT實驗選擇5mg/L H2O2作用4 h,100 mg/L VE作用24 h,250 mg/L GSH作用24 h建立氧化應激模型。檢測細胞內ROS水平及酶活性驗證氧化應激模型。對細胞代謝物進行HPLC分析,從典型的HPLC-DAD譜圖中選取28個共有峰進行模式識別分析,借助于OPLS-DA模型的S-plot圖及VIP值篩選出11種潛在的氧化應激生物標記物。同時,采用LC-MS聯用技術得到潛在生物標記物的精確相對分子質量,通過細胞代謝物與對照品的紫外光譜圖、保留時間并結合加標法對色譜峰定性,其中p1、p2、p3及p9分別鑒定為蘋果酸、VC、GSH及色氨酸。(3)基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法的建立。在OPLS-DA模型基礎上,建立了基于細胞代謝組學的抗氧化活性定性評價方法。以VE或GSH的CMAA unit值為標準,定量評價物質的抗氧化活性,建立了基于細胞代謝組學的抗氧化活性定量評價方法。(4)基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法的應用。根據前期建立的細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法評價鎖陽提取物,并運用化學評價方法及細胞學評價方法進行驗證。結果顯示,建立的基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法是可靠的,且結果與傳統(tǒng)的抗氧化活性評價方法的結果一致。多種評價方法結果均顯示,鎖陽多糖與鎖陽黃酮具有一定的抗氧化活性,且鎖陽黃酮抗氧化活性較強。
【關鍵詞】：細胞代謝組學 抗氧化活性 評價方法 生物標記物 樣品前處理 模式識別 鎖陽
【學位授予單位】：蘭州大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R329.2
【目錄】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-11
• 第一章 抗氧化活性評價方法及細胞代謝組學研究進展11-19
• 1 抗氧化活性評價方法研究進展11-14
• 1.1 體外評價方法11-13
• 1.2 體內評價方法13-14
• 1.3 小結14
• 2 細胞代謝組學研究進展14-19
• 2.1 細胞代謝組學的發(fā)展歷程14-15
• 2.2 細胞代謝組學的研究方法15-16
• 2.3 細胞代謝組學的應用16-18
• 2.4 小結18-19
• 第二章 細胞樣品前處理及HPLC分析方法的研究19-30
• 1 儀器，材料與試劑19-20
• 1.1 儀器19-20
• 1.2 試劑20
• 1.3 材料20
• 2 實驗方法20-22
• 2.1 細胞樣品前處理方法的研究20-21
• 2.2 HPLC分析方法的研究21-22
• 3 結果與分析22-29
• 3.1 細胞樣品前處理方法的研究22-25
• 3.2 HPLC分析方法的研究25-28
• 3.3 方法學驗證28-29
• 4 結論29-30
• 第三章 基于細胞代謝組學的氧化應激生物標記物的發(fā)現30-43
• 1 儀器，材料與試劑30-31
• 1.1 儀器30-31
• 1.2 試劑31
• 1.3 材料31
• 2 實驗方法31-33
• 2.1 氧化應激細胞模型的構建31-32
• 2.2 細胞樣品前處理32
• 2.3 色譜分析32-33
• 3 數據處理33
• 4 結果與分析33-42
• 4.1 氧化應激細胞模型的構建33-35
• 4.2 細胞代謝物HPLC譜圖35-36
• 4.3 潛在氧化應激生物標記物的發(fā)現36-42
• 5 結論42-43
• 第四章 基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法的建立43-50
• 1 儀器，材料與試劑43
• 1.1 儀器43
• 1.2 試劑43
• 1.3 材料43
• 2 實驗方法43-44
• 2.1 氧化應激細胞模型的構建43-44
• 2.2 樣品前處理44
• 2.3 色譜分析44
• 3 數據處理44
• 4 結果與分析44-49
• 4.1 基于細胞代謝組學的抗氧化活性定性評價方法的建立44-47
• 4.2 基于細胞代謝組學的抗氧化活性定量評價方法的建立47-49
• 5 結論49-50
• 第五章 基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法的應用50-59
• 1 儀器，材料與試劑50-51
• 1.1 儀器50
• 1.2 試劑50-51
• 1.3 材料51
• 2 實驗方法51-52
• 2.1 基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法評價鎖陽提取物51
• 2.2 傳統(tǒng)的體外抗氧化活性評價方法評價鎖陽提取物51-52
• 3 統(tǒng)計學分析52
• 4 結果與分析52-58
• 4.1 基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法評價鎖陽提取物52-55
• 4.2 傳統(tǒng)的體外抗氧化活性評價方法評價鎖陽提取物55-58
• 5 結論58-59
• 參考文獻59-64
• 研究生階段的研究成果64-65
• 致謝65

