Rho/ROCK信號(hào)通路參與多發(fā)性硬化(Multiple Sclerosis,MS)及其動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎(Experimental autoimmune encephalomylitis,EAE)的病理過程,在免疫細(xì)胞活化、炎性細(xì)胞經(jīng)破壞的血-腦屏障(blood brain barrier,BBB)向中樞神經(jīng)系統(tǒng)(Central Nervous System,CNS)遷移、髓鞘脫失、軸索損害以及膠質(zhì)細(xì)胞反應(yīng)等方面扮演著重要的角色。鹽酸法舒地爾(Fasudil)是目前臨床用于治療蛛網(wǎng)膜下腔出血后血管痙攣的Rho激酶(Rho kinase,ROCK)抑制劑。有研究表明鹽酸法舒地爾具有改善EAE免疫炎性微環(huán)境、保護(hù)髓鞘等作用,且具備促進(jìn)神經(jīng)突觸再生的能力和內(nèi)源性神經(jīng)干細(xì)胞動(dòng)員的潛能。但是,鹽酸法舒地爾同時(shí)存在著迅速明顯的血管擴(kuò)張作用、長(zhǎng)期使用安全窗較小且給藥途徑單一、口服生物利用度差、半衰期短等局限性。因此尋求和研發(fā)更有效、更安全且副作用更小的新型ROCK抑制劑來治療神經(jīng)系統(tǒng)慢性病的任務(wù)就顯得越來越迫切。羥基法舒地爾(Hydroxyfasudil,HF)是鹽酸法舒地爾在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物,活性比鹽酸法舒地爾強(qiáng),半衰期更長(zhǎng),并且作為ROCK抑制劑,HF具有更高的選擇性。動(dòng)物實(shí)驗(yàn)表明其在惡性腫瘤、肺動(dòng)脈高壓、心腦血管痙攣、心肌缺血、缺血性腦損傷等疾病的預(yù)防和治療中具有潛在價(jià)值。因此,在本研究中首先于細(xì)胞水平檢驗(yàn)HF的細(xì)胞毒性、對(duì)神經(jīng)元活性以及形態(tài)的影響;其次,通過小鼠急性毒性實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證其安全性并了解HF的最大耐受劑量(Maximum Tolerance dose,MTD);繼之,在EAE模型驗(yàn)證HF的臨床有效性;最后,比較HF以及鹽酸法舒地爾在雙環(huán)己酮草酰二腙(Cuprizone,CPZ)誘導(dǎo)的CNS脫髓鞘模型的療效,并研究HF對(duì)髓鞘的保護(hù)以及促進(jìn)髓鞘再生的作用,探討其可能的作用機(jī)制。第一部分羥基法舒地爾的細(xì)胞毒性及其對(duì)SHSY-5Y神經(jīng)元細(xì)胞活性、形態(tài)的影響目的:觀察并比較HF及鹽酸法舒地爾的細(xì)胞毒性及其對(duì)SHSY-5Y神經(jīng)元細(xì)胞活性和形態(tài)的影響。方法:SHSY-5Y(人源多巴胺神經(jīng)細(xì)胞系)經(jīng)標(biāo)準(zhǔn)程序復(fù)蘇后進(jìn)行常規(guī)培養(yǎng)和傳代。待生長(zhǎng)狀態(tài)和細(xì)胞密度合適時(shí)進(jìn)行藥物干預(yù)實(shí)驗(yàn),將神經(jīng)元與不同濃度的HF及鹽酸法舒地爾(3μg,15μg,75μg,200μg/ml)共同培養(yǎng)24h。神經(jīng)元的活性采用MTT比色法檢測(cè)。對(duì)神經(jīng)元的細(xì)胞毒性測(cè)定采用LDH酶標(biāo)法。SHSY-5Y神經(jīng)元與HF、鹽酸法舒地爾共培養(yǎng)24h后,在顯微鏡下觀察培養(yǎng)狀態(tài)中的神經(jīng)元的形態(tài)。結(jié)果:1.