本文關(guān)鍵詞：小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在中國宿主動(dòng)物間分布特征與致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森菌ystA基因功能研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：小腸結(jié)腸炎耶爾森菌是一種常見的腸桿菌科細(xì)菌,該菌造成的感染近年來受到全球廣泛關(guān)注。該菌還是一種人獸共患病病原體,動(dòng)物宿主類型比較廣泛。本研究的主要目的是研究小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在中國不同地區(qū)多種宿主動(dòng)物間的分布特征。標(biāo)本采集的時(shí)間跨度是從2008年7月至2014年7月,采樣地區(qū)包括16個(gè)省市(青海省,四川省甘孜州石渠縣和德格縣,甘肅省、寧夏回族自治區(qū)、內(nèi)蒙古自治區(qū)、云南省、貴州省、四川省綿陽市和資陽市、黑龍江省、河南省、北京市、廣西壯族自治區(qū)江西省、安徽省、江蘇省、浙江省)。采樣動(dòng)物包括生豬11403只(標(biāo)本12319份),犬1632只(標(biāo)本2687份),羊1677只(標(biāo)本2325份),牛648只,雞1199只,鴨子17只,老鼠14191只(標(biāo)本18436份),高原鼠兔207只(標(biāo)本414份),蝙蝠368只。各種動(dòng)物宿主攜帶率如下：豬攜帶率12.91%；犬?dāng)y帶率9.80%；羊攜帶率0.89%；牛攜帶率2.78%；雞攜帶率4.50%；鴨子攜帶率是0；老鼠攜帶率3.40%；高原鼠兔攜帶率6.76%；蝙蝠攜帶率是0。從所有標(biāo)本中,共分離得到小腸結(jié)腸炎耶爾森菌2289株,其中致病性菌株1232株,非致病性菌株1057株。致病性菌株中絕大多數(shù)為0：3血清型,占99.51%(1226/1232),O：9致病性血清型菌株僅有6株。不同的動(dòng)物宿主中致病菌的分離率有較大差別,其中,豬、犬標(biāo)本中分離的多是致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森菌,比例分別為73.50%,59.44%；而羊、牛、雞、老鼠和高原鼠兔中分離的非致病性菌株占多數(shù)。本研究選取的菌株是Y.E 105.5R(r),該株菌是一株全基因測(cè)序的人源性菌株,血清型是O：9。本研究利用自殺質(zhì)粒同源重組的原理,獲得了Y.E 105.5R(r)△ystA和Y.E 105.5R(r) △ystA ail兩種衍生菌株。將野生株與兩種衍生菌株,分別進(jìn)行乳鼠試驗(yàn)。利用乳鼠腸重/余體重的比值來檢驗(yàn)這三種菌產(chǎn)生腸毒素的水平。本次研究運(yùn)用單因素方差分析對(duì)三組數(shù)據(jù)進(jìn)行比較,檢驗(yàn)水準(zhǔn)a=0.05。結(jié)果顯示：三組數(shù)據(jù)之間存在明顯的統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,檢驗(yàn)效能(power)是0.888；其中Y.E105.5R(r)與Y.E 105.5 R(r)△ystA之間兩兩比較的結(jié)果為P=0.006,power=0.909；Y.E105.5R(r)和Y.E 105.5R(r)△ystA ail之間兩兩比較的結(jié)果為P=0.032,power=0.933而YE 105.5R(r)△ystA和Y.E105.5R(r)△ystA ail之間兩兩比較的結(jié)果P=0.985,power=0.059。統(tǒng)計(jì)學(xué)結(jié)果提示O:9血清型小腸結(jié)腸炎耶爾森菌ystA基因在37℃乳鼠體內(nèi)能夠表達(dá)。
【關(guān)鍵詞】：小腸結(jié)腸炎耶爾森菌 動(dòng)物宿主 腸毒素 ystA基因 乳鼠試驗(yàn)
【學(xué)位授予單位】：中國疾病預(yù)防控制中心
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R378
【目錄】：

• 縮略詞7-8
• 中文摘要8-10
• 英文摘要10-12
• 前言12-15
• 第一部分 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌在中國家畜家禽及野生動(dòng)物間分布15-28
• 1. 實(shí)驗(yàn)材料與方法15-21
• 1.1 儀器與材料15-17
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)儀器15
• 1.1.2 主要生化試劑15-16
• 1.1.3 培養(yǎng)基與試劑配制16-17
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法17-21
• 1.2.1 標(biāo)本采集17
• 1.2.2 標(biāo)本DNA的提取17
• 1.2.3 PCR初篩標(biāo)本17-18
• 1.2.4 菌株分離培養(yǎng)18
• 1.2.5 生化鑒定與血清型鑒定18-19
• 1.2.6 毒力基因鑒定19-21
• 2. 結(jié)果與分析21-25
• 2.1 各地區(qū)家畜家禽、野生動(dòng)物標(biāo)本采集及菌株分離情況21
• 2.2 致病性小腸結(jié)腸炎耶爾森菌分離及血清型分布情況21
• 2.3 部分家畜家禽和野生動(dòng)物對(duì)應(yīng)標(biāo)本的采集及菌株分離情況21-25
• 3. 討論25-27
• 4. 小結(jié)27-28
• 第二部分 致病性菌株ystA基因功能研究28-48
• 1. 目的基因缺失株構(gòu)建28-38
• 1.1 實(shí)驗(yàn)材料28-31
• 1.1.1 實(shí)驗(yàn)菌株與質(zhì)粒28
• 1.1.2 實(shí)驗(yàn)儀器28
• 1.1.3 實(shí)驗(yàn)培養(yǎng)基配制28-29
• 1.1.4 實(shí)驗(yàn)引物29-31
• 1.2 實(shí)驗(yàn)方法31-38
• 1.2.1 重組質(zhì)粒構(gòu)建31-38
• 2. 乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)38-39
• 2.1 實(shí)驗(yàn)菌株與動(dòng)物篩選38
• 2.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組38
• 2.3 灌胃實(shí)驗(yàn)菌液制備38
• 2.4 菌落計(jì)數(shù)38-39
• 2.5 乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)39
• 3. 實(shí)驗(yàn)結(jié)果39-45
• 3.1 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌Y.E 105.5R(R)兩種衍生菌株構(gòu)建39-42
• 3.1.1 小腸結(jié)腸炎耶爾森菌Y.E 105.5R(r)基因組DNA提取及ail基因、ystA基因同源臂的擴(kuò)增39-40
• 3.1.2 YE 105.5R(r)△ystA、Y.E 105.5R(r)△ail、YE 105.5R(r)△ystA ail PCR篩選40-42
• 3.2 乳鼠灌胃實(shí)驗(yàn)結(jié)果42-45
• 3.2.1 質(zhì)粒驗(yàn)證結(jié)果42-43
• 3.2.2 三株菌菌落計(jì)數(shù)結(jié)果43
• 3.2.3 乳鼠灌胃后腸重與余體重?cái)?shù)據(jù)43-44
• 3.2.4 數(shù)據(jù)分析44-45
• 4. 討論45-48
• 5. 小結(jié)48
• 參考文獻(xiàn)48-51
• 附錄1：綜述51-59
• 參考文獻(xiàn)55-59
• 致謝59-60
• 個(gè)人文章發(fā)表情況60

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本文編號(hào)：285390