目的觀察中低溫對(duì)H/R損傷后心肌細(xì)胞活力和線粒體功能的影響。檢測(cè)中低溫對(duì)H/R損傷后的心肌細(xì)胞中SUMO化水平的影響。探究SUMO化水平的變化對(duì)心肌細(xì)胞凋亡的影響。方法構(gòu)建CoCl2和完全培養(yǎng)基誘導(dǎo)的H/R模型,33℃低溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)H9c2和HL-1細(xì)胞來(lái)模擬低溫治療,實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組、H/R組、低溫治療組,利用CCK8檢測(cè)心肌細(xì)胞在三種不同的情況下的活性。流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS產(chǎn)生量,共聚焦顯微鏡觀察JC-1熒光來(lái)評(píng)估線粒體功能改變。Western印跡法檢測(cè)SUMO1和SUMO2/3在各組的心肌細(xì)胞的表達(dá)水平,并檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Bcl-2和胱天蛋白酶-3的表達(dá)水平。構(gòu)建SUMO1干涉質(zhì)粒siRNA(si-SUMO1)轉(zhuǎn)染H9c2和HL-1兩種心肌細(xì)胞,實(shí)驗(yàn)分對(duì)照組、H/R組、低溫治療組、si-SUMO1組,用以上方法再次評(píng)估心肌細(xì)胞活性、細(xì)胞凋亡和線粒體功能。結(jié)果CCK8結(jié)果表明,與正常對(duì)照組相比H/R組中心肌細(xì)胞的活性顯著降低。然而,低溫組的細(xì)胞存活率與H/R組相比得到改善。流式細(xì)胞儀檢測(cè)ROS和共聚焦顯微鏡觀察的結(jié)果顯示,與正常對(duì)照組相比,H/R組ROS產(chǎn)生量顯著升高,線粒體膜電位顯著降低,低溫治療組ROS產(chǎn)生量顯著降低,線粒體膜電位顯著升高。蛋白質(zhì)免疫印跡結(jié)果顯示,與對(duì)照組相比,SUMO1蛋白在H/R組的表達(dá)水平下降,但低溫治療組中的SUMO1蛋白的表達(dá)水平顯著高于H/R組。同時(shí)檢測(cè)了不同組之間的SUMO2/3的表達(dá)水平,但是與SUMO1蛋白的表達(dá)量不同,各組SUMO2/3蛋白的表達(dá)水平并沒(méi)有顯著變化。流式細(xì)胞術(shù),蛋白質(zhì)免疫印跡法和共聚焦顯微鏡觀察結(jié)果表明通過(guò)低溫治療Bcl-2蛋白的表達(dá)和線粒體膜電位顯著增加,而胱天蛋白酶3和線粒體ROS水平顯著降低。當(dāng)SUMO1被敲低時(shí),線粒體ROS水平顯著增加并且線粒體膜電位顯著降低。這與低溫保護(hù)心肌細(xì)胞的作用是相反的。結(jié)論中低溫能增強(qiáng)心肌細(xì)胞的SUMO1表達(dá)水平并且SUMO1的高表達(dá)能夠保護(hù)線粒體功能并拮抗心肌細(xì)胞的凋亡。圖[5]幅;表[2]個(gè);參[129]篇。
【學(xué)位單位】：華北理工大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R363
【部分圖文】：

第 1 章 實(shí)驗(yàn)研究1.2 實(shí)驗(yàn)結(jié)果1.2.1 不同濃度 CoCl2對(duì)細(xì)胞活力的影響圖 1.通過(guò) CCK-8 分析不同濃度的 CoCl2對(duì)心肌細(xì)胞毒性的影響。如（圖 1A 和B）所示，通過(guò)各種 CoCl2濃度（50,100,300 和 600μM）刺激 H9c2 和 HL-1 細(xì)胞�；� CCK-8 的細(xì)胞毒性測(cè)定的結(jié)果表明，CoCl2劑量高于 300μM 顯著降低的 H9c2 和HL-1 細(xì)胞的存活率。與對(duì)照組相比，50 和 100μMCoCl2的細(xì)胞存活率沒(méi)有顯著差異。隨著 CoCl2濃度的增加,細(xì)胞毒性損傷在 600μM 時(shí)最大。具體地，與對(duì)照相比 CoCl2濃度在 300 和 600μM 時(shí)，各組之間有顯著差異（*P <0.05; #P <0.05），數(shù)據(jù)表示為平均值±SE（N=5）。說(shuō)明中度的治療低溫（33℃）拮抗心肌細(xì)胞中 H/R 誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡。

華北理工大學(xué)碩士學(xué)位論文降低（圖 2B）（*P<0.05; #P<0.05）。通過(guò)共聚焦顯微鏡檢測(cè)激光誘導(dǎo)的 JC-1 熒光的變化，以評(píng)估線粒體膜電位的早期變化（圖 2C）。經(jīng)中度低溫治療后，線粒體膜電位顯著增加（圖 2D）（*P<0.05; #P<0.05）。這些結(jié)果表明，適度低溫有助于保持線粒體功能。

第 1 章 實(shí)驗(yàn)研究了 H/R 組中 SUMO1 蛋白表達(dá)的降低（圖 3C）（#P<0.05）。令人驚訝的是，SUMO2/3 蛋白的表達(dá)沒(méi)有顯著差異（圖 3D）。這里介紹的實(shí)驗(yàn)工作提供了關(guān)于低溫如何調(diào)節(jié) SUMO 化水平的首次研究之一。這些結(jié)果表明，在中度低溫后，新SUMO1 綴合物的產(chǎn)生可發(fā)揮細(xì)胞保護(hù)作用。
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本文編號(hào)：2860895