本文關(guān)鍵詞：角膜混濁小鼠模型獲得及其分子基礎(chǔ)研究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：乙烷基亞硝基脲(ENU)是一種人工合成的高效基因誘變劑,通過ENU誘導(dǎo)小鼠可獲得大量的人類疾病動(dòng)物模型,用于研究相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展機(jī)制以及對突變基因的功能研究。本文通過ENU誘變技術(shù)獲得一例角膜混濁小鼠模型,并對其突變基因進(jìn)行成功定位與鑒定,現(xiàn)匯報(bào)如下：1、ENU誘變獲得一例角膜混濁小鼠模型ENU腹腔注射40只雄性C57BL/6J(B6)小鼠,待其恢復(fù)生殖能力后與同品系雌鼠配種,并對其后代進(jìn)行篩選,獲得多趾、小眼、短尾、瞳孔散大、角膜混濁等異常表型小鼠。本文以其中一例角膜混濁小鼠為研究對象,將該小鼠與正常B6小鼠配種,觀察并記錄63只后代,其中15只小鼠具有角膜混濁表型。組織學(xué)分析角膜混濁小鼠眼球發(fā)現(xiàn),突變小鼠角膜基質(zhì)層可見明顯的新生血管,成纖維細(xì)胞明顯增多,角膜上皮出現(xiàn)明顯的角質(zhì)層且通透性增加。2、角膜混濁小鼠突變基因的定位將B6背景角膜混濁小鼠與DBA(D2)小鼠配種獲得F1代小鼠,再將F1代小鼠繼續(xù)回交野生型B6小鼠獲得[(B6×D2)F1×xB6]N2代小鼠。篩選F1突變雜合子所生N2代小鼠612只,其中26只小鼠攜帶角膜混濁表型。突變基因連鎖分析結(jié)果顯示,突變基因與微衛(wèi)星D12Mit285連鎖(LOD值3.78),初步將該基因定位于12號染色體上。在此基礎(chǔ)上繼續(xù)選擇可用的微衛(wèi)星對該突變基因進(jìn)行精確定位,最終將該突變基因定位于12號染色體9.04cM之內(nèi)。3、角膜混濁小鼠突變基因的鑒定通過對突變基因定位區(qū)域內(nèi)逐個(gè)基因功能的分析,發(fā)現(xiàn)與眼球發(fā)育相關(guān)4個(gè)候選基因：mycn、adam17、sdc1、osr1,故分別PCR或RT-PCR擴(kuò)增候選目的基因,切膠回收后測序,將以上測序結(jié)果與本中心野生型B6小鼠基因序列進(jìn)行對比,篩查突變位點(diǎn)。序列比對結(jié)果顯示在mycn基因編碼區(qū)1217bp處發(fā)生T到C的轉(zhuǎn)換,導(dǎo)致MYCN蛋白編碼區(qū)第406位氨基酸發(fā)生由V(纈氨酸)到A(丙氨酸)突變,該突變位于MYCN蛋白螺旋-環(huán)-螺旋結(jié)構(gòu)域(bHLH)。結(jié)論：本文獲得一例角膜病小鼠模型,為相關(guān)疾病的研究提供動(dòng)物模型。首次發(fā)現(xiàn)mycn基因突變可引起小鼠角膜混濁表型,但其機(jī)制不明,深入研究將豐富對mycn基因生物學(xué)功能的了解。
【關(guān)鍵詞】：ENU 角膜混濁 基因定位 Mycn基因 人類疾病動(dòng)物模型
【學(xué)位授予單位】：揚(yáng)州大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R772.2;R-332
【目錄】：

• 論文摘要3-5
• Abstract5-8
• 符號說明8-9
• 第一部分 文獻(xiàn)綜述9-23
• 第一章 ENU誘變技術(shù)研究進(jìn)展9-16
• 1 ENU誘變的機(jī)理9-10
• 2 ENU誘變篩查方法10-11
• 3 國內(nèi)外ENU誘變研究進(jìn)展11-13
• 4 參考文獻(xiàn)13-16
• 第二章 角膜混濁及相關(guān)基因16-23
• 1 眼球的構(gòu)造及角膜16
• 2 角膜混濁的原因16-18
• 3 角膜混濁相關(guān)基因18-19
• 4 參考文獻(xiàn)19-23
• 第二部分 實(shí)驗(yàn)研究23-53
• 第三章 ENU誘變獲得一例角膜混濁小鼠模型23-32
• 1 材料與方法23-26
• 2 結(jié)果26-28
• 3 討論28-29
• 4 參考文獻(xiàn)29-32
• 第四章 角膜混濁小鼠突變基因的定位32-42
• 1 材料與方法32-34
• 2 結(jié)果34-39
• 3 討論39-40
• 4 參考文獻(xiàn)40-42
• 第五章 角膜混濁小鼠突變基因的鑒定42-53
• 1 材料與方法42-45
• 2 結(jié)果45-49
• 3 討論49-51
• 4 參考文獻(xiàn)51-53
• 致謝53-54
• 攻讀學(xué)位期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文目錄54-55

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本文編號：274210