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1 王智文;馬向輝;陳洵;趙學明;陳濤;;微生物代謝組學的研究方法與進展[J];化學進展;2010年01期

2 董玲玲;柴逸峰;曹穎瑛;朱臻宇;;微生物代謝組學的前處理及分析技術[J];微生物學通報;2009年12期

3 王磊;薄濤;蒙昔;;正在蓬勃興起的“代謝組學”研究技術與方法[J];生命的化學;2014年01期

4 唐惠儒;王玉蘭;;代謝組學:一個迅速發(fā)展的新興學科(英文)[J];生物化學與生物物理進展;2006年05期

5 徐慶;田科雄;;營養(yǎng)代謝組學的應用探討[J];飼料博覽;2010年03期

6 邊玲;代謝組學簡介[J];食品與藥品;2005年04期

7 孫向明;杜娟;南莉莉;;代謝組學中代謝指紋分析技術進展[J];食品與藥品;2008年09期

8 楊軍,宋碩林,Jose Castro Perez,Robert S.Plumb,許國旺;代謝組學及其應用[J];生物工程學報;2005年01期

9 曹蓓;阿基業(yè);王廣基;鄭天;劉林生;李夢婕;石建;王新文;趙春艷;;代謝組學在臨床研究中的應用及進展[J];生命科學;2010年08期

10 朱勇飛,張?zhí)鞂?代謝組學在毒理學研究中的應用[J];國外醫(yī)學(衛(wèi)生學分冊);2005年03期

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1 ;《代謝組學:方法與應用》目次[A];營養(yǎng)健康新觀察（第四十一期）：營養(yǎng)代謝組學專題[C];2012年

2 薛佳;胡揚;陳奇;韓雪;;代謝組學的研究方法及其在藥學中的應用[A];2009年中國藥學大會暨第九屆中國藥師周論文集[C];2009年

3 薛佳;胡揚;陳奇;韓雪;;代謝組學的研究方法及其在藥學中的應用[A];2010年中國藥學大會暨第十屆中國藥師周論文集[C];2010年

4 周永明;任榮政;;骨髓增生異常綜合征代謝組學與骨髓增生異常綜合征[A];第八屆全國中西醫(yī)結合血液病學術會議論文集[C];2007年

5 孫長顥;;營養(yǎng)代謝組學[A];營養(yǎng)健康新觀察（第四十一期）：營養(yǎng)代謝組學專題[C];2012年

6 曹蓓;阿基業(yè);王廣基;;代謝組學在臨床研究中的應用及進展[A];第九屆全國藥物和化學異物代謝學術會議論文集[C];2009年

7 郁勝強;;代謝組學及在腎臟病研究中的應用[A];中華醫(yī)學會腎臟病學分會2010學術年會專題講座匯編[C];2010年

8 李福山;白嵐;;分子生物學研究的新領域—代謝組學[A];廣東省肝臟病學會微創(chuàng)專業(yè)委員會學術會議暨消化道腫瘤靶向治療新技術學習班論文匯編[C];2007年

