本文關(guān)鍵詞：干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌生物被膜體外抑菌效果及分子機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：目的隨著癌癥放、化療和器官移植患者的增加,免疫抑制劑和廣譜抗生素的大量使用以及醫(yī)學(xué)植入裝置如導(dǎo)尿管、人工心瓣膜和置換關(guān)節(jié)等醫(yī)學(xué)材料使用的增多,以白假絲酵母菌為代表的念珠菌感染率和病死率均逐年快速增長,約占醫(yī)源性感染的50%。生物被膜是粘附于活體或非活體組織表面,由自身產(chǎn)生胞外多聚基質(zhì)(extracellular matrix, ECM)包裹的具有三維立體結(jié)構(gòu)的菌細(xì)胞群體。生物被膜是微生物主要的生存方式,和浮游細(xì)胞相比,80%的微生物感染是由生物被膜引起的。生物被膜作為天然屏障可顯著降低白假絲酵母菌對(duì)抗真菌藥物的敏感性,產(chǎn)生高度耐藥和持續(xù)感染。研究表明,白假絲酵母菌生物被膜對(duì)常見的抗真菌藥物存在明顯的耐藥性,如兩性霉素B、氟康唑、特比萘芬、制霉素等。生物被膜形成后藥物的50%抑菌濃度可增加到原來的10倍,而80%抑菌濃度將增加到原來的30到2000倍,極大地限制了生物被膜相關(guān)感染的防治。與治療細(xì)菌感染相關(guān)的龐大的、多門類的抗生素家族不同,抗真菌藥物的選擇具有很大的局限性。唑類在淺表性真菌感染的應(yīng)用極為廣泛,但自身的毒性作用不容忽視,而且真菌對(duì)其耐藥性已廣泛存在。以卡泊芬凈為代表的棘白菌素類藥物可以抑制細(xì)胞壁p-1,3-葡聚糖的合成,雖然對(duì)生物被膜感染極為有效,但也存在抗真菌譜窄的缺憾。因此尋找高效、廣譜、無毒的抗真菌藥物是臨床上亟待解決的難題。乳酸桿菌是一種革蘭氏陽性益生菌,它廣泛存在人體胃腸道、泌尿系統(tǒng)、生殖系統(tǒng)和口腔等。乳酸桿菌通過發(fā)酵碳水化合物、蛋白質(zhì)、氨基酸、脂類等產(chǎn)生多種代謝物。其中,乳酸、過氧化氫及細(xì)菌素具有抗菌作用。據(jù)文獻(xiàn)報(bào)道,乳酸桿菌代謝產(chǎn)物對(duì)大腸埃希菌、銅綠假單胞菌、金黃色葡萄球菌和白假絲酵母菌有抑菌作用,并且對(duì)人體無毒副作用。因此,乳酸桿菌代謝物非常有潛力開發(fā)作為治療白假絲酵母菌生物被膜感染的非抗生素類藥物。目前國內(nèi)外并沒有干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)體外白假絲酵母菌生物被膜抑菌效果和抑菌途徑的報(bào)道。本實(shí)驗(yàn)將檢測(cè)干酪乳酸桿菌代謝物是否對(duì)體外白假絲酵母菌生物被膜具有抑菌作用,并且通過蛋白組學(xué)技術(shù)進(jìn)一步研究干酪乳酸桿菌代謝物的抑菌機(jī)制。方法1.將含有干酪乳酸桿菌代謝物的固體培養(yǎng)基搗碎,通過萃取、蒸餾的方式濃縮干酪乳酸桿菌代謝物。2.采用XTT減低法測(cè)定干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌游離態(tài)及生物被膜態(tài)的最小抑菌濃度(MICso)。3.定量檢測(cè)不同濃度的干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌生物被膜形成、成熟階段的體外代謝活動(dòng)的影響。4.通過時(shí)間殺菌曲線檢測(cè)干酪乳酸桿菌代謝物的濃度和作用時(shí)間對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的影響。