同PBS對(duì)照組相比,相對(duì)低濃度(3μg/ml,15μg/ml)的HF及鹽酸法舒地爾的細(xì)胞毒性不顯著,隨著藥物濃度的增加,對(duì)SHSY-5Y神經(jīng)元的毒性增加,特別是當(dāng)濃度達(dá)到200μg/ml時(shí),與PBS組相比,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HF與鹽酸法舒地爾組間無顯著差異。2.同PBS對(duì)照組相比,相對(duì)低濃度(3μg/ml,15μg/ml)的HF及鹽酸法舒地爾并不影響細(xì)胞活性,但是當(dāng)濃度增加至75μg/ml,200μg/ml時(shí)SHSY-5Y神經(jīng)元活性降低,P0.05,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HF與鹽酸法舒地爾組間無顯著差異。3.相對(duì)低濃度(3μg/ml)的HF和鹽酸法舒地爾未明顯影響SHSY-5Y神經(jīng)元的形態(tài),當(dāng)濃度增至15μg/ml時(shí)可有效促進(jìn)神經(jīng)突的形成,而當(dāng)濃度增至75μg/ml時(shí)可見神經(jīng)突受損。結(jié)論:HF在體外實(shí)驗(yàn)中表現(xiàn)出較好的安全性,與鹽酸法舒地爾相比無顯著差異。第二部分羥基法舒地爾對(duì)小鼠的急性毒性實(shí)驗(yàn)?zāi)康?觀察HF對(duì)小鼠的急性毒性,評(píng)價(jià)藥物的安全性。方法:第一部分:將36只C57BL/6小鼠(8-10周齡,20-22g)隨機(jī)分為6組(雌雄各半),即鹽酸法舒地爾-80、100、125mg/kg和HF-80、100、125mg/kg。將HF和鹽酸法舒地爾溶解于二甲基亞砜(DMSO)中,使用前用0.1%冰醋酸稀釋,腹腔注射。DMSO的最終濃度為10%(v/v)。觀察小鼠的毒性反應(yīng),包括皮毛、進(jìn)食情況、大小便情況、自主運(yùn)動(dòng)情況及不自主運(yùn)動(dòng)癥狀、死亡情況等。第二部分:為了排除酸性溶劑對(duì)實(shí)驗(yàn)結(jié)果的影響,重復(fù)100mg/kg和125mg/kg兩個(gè)濃度組的實(shí)驗(yàn)。將16只C57BL/6小鼠隨機(jī)分成4組(雌雄各半),使用0.9%Na Cl溶解鹽酸法舒地爾,HF溶解方法同前。觀察小鼠的毒性反應(yīng),包括皮毛、進(jìn)食情況、大小便情況、自主運(yùn)動(dòng)情況及不自主運(yùn)動(dòng)癥狀、死亡情況等。結(jié)果:1.第一部分實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:隨著藥物濃度的增加,小鼠的自主運(yùn)動(dòng)逐漸減少,呼吸頻率增加,雙后肢緊貼地面,無法站立。與HF組相比,相同濃度的鹽酸法舒地爾組小鼠自主運(yùn)動(dòng)較少,不自主運(yùn)動(dòng)增加,抽搐發(fā)生率和死亡率較高。鹽酸法舒地爾-125mg/kg組小鼠在藥物注射2分鐘后出現(xiàn)驚厥,隨后全身僵硬,然后死亡;相同濃度的HF組小鼠僅表現(xiàn)為自主運(yùn)動(dòng)減少,并且沒有出現(xiàn)抽搐和死亡現(xiàn)象。2.第二部分結(jié)果顯示:鹽酸法舒地爾-125mg/kg(0.9%Na Cl溶解)組中的兩只小鼠在注射藥物5分鐘后出現(xiàn)驚厥,呼吸速率加快并于30分鐘后死亡。其余兩只小鼠表現(xiàn)出較少的自主運(yùn)動(dòng),雙后肢不能站立。HF-125mg/kg(DMSO+0.1%冰醋酸溶解)組小鼠除了自主活動(dòng)輕度減少以外,并沒有出現(xiàn)抽搐和死亡現(xiàn)象。結(jié)論:HF的最大耐受劑量大于125mg/kg,說明HF較鹽酸法舒地爾毒性更低,安全性更高。