9 李小利;郭瑞臣;王本杰;;代謝組學在藥物研究開發(fā)中的應用[A];2006年山東省醫(yī)院藥學學術研討會論文匯編[C];2006年

10 陳敏;楊成梓;陳紅;;代謝組學在中藥領域中的應用概況[A];中華中醫(yī)藥學會中藥炮制分會2011年學術年會論文集[C];2011年

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1 記者　陳勇、通訊員　王占軍、蔡怡春;國際“代謝組學之父”牽手武漢[N];湖北日報;2006年

2 鄭見;用代謝組學“語言”詮釋中醫(yī)藥內涵[N];中國中醫(yī)藥報;2012年

3 記者　李雪林 實習生 楊磊;“代謝組學”助中藥走向世界[N];文匯報;2006年

4 李雪林 楊磊;“代謝組學”助中醫(yī)藥走向世界[N];中國醫(yī)藥報;2006年

5 于麗珊;代謝組學與中醫(yī)藥研究受關注[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

6 李雪林 楊磊;“代謝組學”助中醫(yī)藥走向世界[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

7 本報實習記者　 王華鋒;合作可喜 前景可期[N];中國醫(yī)藥報;2006年

8 周東浩;營衛(wèi)與代謝組學[N];中國中醫(yī)藥報;2006年

9 記者　劉云濤;上海：代謝組學“聯姻”中藥研究結碩果[N];中國醫(yī)藥報;2006年

10 胡德榮;改變人體內菌群治病成為可能[N];健康報;2007年

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1 谷艷;色譜質譜聯用技術的代謝組學方法用于疾病及藥物作用機制的研究[D];沈陽藥科大學;2012年

2 何翠翠;基于生物核磁共振與液質聯用的代謝組學及藥代動力學研究[D];南京大學;2011年

3 黎莉;疾病及藥物干預的代謝組學方法及應用研究[D];華東理工大學;2010年

4 夏建飛;基于液質聯用技術的代謝組學新方法的研究與應用[D];華東理工大學;2010年

5 袁大林;代謝組學與中藥研究中復雜體系的解析方法及應用研究[D];中南大學;2010年

6 梁曉萍;基于液質聯用的代謝組學在中藥復方療效和安全性評價中的應用[D];華東理工大學;2011年

7 張小麗;基于多種分析技術的代謝組學方法研究與應用[D];蘭州大學;2013年

8 沈國慶;基于動物腫瘤模型的LC-MS/MS代謝組學及藥物代謝組學方法研究[D];北京協和醫(yī)學院;2011年

9 黃建華;2型糖尿病相關的代謝組學和生物信息學研究[D];中南大學;2014年

10 江芝婷;代謝組學在疾病預測診斷以及療效評價中的應用研究[D];華東理工大學;2011年

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1 孫艷慧;家蠶蛹期營養(yǎng)分配關鍵代謝物的鑒定[D];西南大學;2015年

2 管仁艷;基于優(yōu)化發(fā)酵培養(yǎng)基及微生物代謝組學方法提高Hygrocin A產量的研究[D];華中農業(yè)大學;2015年

3 王彥;基于代謝組學的中藥單體抑制小膠細胞活化研究[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

4 宋瑞祥;基于尿液代謝組學方法篩選膀胱癌診斷標志物[D];第二軍醫(yī)大學;2015年

5 徐威;定量代謝組學的方法構建及其在腸道微生態(tài)研究中的應用[D];浙江大學;2015年

6 胡蘭;代謝組學在相關婦科腫瘤中的發(fā)展及應用[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

7 白順杰;基于~1H NMR代謝組學方法研究氟西汀對星形膠質細胞脂質和氨基酸代謝的影響[D];重慶醫(yī)科大學;2015年

8 許衛(wèi)萍;色譜—質譜聯用分析微生物代謝網絡[D];大連工業(yè)大學;2011年

9 李梅映;基于代謝組學技術的BDE-47早期暴露對小鼠影響的研究[D];南京大學;2014年

10 王寧麗;基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法的建立及應用[D];蘭州大學;2016年

  本文關鍵詞：基于細胞代謝組學的抗氧化活性評價方法的建立及應用，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號：289834