5.在干酪乳酸桿菌代謝物的刺激下,使用倒置顯微鏡觀察白假絲酵母菌酵母相向菌絲相的形態(tài)學(xué)轉(zhuǎn)變。6.梯度微量稀釋法(棋盤法)檢測(cè)干酪乳酸桿菌代謝物與兩性霉素B的聯(lián)用對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的體外抑菌效果。7.實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌中ALS1、ALS3、 HWP1、BCR1、EFG1、TEC1六種基因的差異表達(dá)。8.采用雙向凝膠電泳(two-dimensional gel electrophoresis,2-DE)技術(shù)對(duì)比干酪乳酸桿菌代謝物處理前后白假絲酵母菌蛋白質(zhì)的表達(dá)差異,利用MALDI-TOF-TOF質(zhì)譜儀對(duì)差異蛋白進(jìn)行分析,通過BioTools軟件搜索NCBI數(shù)據(jù)庫,明確蛋白質(zhì)的名稱和作用。結(jié)果1.干酪乳酸桿菌代謝物作用于白假絲酵母菌浮游細(xì)胞、生物被膜的MIC80分別為1：256和1：128。菌株YEM30對(duì)干酪乳酸桿菌代謝物敏感,代謝物的體外抑菌活性較強(qiáng)。2.干酪乳酸桿菌代謝物可以抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成和成熟的生物被膜,抑菌效果與代謝物的濃度正相關(guān)。3.干酪乳酸桿菌代謝物明顯抑制生物被膜中白假絲酵母菌的代謝活性,隨著藥物濃度的升高,抑菌作用明顯增強(qiáng)。4.干酪乳酸桿菌代謝物可以阻斷白假絲酵母菌形態(tài)學(xué)的轉(zhuǎn)變并呈現(xiàn)出濃度依賴性。隨著干酪乳酸桿菌代謝物濃度的升高,白假絲酵母菌量減少、菌絲的生長受到不同程度的抑制。5.干酪乳酸桿菌代謝物單用或與AMB聯(lián)用時(shí),藥物的抑菌率從50%提升至84%。兩藥聯(lián)用能夠減少AMB的使用劑量,降低藥物的毒副作用,從而達(dá)到理想的治療效果。6. ALS1、ALS3、HWP1、BCR1、EFG1、TEC1六種基因在干酪乳酸桿菌代謝物處理前后的表達(dá)量并沒有出現(xiàn)顯著變化,無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。7.從雙向電泳圖譜上獲得6個(gè)顯著蛋白斑點(diǎn),對(duì)其中4個(gè)進(jìn)行鑒定。在干酪乳酸桿菌代謝物的刺激下,烯醇酶(Eno1)、蘋果酸脫氫酶(Mdhlp)、泛素連接酶(Ubrl)表達(dá)升高,己糖激酶(HK)表達(dá)下降。結(jié)論干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌生物被膜的形成和成熟兩個(gè)階段均存在抑制作用,并能干擾白假絲酵母菌酵母相向菌絲相的轉(zhuǎn)變。表達(dá)量上調(diào)的烯醇酶、蘋果酸脫氫酶、泛素連接酶和下調(diào)的己糖激酶通過參與免疫應(yīng)答、群體感應(yīng)、菌絲生長的途徑來抑制白假絲酵母菌生物被膜的形成。綜上所述,干酪乳酸桿菌代謝物作為非抗生素類抗真菌藥物具有潛在的應(yīng)用價(jià)值。
【關(guān)鍵詞】：白假絲酵母菌 生物被膜 干酪乳酸桿菌代謝物 抑菌作用 雙向電泳
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號(hào)】：R379
【目錄】：

