目的成功制備了卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒(KSHV)的細(xì)胞抗原片,并驗(yàn)證其有效性,為檢測(cè)KSHV血清標(biāo)本提供了一種可行的辦法。方法培養(yǎng)了能夠穩(wěn)定表達(dá)卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒核相關(guān)抗原(LANA)的BCBL-1細(xì)胞。BCBL-1細(xì)胞是感染過(guò)KSHV并且細(xì)胞基因組中包含KSHV基因的細(xì)胞。待細(xì)胞生長(zhǎng)活力旺盛且狀態(tài)良好時(shí),收集細(xì)胞并用4%的多聚甲醛固定到預(yù)先處理好的抗原片上,完成封閉、待測(cè)血清的孵育和熒光二抗的孵育后,通過(guò)免疫熒光顯微鏡觀察檢測(cè)結(jié)果。結(jié)果通過(guò)免疫熒光技術(shù)發(fā)現(xiàn),感染過(guò)KSHV的患者血清樣本能觀察到熒光標(biāo)記的二抗激發(fā)的熒光,而未感染過(guò)KSHV的標(biāo)本則沒(méi)有觀察到熒光標(biāo)記的二抗激發(fā)的熒光。結(jié)論成功制備了能用于檢測(cè)血清的卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒的細(xì)胞抗原片,為進(jìn)一步研究卡波肉瘤相關(guān)皰疹病毒的流行病學(xué)提供方法。
【部分圖文】：

圖2 熒光顯微鏡下觀察KSHV陽(yáng)性與陰性樣本檢測(cè)結(jié)果 ×100目前常用于檢測(cè)KSHV的血清學(xué)方法為ELISA間接法,用此方法檢測(cè)血清有以下幾個(gè)優(yōu)點(diǎn):① 適用于大量樣本的檢測(cè),一塊反應(yīng)板至少可以檢測(cè)90余份血清標(biāo)本,一次檢測(cè)數(shù)塊反應(yīng)板可完成上百個(gè)樣本的檢測(cè);② 成本較低,ELISA中各種試劑、耗材及儀器價(jià)格相對(duì)較低,儲(chǔ)存方便。但是缺點(diǎn)也是十分明顯的:① 費(fèi)時(shí),包被抗原需4 ℃過(guò)夜,第2天檢測(cè)血清樣本時(shí),當(dāng)中各種過(guò)程所需的時(shí)間至少要6 h;② 檢測(cè)過(guò)程中溫度求高,在檢測(cè)樣本時(shí),除洗滌外,所有的過(guò)程均需要在37 ℃的環(huán)境中進(jìn)行,尤其是在酶和底物反應(yīng)時(shí),溫度對(duì)最終的OD值影響較大;③ 洗滌不完全時(shí),容易造成背景值的偏高,進(jìn)而造成假陽(yáng)性。采用細(xì)胞抗原片的方法檢測(cè)血清樣本也有優(yōu)點(diǎn):① 檢測(cè)時(shí)間短,抗原片還可以儲(chǔ)存。制作抗原片只需要1 h,檢測(cè)樣本需要3 h,制作完成的抗原片可置于-80 ℃保存,待有樣本檢測(cè)時(shí)可直接取出使用。② 靈敏度較ELISA法高,只有與陽(yáng)性標(biāo)本中的抗體結(jié)合的熒光二抗能激發(fā)目的熒光,目的熒光的強(qiáng)弱只與激發(fā)光的強(qiáng)弱相關(guān),不受溫度等因素的影響。但是此種方法也存在不足:① 細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢,BCBL-1細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,相對(duì)于普通的貼壁細(xì)胞生長(zhǎng)周期更長(zhǎng)。② 要求避光。因?yàn)闊晒舛怪械臒晒馕镔|(zhì)在白光環(huán)境下容易淬滅,所以孵育二抗和在熒光顯微鏡下觀察結(jié)果時(shí)不可過(guò)長(zhǎng)時(shí)間暴露在白光下,進(jìn)而造成假陰性。③ 費(fèi)用相對(duì)較高,熒光顯微鏡的成本及維護(hù)和酶標(biāo)儀表相比較高,不適用于臨床檢測(cè)樣本。

BCBL-1細(xì)胞培養(yǎng)和12孔免疫熒光原位雜交載玻片

表1 合肥市238例普通人群KSHV的感染情況 性別 數(shù)量(例) 陽(yáng)性數(shù) 感染率(%) 男 148 9 6.1 女 90 9 10.0 合計(jì) 238 18 7.6圖3 KSHV陽(yáng)性標(biāo)本結(jié)果局部放大與細(xì)胞核染色對(duì)比
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