目的成功制備了卡波肉瘤相關皰疹病毒(KSHV)的細胞抗原片,并驗證其有效性,為檢測KSHV血清標本提供了一種可行的辦法。方法培養(yǎng)了能夠穩(wěn)定表達卡波肉瘤相關皰疹病毒核相關抗原(LANA)的BCBL-1細胞。BCBL-1細胞是感染過KSHV并且細胞基因組中包含KSHV基因的細胞。待細胞生長活力旺盛且狀態(tài)良好時,收集細胞并用4%的多聚甲醛固定到預先處理好的抗原片上,完成封閉、待測血清的孵育和熒光二抗的孵育后,通過免疫熒光顯微鏡觀察檢測結果。結果通過免疫熒光技術發(fā)現,感染過KSHV的患者血清樣本能觀察到熒光標記的二抗激發(fā)的熒光,而未感染過KSHV的標本則沒有觀察到熒光標記的二抗激發(fā)的熒光。結論成功制備了能用于檢測血清的卡波肉瘤相關皰疹病毒的細胞抗原片,為進一步研究卡波肉瘤相關皰疹病毒的流行病學提供方法。
【部分圖文】：

圖2 熒光顯微鏡下觀察KSHV陽性與陰性樣本檢測結果 ×100目前常用于檢測KSHV的血清學方法為ELISA間接法,用此方法檢測血清有以下幾個優(yōu)點:① 適用于大量樣本的檢測,一塊反應板至少可以檢測90余份血清標本,一次檢測數塊反應板可完成上百個樣本的檢測;② 成本較低,ELISA中各種試劑、耗材及儀器價格相對較低,儲存方便。但是缺點也是十分明顯的:① 費時,包被抗原需4 ℃過夜,第2天檢測血清樣本時,當中各種過程所需的時間至少要6 h;② 檢測過程中溫度求高,在檢測樣本時,除洗滌外,所有的過程均需要在37 ℃的環(huán)境中進行,尤其是在酶和底物反應時,溫度對最終的OD值影響較大;③ 洗滌不完全時,容易造成背景值的偏高,進而造成假陽性。采用細胞抗原片的方法檢測血清樣本也有優(yōu)點:① 檢測時間短,抗原片還可以儲存。制作抗原片只需要1 h,檢測樣本需要3 h,制作完成的抗原片可置于-80 ℃保存,待有樣本檢測時可直接取出使用。② 靈敏度較ELISA法高,只有與陽性標本中的抗體結合的熒光二抗能激發(fā)目的熒光,目的熒光的強弱只與激發(fā)光的強弱相關,不受溫度等因素的影響。但是此種方法也存在不足:① 細胞生長緩慢,BCBL-1細胞為懸浮細胞,相對于普通的貼壁細胞生長周期更長。② 要求避光。因為熒光二抗中的熒光物質在白光環(huán)境下容易淬滅,所以孵育二抗和在熒光顯微鏡下觀察結果時不可過長時間暴露在白光下,進而造成假陰性。③ 費用相對較高,熒光顯微鏡的成本及維護和酶標儀表相比較高,不適用于臨床檢測樣本。

BCBL-1細胞培養(yǎng)和12孔免疫熒光原位雜交載玻片

表1 合肥市238例普通人群KSHV的感染情況 性別 數量(例) 陽性數 感染率(%) 男 148 9 6.1 女 90 9 10.0 合計 238 18 7.6圖3 KSHV陽性標本結果局部放大與細胞核染色對比
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