發(fā)布時間：2017-04-02 05:02

  本文關(guān)鍵詞：鼠傷寒沙門菌L型的體外膽汁誘導(dǎo)及豬膽囊鼠傷寒沙門菌L型的檢測研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的:(1)了解膽汁對鼠傷寒沙門菌形成L型的影響,建立鼠傷寒沙門菌L型的檢測方法。(2)了解豬膽囊攜帶鼠傷寒沙門菌L型的情況,探討膽囊攜帶鼠傷寒沙門菌L型的檢測方法。方法:(1)將鼠傷寒沙門菌接種于豬膽汁內(nèi),37℃需氧培養(yǎng),分別于培養(yǎng)1h~60d不同時間段取誘導(dǎo)物進(jìn)行常規(guī)細(xì)菌學(xué)分離培養(yǎng)與鑒定。(2)同時取誘導(dǎo)物經(jīng)濾菌器濾過后接種于PG液進(jìn)行細(xì)菌L型的非高滲分離培養(yǎng),分離細(xì)菌L型的純培養(yǎng)物。觀察細(xì)菌L型的形態(tài),培養(yǎng)特性,革蘭染色,細(xì)胞壁染色,糖發(fā)酵試驗(yàn)和血清學(xué)反應(yīng)。(3)用檢測沙門菌屬特異性基因inv A和鼠傷寒沙門菌特異性基因STM4495的二重PCR技術(shù),對細(xì)菌L型進(jìn)行檢測,并將擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行測序分析。(4)在貴陽市某屠宰場,采集284份豬膽囊標(biāo)本(膽囊組織142份和膽汁142份),采用常規(guī)細(xì)菌學(xué)方法進(jìn)行鼠傷寒沙門菌的分離培養(yǎng)和鑒定。(5)同時采用非高滲分離培養(yǎng)方法進(jìn)行細(xì)菌L型的分離培養(yǎng),并用二重PCR檢測細(xì)菌L型分離株的inv A和STM4495基因用于鼠傷寒沙門菌L型的鑒定。將部分PCR陽性產(chǎn)物片段進(jìn)行測序分析。結(jié)果:(1)采用常規(guī)細(xì)菌學(xué)分離培養(yǎng)法從培養(yǎng)1h~60d的誘導(dǎo)物均可分離出細(xì)菌型,經(jīng)鑒定為鼠傷寒沙門菌。(2)同時經(jīng)非高滲分離培養(yǎng)檢出細(xì)菌L型。細(xì)菌L型呈圓球形或卵圓形,在血培養(yǎng)基、麥康凱瓊脂培養(yǎng)基和LEM平板上不能生長,革蘭染色、細(xì)胞壁染色和血清學(xué)試驗(yàn)均呈陰性,而糖發(fā)酵試驗(yàn)結(jié)果無法判斷。(3)二重PCR檢測細(xì)菌L型inv A和STM4495基因可見與鼠傷寒沙門菌細(xì)菌型一致的284bp和915bp的擴(kuò)增產(chǎn)物。將兩者擴(kuò)增產(chǎn)物序列經(jīng)對比分析,發(fā)現(xiàn)其與Gene Bank數(shù)據(jù)庫中公布的鼠傷寒沙門菌的一致性分別為100%和99%。(4)采用常規(guī)細(xì)菌學(xué)方法,從284份膽囊標(biāo)本中,45份膽汁和104份膽囊組織檢出細(xì)菌,陽性率為52.46%(149/284)。經(jīng)革蘭染色和生化鑒定,檢出細(xì)菌17個種屬、共200株,包括革蘭陰性菌184株,革蘭陽性菌16株。革蘭陰性菌中檢出率最高是大腸埃希菌(32.75%,93/284),其他還包括氣單胞菌屬、陰溝腸桿菌、奇異變形桿菌、成團(tuán)泛菌、弗勞地枸櫞酸桿菌、遲鈍愛德華菌、假單胞菌屬、產(chǎn)堿桿菌屬、沙門菌屬、普通變形桿菌、巴斯德菌屬、肺炎克雷伯菌、異型枸櫞酸桿菌、產(chǎn)酸克雷伯菌。沙門菌經(jīng)血清學(xué)鑒定為4株科特布斯沙門菌和4株倫敦沙門菌。革蘭陽性菌均為鏈球菌屬(5.63%,16/284),以牛鏈球菌(81.25%,13/16)為主,余下為溫和鏈球菌。(5)采用非高滲分離培養(yǎng)法,90份膽汁和67份膽囊組織檢出細(xì)菌L型,陽性率為55.28%(157/284)。經(jīng)二重PCR檢測,9份膽囊標(biāo)本(3份膽汁和6份膽囊組織)檢出沙門菌L型,陽性率3.17%(9/284),其中4份檢出鼠傷寒沙門菌L型,5份檢出其他沙門菌L型。在9份沙門菌L型陽性的標(biāo)本中,5份膽囊標(biāo)本(3份膽汁和2份膽囊組織)常規(guī)細(xì)菌學(xué)檢測呈陰性,但非高滲分離培養(yǎng)檢出2株鼠傷寒沙門L型和3株其他沙門L型。將部分inv A和STM4495基因PCR產(chǎn)物片段進(jìn)行測序分析,發(fā)現(xiàn)與Gene Bank數(shù)據(jù)庫中鼠傷寒沙門菌的一致性均為99%。結(jié)論:(1)鼠傷寒沙門菌在豬膽汁的作用下可發(fā)生細(xì)胞壁缺陷變異,成為L型;(2)常規(guī)細(xì)菌學(xué)方法不能用于鼠傷寒沙門菌穩(wěn)定L型的分離培養(yǎng)與鑒定;(3)采用二重PCR技術(shù)檢測inv A和STM4495基因,可鑒定鼠傷寒沙門菌的穩(wěn)定L型;(4)經(jīng)常規(guī)細(xì)菌學(xué)方法檢測,發(fā)現(xiàn)豬膽囊可攜帶沙門菌和多種其他細(xì)菌,主要為革蘭陰性細(xì)菌,以大腸埃希菌的檢出率最高;(5)膽囊內(nèi)的鼠傷寒沙門菌L型,可采用非高滲分離培養(yǎng)法進(jìn)行分離培養(yǎng);(6)豬膽囊可以攜帶鼠傷寒沙門L型,使宿主成為鼠傷寒沙門菌的潛在攜帶者。
【關(guān)鍵詞】：膽汁 鼠傷寒沙門菌 細(xì)菌L型 膽囊
【學(xué)位授予單位】：貴陽醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R378.22
【目錄】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 略縮詞表10-11
• 引言11-12
• 材料與方法12-22
• 結(jié)果22-30
• 討論30-35
• 結(jié)論35-36
• 參考文獻(xiàn)36-40
• 綜述40-53
• 參考文獻(xiàn)48-53
• 作者簡歷53-54
• 致謝54-55
• 學(xué)位論文數(shù)據(jù)集55

【參考文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前9條

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  本文關(guān)鍵詞：鼠傷寒沙門菌L型的體外膽汁誘導(dǎo)及豬膽囊鼠傷寒沙門菌L型的檢測研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

本文編號：281887