第三部分羥基法舒地爾對(duì)實(shí)驗(yàn)性自身免疫性腦脊髓炎的防治作用及機(jī)制研究目的:建立髓鞘少突膠質(zhì)細(xì)胞糖蛋白(myelin oligodendrocyte glycoprotein,MOG)35-55誘導(dǎo)的EAE小鼠模型,觀察HF在EAE模型中的治療效果,并探討其可能的分子機(jī)制。方法:EAE模型由MOG35-55多肽免疫雌性C57BL/6小鼠制備。隨機(jī)分為EAE組、HF治療組。HF于免疫后第3天開始腹腔注射(40mg/kg/d)直至第28天。期間觀察小鼠行為學(xué)變化。免疫后第28天,取脊髓制備冰凍切片行組織學(xué)檢測(cè):蘇木素-伊紅(Hematoxylin-Eosin,HE)染色、盧卡斯快藍(lán)(Luxol Fast Blue,LFB)染色。提取脊髓組織蛋白,通過Western blot法檢測(cè)NF-κB、COX-2、i NOS的表達(dá)。制備脾單個(gè)核細(xì)胞(Mononuclear cells,MNCs),應(yīng)用流式細(xì)胞儀檢測(cè)T淋巴細(xì)胞亞群;收集MNCs培養(yǎng)上清液,應(yīng)用ELISA法檢測(cè)細(xì)胞因子;應(yīng)用Real-time PCR法檢測(cè)脾MNCs中趨化因子的表達(dá),以及脊髓中M1、M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物指標(biāo)。在另一項(xiàng)實(shí)驗(yàn)中,建立EAE模型,于免疫后第9天,取脾臟制備MNCs,應(yīng)用MOG刺激,與HF共培養(yǎng),檢測(cè)脾MNCs培養(yǎng)上清液中炎性細(xì)胞因子的濃度。結(jié)果:1.行為學(xué)變化:免疫后第12天EAE組小鼠陸續(xù)出現(xiàn)運(yùn)動(dòng)功能障礙,平均發(fā)病時(shí)間為免疫后(16.38±4.98)天,且隨時(shí)間延長(zhǎng),臨床癥狀加重,評(píng)分逐漸增高,EAE組小鼠的臨床癥狀的平均最高分值為(3.84±1.09)分,HF治療組小鼠則未出現(xiàn)可測(cè)的運(yùn)動(dòng)障礙表現(xiàn),兩組之間差異顯著(P0.01,P0.001)。2.組織學(xué)檢測(cè):脊髓冰凍切片HE染色顯示:EAE小鼠脊髓白質(zhì)內(nèi)大量炎性細(xì)胞密集環(huán)繞于小血管周圍,呈血管“袖套樣”改變。EAE組炎性細(xì)胞浸潤(rùn)面積占白質(zhì)總面積的(1.15±0.09)%,HF治療組為(0.64±0.18)%,炎性細(xì)胞的浸潤(rùn)明顯減少,兩組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.01)。LFB染色可見EAE小鼠脊髓白質(zhì)內(nèi)片狀髓鞘脫失區(qū)。EAE組髓鞘脫失區(qū)占白質(zhì)總面積的(1.20±0.16)%,HF治療組為(0.37±0.02)%,顯著減少了脊髓白質(zhì)內(nèi)髓鞘的脫失(P0.01)。3.流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)HF對(duì)EAE小鼠脾MNCs中T淋巴細(xì)胞亞群變化的影響。結(jié)果顯示,與EAE組相比,HF可上調(diào)CD4+CD25+T細(xì)胞的比例(P0.05);下調(diào)CD4+IFN-γ+(P0.05)和CD4+IL-17+T(P0.05)細(xì)胞的比例。同時(shí),與EAE組相比,HF可抑制脾MNCs培養(yǎng)上清液中IFN-γ和IL-17的表達(dá)(P0.05)。