B細(xì)胞介導(dǎo)的抗病毒體液免疫應(yīng)答過程涉及大量基因的上調(diào)表達(dá),為快速鑒定這些基因的功能,需在體外建立一種有效敲低B細(xì)胞中目的基因表達(dá)以研究基因功能的方法,但目前已有的方法轉(zhuǎn)導(dǎo)效率較低且很少將B細(xì)胞轉(zhuǎn)移到小鼠體內(nèi)以觀察其增殖和分化。本研究首先將Drosha酶特異性小分子干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)與反轉(zhuǎn)錄病毒包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染至病毒包裝細(xì)胞中,大大提高了病毒的滴度;其次,在培養(yǎng)基中加入抗CD180抗體,構(gòu)建了原代B細(xì)胞的體外培養(yǎng)體系,使B細(xì)胞在保持自身特性的同時(shí)具有較強(qiáng)的增殖能力;再次,增加離心感染(spin infection)次數(shù),進(jìn)一步提高了B細(xì)胞的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率;另外,通過小鼠預(yù)先感染,可收獲更多增殖、分化的B細(xì)胞以供表型分析。通過上述改進(jìn)措施,成功敲除了B細(xì)胞功能基因Bcl6的表達(dá),驗(yàn)證了其抗凋亡功能。該方法的建立為研究病毒急、慢性感染中B細(xì)胞的增殖、分化與缺陷機(jī)制奠定了良好基礎(chǔ)。
【部分圖文】：

與原代T細(xì)胞相比，B細(xì)胞在體外很難被病毒有效轉(zhuǎn)導(dǎo)。T細(xì)胞在體外單次離心感染即可獲得30%以上的感染效率[8]，而原代B細(xì)胞單次感染效率非常低。本研究嘗試重復(fù)離心感染以提高B細(xì)胞的感染效率，結(jié)果發(fā)現(xiàn)重復(fù)離心感染使B細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率在共轉(zhuǎn)Drosha酶特異性siRNA的基礎(chǔ)上約增加1倍，即從現(xiàn)有的5%～15%提高到30%以上（圖3）。圖2 反轉(zhuǎn)錄病毒包裝載體共轉(zhuǎn)染Drosha酶特異性siRNA對(duì)B細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的影響

反轉(zhuǎn)錄病毒包裝載體共轉(zhuǎn)染Drosha酶特異性siRNA對(duì)B細(xì)胞轉(zhuǎn)導(dǎo)效率的影響

B細(xì)胞1次和2次感染后的轉(zhuǎn)導(dǎo)效率
【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 太光平,汪仕良;目的基因表達(dá)調(diào)控研究進(jìn)展[J];國外醫(yī)學(xué)(分子生物學(xué)分冊);1998年02期

2 阿彩嶺;陳嶸祎;;RNAa效應(yīng)研究及應(yīng)用進(jìn)展[J];廣東醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年01期

3 褚波;黃雪峰;唐云明;;慢病毒載體及其應(yīng)用進(jìn)展[J];生物醫(yī)學(xué)工程學(xué)雜志;2008年01期

4 主鴻鵠,徐開林;慢病毒載體的改進(jìn)及其在血液病基因治療中的應(yīng)用[J];中國實(shí)驗(yàn)血液學(xué)雜志;2003年02期

5 胡曉舒;王建偉;;EPOR及其介導(dǎo)的信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2008年11期

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