• 中文摘要6-9
• 英文摘要9-13
• 符號(hào)說明13-15
• 前言15-18
• 實(shí)驗(yàn)材料18-22
• 實(shí)驗(yàn)方法22-31
• 實(shí)驗(yàn)結(jié)果31-36
• 討論36-39
• 結(jié)論39-40
• 綜述40-49
• 參考文獻(xiàn)49-56
• 致謝56-57
• 攻讀碩士學(xué)位期間發(fā)表論文目錄57-58
• 附件58

【相似文獻(xiàn)】

中國期刊全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 蔡蕓;趙鐵梅;王睿;;中國生物被膜相關(guān)研究文獻(xiàn)分析[J];中國循證醫(yī)學(xué)雜志;2008年11期

2 劉彤;陳晶瑜;韓北忠;李春雷;;單核增生李斯特氏菌生物被膜的形成及控制[J];食品研究與開發(fā);2010年02期

3 葉楓,陳順存,鐘淑卿;呼吸道的生物被膜病[J];實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志;2000年01期

4 郭生玉,李勝岐,劉勇,孫繼梅,周秀珍;銅綠假單胞菌感染豚鼠后生物被膜形成的研究[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2003年04期

5 李鴻雁,夏前明,李福祥,全燕;呼吸道生物被膜病[J];西南軍醫(yī);2005年01期

6 王玎;李興祿;;生物被膜細(xì)菌的耐藥機(jī)制及其防治[J];國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志;2008年02期

7 張連波;高慶國;張廣;;銅綠假單胞菌生物被膜研究進(jìn)展[J];中國實(shí)驗(yàn)診斷學(xué);2009年01期

8 梁歌宏;宋詩鐸;孫二琳;王哲;祁偉;;嗜麥芽窄食單胞菌生物被膜形成的體外抗菌活性研究[J];天津醫(yī)藥;2011年08期

9 金城;;李斯特菌生物被膜形成的調(diào)控[J];微生物學(xué)通報(bào);2011年09期

10 梁林慧;劉德穩(wěn);;生物被膜與細(xì)菌相關(guān)感染的機(jī)制[J];醫(yī)學(xué)信息(中旬刊);2011年09期

中國重要會(huì)議論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 盧中秋;趙光舉;;呼吸道細(xì)菌生物被膜感染研究進(jìn)展[A];2010全國中西醫(yī)結(jié)合危重病、急救醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2010年

2 趙善良;;生物被膜與生物被膜病——呼吸系統(tǒng)致病細(xì)菌耐藥的又一個(gè)問題[A];結(jié)核與肺部疾病論文集[C];2006年

3 卜倩倩;伍勇;;糞腸球菌生物被膜形成的動(dòng)態(tài)觀察及早期相關(guān)基因的表達(dá)研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七次全國中青年檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2012年

4 李聰然;錢皎;王睿;;銅綠假單胞菌生物被膜密度感知系統(tǒng)分子機(jī)制的研究進(jìn)展[A];創(chuàng)新藥物及新品種研究、開發(fā)學(xué)術(shù)研討會(huì)論文集[C];2006年

5 李聰然;錢皎;王睿;;銅綠假單胞菌生物被膜密度感知系統(tǒng)分子機(jī)制的研究進(jìn)展[A];2006第六屆中國藥學(xué)會(huì)學(xué)術(shù)年會(huì)論文集[C];2006年

6 蔡蕓;柴棟;梁蓓蓓;白楠;王睿;;細(xì)菌生物被膜研究文獻(xiàn)計(jì)量分析[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第七屆全國呼吸道感染學(xué)術(shù)大會(huì)暨第一屆多學(xué)科抗感染治療學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2011年

7 劉原;柯蕊;和平;潘雙;李亞明;趙玉杰;楊芬;;鮑曼不動(dòng)桿菌生物被膜與耐藥性及外排泵系統(tǒng)關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)呼吸病學(xué)年會(huì)——2013第十四次全國呼吸病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2013年

8 金卉;周銳;康名松;羅銳;蔡旭旺;陳煥春;;副豬嗜血桿菌地方分離株和標(biāo)準(zhǔn)菌株的生物被膜形成研究[A];中國畜牧獸醫(yī)學(xué)會(huì)2006學(xué)術(shù)年會(huì)論文集（下冊(cè)）[C];2006年

9 周穎;曲迪;侯征;薛小燕;羅曉星;;RIP衍生物抑制葡萄球菌生物被膜形成的試驗(yàn)研究[A];2013年中國藥學(xué)大會(huì)暨第十三屆中國藥師周論文集[C];2013年

10 鄒彬彬;漆涌;伍勇;;糞腸球菌相關(guān)基因,QS-frs系統(tǒng)與生物被膜形成關(guān)系的研究[A];中華醫(yī)學(xué)會(huì)第八次全國檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議暨中華醫(yī)學(xué)會(huì)檢驗(yàn)分會(huì)成立30周年慶典大會(huì)資料匯編[C];2009年