4.Real-time PCR檢測(cè)巨噬細(xì)胞標(biāo)志物的表達(dá),結(jié)果顯示,與EAE組相比,HF增加了M2型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物Arg-1(P0.05)、IL-4(P0.01)、TGF-β(P0.01)的表達(dá),并抑制M1型巨噬細(xì)胞標(biāo)志物i NOS(P0.001)、CD68(P0.001)和TNF-α(P0.001)的表達(dá)。5.HF抑制了EAE小鼠脊髓內(nèi)p-NF-κB/p65的表達(dá)(P0.05),而且降低了COX-2和i NOS的水平(P0.05,P0.05)。6.體外實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:HF降低了脾MNCs培養(yǎng)上清液中炎性細(xì)胞因子IFN-γ、IL-17、TNF-α和IL-1β的濃度(P0.05),并抑制了趨化因子MIP-1a(p0.05)、MCP-1(P0.01)、RANTES(P0.01)的表達(dá)。結(jié)論:1.成功制備MOG35-33誘導(dǎo)的小鼠EAE模型;2.HF可延遲EAE小鼠模型的發(fā)病時(shí)間,改善CNS的髓鞘脫失,減輕臨床癥狀的嚴(yán)重性;3.HF通過減少脾細(xì)胞中趨化因子的表達(dá)起到抑制炎性細(xì)胞向CNS浸潤(rùn)的作用;4.HF通過促進(jìn)T細(xì)胞各亞群間的平衡而發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用;5.HF通過下調(diào)致炎性細(xì)胞因子,促進(jìn)巨噬細(xì)胞表型由M1向M2型轉(zhuǎn)變,并抑制NF-κB的活化,下調(diào)i NOS和COX-2的表達(dá)起到緩解神經(jīng)炎性反應(yīng)的作用。第四部分羥基法舒地爾、鹽酸法舒地爾治療雙環(huán)己酮草酰二腙誘導(dǎo)的脫髓鞘模型的療效比較及作用機(jī)制研究目的:比較HF與鹽酸法舒地爾對(duì)CPZ誘導(dǎo)的脫髓鞘小鼠模型的治療效果,并探究其作用機(jī)制。方法:將雄性C57BL/6小鼠隨機(jī)分為四組:正常組:接受常規(guī)飼料喂養(yǎng)6周;CPZ模型組:投喂含0.2%CPZ(w/w)的飼料6周;鹽酸法舒地爾治療組:投喂含0.2%CPZ(w/w)的飼料6周,于造模四周后給予腹腔注射鹽酸法舒地爾(40mg/kg/d);HF治療組:投喂含0.2%CPZ(w/w)的飼料6周,于造模四周后給予腹腔注射HF(40mg/kg/d)。正常組及CPZ模型組于四周后給予腹腔注射等量生理鹽水。于實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)應(yīng)用高架十字迷宮(EPM)和垂直木實(shí)驗(yàn)來檢測(cè)小鼠的焦慮水平和運(yùn)動(dòng)能力。應(yīng)用LFB和黑金染色(Black GoldⅡ,BGⅡ)對(duì)腦冰凍切片進(jìn)行染色,以及Western blot法檢測(cè)髓鞘堿性蛋白MBP的表達(dá),免疫熒光染色法檢測(cè)MBP的表達(dá)以及腦內(nèi)成熟少突膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量來評(píng)估CPZ小鼠腦內(nèi)髓鞘的脫失程度。分離脾臟并稱取重量,制備脾MNCs,一部分MNCs通過流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)T細(xì)胞亞群的分布、B細(xì)胞的比例;另一部分脾MNCs在含有MOG35-55(10μg/ml)的培養(yǎng)液中培養(yǎng)48小時(shí)。采用ELISA法檢測(cè)各組小鼠腦內(nèi)、血清以及脾MNCs培養(yǎng)上清液中細(xì)胞因子的濃度。