B細胞介導的抗病毒體液免疫應答過程涉及大量基因的上調(diào)表達,為快速鑒定這些基因的功能,需在體外建立一種有效敲低B細胞中目的基因表達以研究基因功能的方法,但目前已有的方法轉導效率較低且很少將B細胞轉移到小鼠體內(nèi)以觀察其增殖和分化。本研究首先將Drosha酶特異性小分子干擾RNA(small interfering RNA,siRNA)與反轉錄病毒包裝質(zhì)粒共轉染至病毒包裝細胞中,大大提高了病毒的滴度;其次,在培養(yǎng)基中加入抗CD180抗體,構建了原代B細胞的體外培養(yǎng)體系,使B細胞在保持自身特性的同時具有較強的增殖能力;再次,增加離心感染(spin infection)次數(shù),進一步提高了B細胞的轉導效率;另外,通過小鼠預先感染,可收獲更多增殖、分化的B細胞以供表型分析。通過上述改進措施,成功敲除了B細胞功能基因Bcl6的表達,驗證了其抗凋亡功能。該方法的建立為研究病毒急、慢性感染中B細胞的增殖、分化與缺陷機制奠定了良好基礎。
【部分圖文】：

與原代T細胞相比，B細胞在體外很難被病毒有效轉導。T細胞在體外單次離心感染即可獲得30%以上的感染效率[8]，而原代B細胞單次感染效率非常低。本研究嘗試重復離心感染以提高B細胞的感染效率，結果發(fā)現(xiàn)重復離心感染使B細胞轉導效率在共轉Drosha酶特異性siRNA的基礎上約增加1倍，即從現(xiàn)有的5%～15%提高到30%以上（圖3）。圖2 反轉錄病毒包裝載體共轉染Drosha酶特異性siRNA對B細胞轉導效率的影響

反轉錄病毒包裝載體共轉染Drosha酶特異性siRNA對B細胞轉導效率的影響

B細胞1次和2次感染后的轉導效率
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