本文關(guān)鍵詞：牛早期雄性與雌性胚胎增殖分化差異研究，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：本文為確定牛早期兩性胚胎在增殖分化方面的差異,對牛早期雄性及雌性胚胎細胞數(shù)、線粒體DNA拷貝數(shù)及端粒長度進行檢測,建立牛早期胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)及端粒長度檢測方法并為兩性胚胎增殖分化差異研究提供理論依據(jù)。1.使用本室保存的30枚雄性牛囊胚期性控胚胎及30枚牛雌性囊胚期性控胚胎做為實驗材料,抽取3枚雄性胚胎及3枚雌性胚胎驗證性別可靠程度,經(jīng)牙釉質(zhì)基因擴增驗證準確率為100%,對剩余27枚雄性及27枚雌性胚胎進行檢測。將胚胎解凍后除去透明帶,使用TritonX-100處理胚胎以增加胚胎細胞膜通透性,碘化丙啶染色后在熒光顯微鏡下拍照,分別對雌性及雄性胚胎細胞計數(shù),雄性胚胎細胞數(shù)為131.10±9.37高于雌性囊胚期胚胎細胞數(shù)的116.90±7.45,差異極顯著(P0.01)。2.利用超數(shù)排卵技術(shù)獲得56枚可用囊胚作為實驗材料,提取的胚胎DNA分為三部分,分別用于性別鑒定、線粒體DNA拷貝數(shù)檢測以及端粒長度檢測。使用牙釉質(zhì)基因巢式擴增PCR鑒定性別,29枚為雄性,27枚為雌性。從牛靜脈血基因組DNA擴增線粒體DNA單拷貝基因cox1(190bp),將目的基因克隆至pMD19-T載體以構(gòu)建重組質(zhì)粒,提取質(zhì)粒DNA計算拷貝數(shù),稀釋至拷貝數(shù)為108-103作為標準品制作標準曲線,采用熒光定量PCR法檢測雄性及雌性胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)。結(jié)果:建立了實時熒光定量PCR檢測牛囊胚期胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)的方法;雄性囊胚期胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)為897223±76723,雌性囊胚期胚胎線粒體拷貝數(shù)為693452±45236,牛囊胚期雄性胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)極顯著高于雌性胚胎(P0.01)。3.對29枚雄性胚胎和27枚雌性胚胎采用實時熒光定量方法測定兩性胚胎相對端粒長度,通過使用特異性引物對端粒(T)及單拷貝基因H2a.z(S)定量,計算telomere/H2a.z比率(T/S),得到胚胎相對端粒長度。結(jié)果:建立了實時定量PCR檢測牛早期胚胎端粒長度的方法;雄性囊胚期胚胎相對端粒長度為1.00±0.10,雌性囊胚期胚胎相對端粒長度為1.23±0.26,雌性胚胎相對端粒長度顯著高于雄性胚胎(P0.05)。
【關(guān)鍵詞】：牛 囊胚 細胞數(shù) 線粒體DNA 端粒長度
【學位授予單位】：塔里木大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：R321
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 第1章 文獻綜述8-21
• 1.1 哺乳動物早期胚胎發(fā)育8-12
• 1.1.1 哺乳動物早期胚胎發(fā)育8-9
• 1.1.2 雄性及雌性早期胚胎增殖分化差異9-10
• 1.1.3 胚胎質(zhì)量評定10-12
• 1.2 線粒體與線粒體DNA12-15
• 1.2.1 線粒體結(jié)構(gòu)與功能12
• 1.2.2 線粒體DNA的特點12-14
• 1.2.3 線粒體DNA與早期胚胎發(fā)育14-15
• 1.3 端粒與端粒酶15-19
• 1.3.1 端粒與端粒酶15-16
• 1.3.2 端粒長度測定方法16-19
• 1.4 研究目的及意義19-21
• 1.4.1 確定牛早期兩性胚胎細胞數(shù)差異19
• 1.4.2 確定牛早期兩性胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)差異19-20
• 1.4.3 確定牛早期兩性胚胎相對端粒長度差異20-21
• 第2章 牛雄性及雌性胚胎細胞數(shù)差異檢測21-33
• 2.1 材料與方法21-27
• 2.1.1 實驗材料21-22
• 2.1.2 實驗方法22-27
• 2.1.3 統(tǒng)計分析27
• 2.2 結(jié)果與分析27-30
• 2.2.1 牙釉質(zhì)基因引物驗證27-28
• 2.2.2 性控胚胎抽樣檢測結(jié)果28-29
• 2.2.3 胚胎細胞數(shù)檢測結(jié)果29-30
• 2.3 討論30-32
• 2.4 小結(jié)32-33
• 第3章 牛雄性及雌性胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)檢測33-49
• 3.1 材料與方法33-41
• 3.1.1 實驗材料33-35
• 3.1.2 實驗方法35-41
• 3.2 結(jié)果與分析41-46
• 3.2.1 線粒體DNA cox1基因克隆結(jié)果41-44
• 3.2.2 胚胎性別鑒定結(jié)果44
• 3.2.3 胚胎線粒體DNA拷貝數(shù)檢測結(jié)果44-46
• 3.3 討論46-48
• 3.4 小結(jié)48-49
• 第4章 牛雄性及雌性囊胚端粒相對長度測定49-57
• 4.1 材料與方法49-51
• 4.1.1 實驗材料49-50
• 4.1.2 實驗方法50-51
• 4.2 結(jié)果與分析51-54
• 4.2.1 胚胎性別鑒定51-52
• 4.2.2 胚胎端粒長度檢測52-54
• 4.3 討論54-56
• 4.4 小結(jié)56-57
• 結(jié)論57-58
• 參考文獻58-69
• 致謝69-70
• 作者簡介70

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本文編號：280486