應(yīng)用ELISA法檢測(cè)血清、脾MNCs培養(yǎng)上清液以及腦組織中的抗-MOG抗體,并應(yīng)用Dot blot法和免疫熒光染色法檢驗(yàn)其特異性。通過免疫熒光染色法,檢測(cè)腦內(nèi)抗-CD4、CD68、B220、Iba-1、i NOS,NF-κB和BDNF的表達(dá)。結(jié)果:1.與正常組相比,CPZ模型組小鼠表現(xiàn)出明顯的行為學(xué)的改變,EPM檢測(cè)結(jié)果顯示,CPZ模型組小鼠進(jìn)入閉合臂的次數(shù)明顯增加(正常組為4.75±0.93,CPZ模型組為10.08±1.89,P0.01)。同CPZ模型組相比,鹽酸法舒地爾組(6.58±1.04)及HF組(5.83±0.79)有效地減少了CPZ小鼠進(jìn)入閉合臂的次數(shù)(P0.05,P0.05),但是鹽酸法舒地爾組及HF組之間無顯著差異。垂直木檢測(cè)結(jié)果顯示CPZ模型組小鼠自檢測(cè)裝置頂端至底部所需時(shí)間較正常組明顯增加,正常組為(5.72±0.83)s,CPZ模型組為(15.29±1.24)s,P0.01。與CPZ模型組相比,鹽酸法舒地爾組為(11.71±1.01)s,P0.05,HF組為(10.14±1.10)s,P0.05,有效地改善了CPZ小鼠的運(yùn)動(dòng)能力。但是鹽酸法舒地爾組及HF組之間的差異未達(dá)到統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.同正常組相比,CPZ模型組小鼠腦內(nèi)胼胝體區(qū)LFB光密度、BGⅡ染色密度及MBP的表達(dá)均明顯降低(P0.001)。同CPZ模型組相比,HF組及鹽酸法舒地爾組各染色法結(jié)果均顯示小鼠腦內(nèi)髓鞘的脫失明顯減輕(P0.01,P0.001)。鹽酸法舒地爾組BGⅡ染色法的光密度值高于HF組,該差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。3.CPZ模型組小鼠腦蛋白中MBP含量比正常組減少(P0.001)。同CPZ模型組相比,鹽酸法舒地爾組及HF組腦蛋白中MBP的含量明顯增加(P0.001)。鹽酸法舒地爾組MBP的表達(dá)高于HF組,差異顯著,具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義,P0.05。同正常組相比,CPZ模型組O4+少突膠質(zhì)細(xì)胞數(shù)量明顯減少(正常組為396.61±29.74,CPZ模型組94.23±9.23,P0.001)。鹽酸法舒地爾組(255.80±25.11)及HF組(258.24±26.37)較CPZ模型組相比,可有效增加O4+少突膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量(P0.001)。鹽酸法舒地爾組及HF組之間無顯著差異。4.CPZ組小鼠的脾臟質(zhì)量較正常組明顯減小,正常組為(113.50±14.92)g,CPZ模型組為(57.13±2.65)g,P0.001。鹽酸法舒地爾組脾臟質(zhì)量為(70.77±5.16)g,HF組為(65.83±3.04)g,同CPZ模型組相比,二者均可部分程度上改善CPZ所誘導(dǎo)的脾臟萎縮(P0.05)。鹽酸法舒地爾組及HF組之間差異不顯著。5.通過ELISA法于CPZ小鼠的血清、脾MNCs培養(yǎng)上清液以及腦蛋白中均檢測(cè)到抗-MOG抗體,同正常組相比,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.001,P0.01,P0.05),鹽酸法舒地爾及HF可顯著抑制CPZ小鼠血清、脾MNCs培養(yǎng)上清液以及腦蛋白中抗-MOG抗體的濃度(P0.001,P0.01),并且同鹽酸法舒地爾相比,HF對(duì)抗-MOG抗體的抑制作用更強(qiáng),兩組差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。