目的設(shè)計并評價白紋伊蚊細(xì)胞色素b(Cytb)基因特異性引物。方法根據(jù)白紋伊蚊Cytb基因保守區(qū)域序列,設(shè)計1對引物,優(yōu)化PCR擴(kuò)增的退火溫度。以白紋伊蚊及同屬、同科、同目昆蟲基因組DNA為樣本,評價引物的特異性;以白紋伊蚊基因組DNA為樣本,評價引物的靈敏性;擴(kuò)增4個口岸捕獲的8只白紋伊蚊,評價引物的重復(fù)性。結(jié)果設(shè)計的引物的最佳退火溫度為55℃。該引物可成功擴(kuò)增白紋伊蚊Cytb基因,不能擴(kuò)增其同屬、同種、同目昆蟲基因;可擴(kuò)增來自4個口岸的濃度1.9 ng/μl以上的白紋伊蚊基因組DNA。結(jié)論本研究設(shè)計的引物的特異性、靈敏性、重復(fù)性理想,適用于白紋伊蚊的鑒定。
【部分圖文】：

當(dāng)退火溫度在53～55℃時，白紋伊蚊擴(kuò)增條帶明亮，當(dāng)退火溫度升高至56℃時，擴(kuò)增條帶亮度明顯減弱。因此采用CytbAEDF/CytbAEDR引物進(jìn)行檢測，退火溫度選擇為55℃。2.3 引物的靈敏度

以白紋伊蚊基因組DNA原液和10-1～10-10稀釋液為模板進(jìn)行擴(kuò)增，基因組DNA原液和10-1稀釋液可見擴(kuò)增條帶，原液擴(kuò)增條帶清晰而10-1稀釋液較弱，10-2～10-10稀釋液未擴(kuò)增到特異性產(chǎn)物。測序結(jié)果顯示，原液、10-1稀釋液擴(kuò)增產(chǎn)物與目的基因片段相似度達(dá)100%。該引物可擴(kuò)增濃度1.9 ng/μl以上的模板量。2.4 引物的重復(fù)性

提取8只白紋伊蚊的基因組DNA，使用引物CytbAEDF/CytbAEDR進(jìn)行擴(kuò)增和瓊脂糖凝膠電泳，8次獨立擴(kuò)增均可獲得清晰明亮的目的條帶，測序結(jié)果與目的基因片段相似度為100%。該引物穩(wěn)定性好，可用于日常檢測。3 討論
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