中國重要報(bào)紙全文數(shù)據(jù)庫 前5條

1 北京朝陽醫(yī)院 張洪玉教授;生物被膜病在作怪[N];健康報(bào);2000年

2 張洪玉;生物被膜病與慢性肺部感染[N];中國高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

3 中南大學(xué)湘雅醫(yī)院 曾立明;細(xì)菌蓋“棉被”藥物難顯效[N];大眾衛(wèi)生報(bào);2004年

4 李聰然　錢皎;密度感知系統(tǒng)研究——為控制PA耐藥提供新思路[N];中國醫(yī)藥報(bào);2007年

5 記者 董敬民;北京局科研工作再傳捷報(bào)[N];中國國門時(shí)報(bào);2005年

中國博士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 周光琪;Shewanella oneidensis呼吸作用對(duì)生物被膜形成的影響及其分子基礎(chǔ)研究[D];浙江大學(xué);2015年

2 侯博;TolC在腸外致病性大腸桿菌中的生物學(xué)功能研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2014年

3 陸秀紅;十字花科黑腐病菌轉(zhuǎn)錄后全局調(diào)控蛋白R(shí)smA_(Xcc)調(diào)控生物被膜形成的分子機(jī)理研究[D];廣西大學(xué);2014年

4 張連波;密度感應(yīng)系統(tǒng)對(duì)銅綠假單胞菌致病力及生物被膜形成影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];吉林大學(xué);2008年

5 崔冬清;氧濃度變化對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜生成的影響[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2009年

6 孔晉亮;氨溴索對(duì)銅綠假單胞菌生物被膜作用的體外和體內(nèi)研究[D];廣西醫(yī)科大學(xué);2010年

7 董洪燕;腸炎沙門氏菌生物被膜形成相關(guān)基因鑒定、缺失株構(gòu)建及生物學(xué)特性研究[D];揚(yáng)州大學(xué);2011年

8 王瑛;大環(huán)內(nèi)酯類抗菌藥對(duì)流感嗜血桿菌生物被膜的影響[D];中國人民解放軍軍醫(yī)進(jìn)修學(xué)院;2009年

9 達(dá)來寶力格;胸膜肺炎放線桿菌生物被膜突變體的篩選與生物學(xué)特性的研究[D];華中農(nóng)業(yè)大學(xué);2008年

10 李妍;雙聯(lián)芐化合物riccardin D抗念珠菌生物被膜研究[D];山東大學(xué);2012年

中國碩士學(xué)位論文全文數(shù)據(jù)庫 前10條

1 李穎佳;雙J管生物被膜細(xì)菌耐藥及其相關(guān)基因研究[D];中南大學(xué);2011年

2 黃衛(wèi)鋒;以群感效應(yīng)分子為靶點(diǎn)的魚腥草素鈉抗銅綠假單胞菌生物被膜機(jī)制的研究[D];安徽中醫(yī)藥大學(xué);2015年

3 馮凡;干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌生物被膜體外抑菌效果及分子機(jī)制的研究[D];山東大學(xué);2015年

4 孟祥朋;豬鏈球菌生物被膜的生物學(xué)特性及噬菌體裂解酶對(duì)生物被膜的降解作用[D];上海交通大學(xué);2011年

5 梁歌宏;嗜麥芽窄食單胞菌生物被膜的鑒定和抗生素的體外抗菌活性研究[D];天津醫(yī)科大學(xué);2008年

6 尚俊麗;單核細(xì)胞增生李斯特菌生物被膜形成機(jī)制的轉(zhuǎn)錄水平研究[D];華中師范大學(xué);2014年

7 劉紅波;生物被膜分散活性物質(zhì)與抗生素聯(lián)合消除生物被膜作用的研究[D];中南大學(xué);2014年

8 康秀敏;嗜麥芽窄食單胞菌生物被膜相關(guān)基因的功能基因組學(xué)篩選和調(diào)控分子機(jī)理[D];北京理工大學(xué);2015年

9 白寧;細(xì)菌生物被膜體外模型的建立及重組溶葡球菌酶對(duì)葡萄球菌生物被膜的體外清除作用[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

10 陳秋云;生物被膜引起食品生物危害的研究[D];中國農(nóng)業(yè)大學(xué);2004年

  本文關(guān)鍵詞：干酪乳酸桿菌代謝物對(duì)白假絲酵母菌生物被膜體外抑菌效果及分子機(jī)制的研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

，

本文編號(hào)：276009