應(yīng)用Dot blot法檢驗(yàn)不同稀釋比例的血清中抗-MOG抗體的表達(dá),CPZ模型組顯著高于正常組,P0.001,鹽酸法舒地爾和HF表現(xiàn)出對(duì)該抗體的有效抑制,與CPZ模型組相比差異顯著(P0.001,P0.01)。HF較鹽酸法舒地爾的抑制作用更顯著(P0.05)。通過免疫熒光染色法驗(yàn)證了抗-MOG抗體可特異性地與少突膠質(zhì)細(xì)胞結(jié)合。應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)分析脾MNCs中B淋巴細(xì)胞亞群的比例,正常組、CPZ模型組、鹽酸法舒地爾組及HF組分別為:(52.37±0.52)%,(62.17±0.13)%,(54.87±0.59)%,(52.97±0.23)%,與正常組相比,CPZ模型組的B220+B細(xì)胞比例增加(P0.001)。而與CPZ模型組相比,鹽酸法舒地爾及HF可抑制這一改變(P0.001),并且HF組同鹽酸法舒地爾組相比,該比例更低,差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。6.在CPZ模型小鼠腦內(nèi),可觀察到CD4、CD68以及B220陽性的T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞和B淋巴細(xì)胞的表達(dá),同正常組相比,差異顯著(P0.001)。鹽酸法舒地爾及HF可顯著抑制上述細(xì)胞向CPZ小鼠腦內(nèi)的浸潤(rùn)(P0.001)。7.同正常組相比,CPZ模型小鼠腦內(nèi)胼胝體區(qū)以及紋狀體區(qū)可見Iba-1+小膠質(zhì)細(xì)胞的數(shù)量的顯著增加(P0.001);與CPZ模型組相比,鹽酸法舒地爾及HF可有效地減少CPZ小鼠腦內(nèi)該細(xì)胞的數(shù)量(P0.001);鹽酸法舒地爾組及HF組之間無顯著差異。應(yīng)用雙染技術(shù),可見CPZ模型組小鼠腦內(nèi)Iba-1+i NOS+以及Iba-1+NF-κB+的細(xì)胞數(shù)量較正常組明顯增加(P0.001),鹽酸法舒地爾及HF可有效地減少CPZ小鼠腦內(nèi)上述炎性細(xì)胞的數(shù)量,同CPZ模型組相比,差異顯著,P0.001,而鹽酸法舒地爾及HF組之間無顯著差異。鹽酸法舒地爾及HF尚可抑制腦內(nèi)炎性細(xì)胞因子IL-4(P0.001)、IL-1β(P0.001)和TNF-α的水平。8.HF促進(jìn)了星形膠質(zhì)細(xì)胞來源的BDNF的產(chǎn)生。結(jié)論:1.HF及鹽酸法舒地爾可通過抑制抗-MOG特異性抗體的產(chǎn)生,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥、抑制外周炎性細(xì)胞浸潤(rùn)進(jìn)而改善炎性微環(huán)境等作用來發(fā)揮對(duì)CPZ模型髓鞘的保護(hù)作用。2.HF還可促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的產(chǎn)生來促進(jìn)髓鞘的再生。此外,同鹽酸法舒地爾相比,HF表現(xiàn)出更強(qiáng)的抑制抗-MOG抗體的作用。結(jié)論1.HF的細(xì)胞毒性及其對(duì)細(xì)胞活性、細(xì)胞形態(tài)的影響呈濃度依賴型表現(xiàn)。2.HF的最大耐受劑量高于鹽酸法舒地爾,具有較好的安全性。3.HF可改善EAE模型的臨床癥狀,減輕脊髓中炎性細(xì)胞浸潤(rùn),改善髓鞘脫失,并通過調(diào)節(jié)免疫、抑制神經(jīng)炎性反應(yīng)等途徑發(fā)揮作用。4.HF及鹽酸法舒地爾可通過抑制抗-MOG特異性抗體的產(chǎn)生,抑制小膠質(zhì)細(xì)胞介導(dǎo)的神經(jīng)炎癥、改善炎性微環(huán)境,促進(jìn)神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子的產(chǎn)生等作用來發(fā)揮對(duì)CPZ模型的髓鞘保護(hù)以及促進(jìn)髓鞘再生的作用。5.HF作為鹽酸法舒地爾在體內(nèi)的活性代謝產(chǎn)物,二者在治療CPZ模型中療效相近,但是同鹽酸法舒地爾相比,HF具有對(duì)抗-MOG特異性抗體的抑制作用更強(qiáng)、毒性更低、不良反應(yīng)更低的優(yōu)勢(shì),具有很大的潛在應(yīng)用價(jià)值。
【學(xué)位單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位年份】：2019
【中圖分類】：R744.5;R-332
【部分圖文】：

山西醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文2 結(jié) 果 不同濃度 HF 和鹽酸法舒地爾對(duì) SHSY-5Y 神經(jīng)元的細(xì)胞毒性檢測(cè)如圖 1-1 所示，同 PBS 對(duì)照組相比，相對(duì)低濃度（3μg/ml，15μg/ml）的 H法舒地爾細(xì)胞毒性不顯著，隨著藥物濃度的增加，二者均可濃度依賴Y-5Y 神經(jīng)元產(chǎn)生毒性，特別是當(dāng)濃度達(dá)到 200μg/ml 時(shí)，對(duì) SHSY-5Y 神經(jīng)顯著，與 PBS 組相比，P<0.05，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。HF 與鹽酸法舒地 SHSY-5Y 神經(jīng)元的細(xì)胞毒性無顯著差異。

圖 1-2 HF 和鹽酸法舒地爾對(duì) SHSY-5Y 神經(jīng)元細(xì)胞活性的影響（*P＜0.05）3 不同濃度 HF 和鹽酸法舒地爾對(duì) SHSY-5Y 神經(jīng)元形態(tài)的影響如圖 1-3 所示，同 PBS 對(duì)照組相比，相對(duì)低濃度（3μg/ml）的 HF 和鹽酸法舒爾未明顯影響 SHSY-5Y 神經(jīng)元的形態(tài)，當(dāng)濃度增至 15μg/ml 時(shí)可有效促進(jìn)SY-5Y 神經(jīng)元的神經(jīng)突的形成，而當(dāng)濃度增至 75μg/ml 時(shí)可見神經(jīng)突受損。

圖 1-2 HF 和鹽酸法舒地爾對(duì) SHSY-5Y 神經(jīng)元細(xì)胞活性的影響（*P＜同濃度 HF 和鹽酸法舒地爾對(duì) SHSY-5Y 神經(jīng)元形態(tài)的影響 1-3 所示，同 PBS 對(duì)照組相比，相對(duì)低濃度（3μg/ml）的 HF 和明顯影響 SHSY-5Y 神經(jīng)元的形態(tài)，當(dāng)濃度增至 15μg/ml 時(shí)可Y 神經(jīng)元的神經(jīng)突的形成，而當(dāng)濃度增至 75μg/ml 時(shí)可見神經(jīng)突受
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1 張海飛;郭敏芳;孟健;劉春云;李艷花;尉杰忠;侯紹蔚;豐玲;肖保國;馬存根;;法舒地爾對(duì)LPS刺激小膠質(zhì)細(xì)胞表型演變的影響[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年08期

本文編號(hào)：2853834