【摘要】：目的:探討骨痹合劑干預(yù)大鼠腰椎退變模型的可能作用機(jī)制,并觀察骨痹合劑干預(yù)腰椎骨關(guān)節(jié)炎的臨床療效。方法:選用12只孕期15天的健康合格SD大鼠放入不同的籠內(nèi)單獨(dú)飼養(yǎng),待幼鼠出生。幼鼠出生第10天,把88只幼鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、生理鹽水組、骨痹合劑組和氨糖美辛組,四組均在腹腔麻醉下行手術(shù)去雙前肢。在去雙前肢大鼠5月齡時(shí)對(duì)生理鹽水組、骨痹合劑組和氨糖美辛組分別給予相應(yīng)藥物干預(yù),空白對(duì)照組不做任何干預(yù),持續(xù)干預(yù)4周后分別處死各組大鼠,腰椎標(biāo)本通過(guò)HE、藏紅固綠染色觀察組織形態(tài)學(xué)、骨計(jì)量學(xué)分析及Real-Time PCR、western blot檢測(cè)Aggrecan、COL-II、MMP-13、IL-6、ALP、OPG。將符合納入標(biāo)準(zhǔn)的66例腰椎骨關(guān)節(jié)炎患者隨機(jī)分為骨痹合劑組和西藥對(duì)照組,干預(yù)時(shí)間為4周,分別在治療前、治療2周、治療4周、治療后8周四個(gè)時(shí)間節(jié)點(diǎn)采用改良JOA腰痛疾患療效評(píng)定、VAS、Roland-Morris評(píng)分進(jìn)行療效評(píng)估。結(jié)果:骨痹合劑組HE和藏紅固綠染色顯示腰椎間盤(pán)纖維環(huán)結(jié)構(gòu)完好,膠原纖維粗糙,呈輕微玻璃樣改變,膠原纖維間成纖維細(xì)胞表達(dá)增加,髓核略微皺縮,軟骨終板完整,生長(zhǎng)軟骨排列緊密。氨糖美辛組纖維環(huán)結(jié)構(gòu)仍然完好,膠原纖維粗糙,呈輕微玻璃樣改變,膠原纖維間成纖維細(xì)胞表達(dá)增加,髓核稍微收縮,終板的鈣化層變厚。而空白對(duì)照組和生理鹽水組纖維環(huán)有幾個(gè)較大的放射狀裂隙,與軟骨終板分離。部分髓核邊緣與纖維環(huán)分離,有部分突出趨勢(shì)。軟骨終板有破壞征象,部分與椎體分離。骨計(jì)量學(xué)分析發(fā)現(xiàn)骨痹合劑組腰椎軟骨終板下骨小梁致密,分離度小,面積較大,與其他三個(gè)組比較并具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P0.05)。Real-Time PCR檢測(cè)大鼠腰椎間盤(pán)提示骨痹合劑組COL-II m RNA表達(dá)量較其他組明顯上調(diào)(P0.05);MMP-13 m RNA表達(dá)量較其他組明顯下調(diào)(P0.05);骨痹合劑組Aggrecan m RNA表達(dá)量較其他三組明顯上調(diào)(P0.05);Real-TimePCR檢測(cè)腰椎椎體IL-6 m RNA表達(dá)量,氨糖美辛組和骨痹合劑組表達(dá)均較空白對(duì)照組和生理鹽水組下調(diào)(P0.05),且氨糖美辛組的表達(dá)量低于骨痹合劑組(P0.05);ALP、OPG m RNA表達(dá)量提示骨痹組較其他組明顯上調(diào)(P0.05)。Western blot檢測(cè)椎間盤(pán)組織提示骨痹合劑組COL-II和Aggrecan蛋白含量較其他組均上調(diào)(P0.05),而MMP-13蛋白表達(dá)量較其他組均下調(diào)(P0.05),大鼠腰椎椎體OPG骨痹合劑組較其他組明顯上調(diào)(P0.05),IL-6蛋白表達(dá)量氨糖美辛組表達(dá)最低。對(duì)骨痹合劑組與西藥對(duì)照組干預(yù)后第2周、第4周、第8周時(shí)間節(jié)點(diǎn)的VAS、Roland-Morris評(píng)分、改良JOA評(píng)分進(jìn)行比較,兩組治療前跟治療后統(tǒng)計(jì)比較(P0.05)。其中VAS評(píng)分中,第2周、第4周兩組之間評(píng)分比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05),但是在第8周,骨痹合劑組VAS評(píng)分優(yōu)于西藥對(duì)照組(P0.05);JOA評(píng)分中,兩組在第4周、第8周開(kāi)始出現(xiàn)顯著差異(P0.05);Roland-Morris評(píng)分中,兩組在第4周、第8周開(kāi)始出現(xiàn)顯著差異(P0.05),Roland-Morris評(píng)分顯示4周治療結(jié)束后兩組的腰椎功能障礙持續(xù)得到改善,且骨痹合劑組評(píng)分優(yōu)于西藥對(duì)照組。而改良JOA評(píng)分計(jì)算總體療效率比較,骨痹合劑組有效率為96.97%,顯效率為66.67%,西藥對(duì)照組有效率87.87%,顯效率57.58%,兩組總體療效比較無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:骨痹合劑可延緩去雙前肢直立大鼠腰椎退變模型的椎間盤(pán)和終板下骨小梁的退變;同時(shí)骨痹合劑和氨糖美辛均能保護(hù)腰椎椎間盤(pán)組織的軟骨終板的退變。骨痹合劑可能是通過(guò)上調(diào)COL-II、Aggrecan m RNA和下調(diào)MMP-13 m RNA和蛋白表達(dá)發(fā)揮延緩去雙前肢直立大鼠腰椎退變模型椎間盤(pán)組織退變的部分作用,同時(shí)骨痹合劑可能是通過(guò)抑制IL-6 m RNA和蛋白表達(dá),上調(diào)ALP、OPG m RNA表達(dá)發(fā)揮延緩去雙前肢直立大鼠腰椎退變模型的椎體退變的部分作用機(jī)制。兩組臨床總體療效率無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,但8周時(shí)間節(jié)點(diǎn)各項(xiàng)評(píng)分比較顯示骨痹合劑組能控制疼痛后續(xù)效應(yīng),提高患者生活質(zhì)量,能有效改善腰痛的癥狀和體征,穩(wěn)定恢復(fù)期癥狀等方面優(yōu)于西藥對(duì)照組,表明增加骨痹合劑的綜合療法可以改善腰椎骨關(guān)節(jié)炎患者的生活功能障礙指數(shù)、穩(wěn)定維持患者恢復(fù)期癥狀,隨著療程的延長(zhǎng),療效差異更明顯。
【圖文】：

有部分突出趨勢(shì)。軟骨終板有破壞征象，部分與椎體分離。生長(zhǎng)軟骨可見(jiàn)明顯的裂隙，透明軟骨幾乎看不見(jiàn)。（圖1、2）。氨糖美辛組：纖維環(huán)結(jié)構(gòu)仍然完好，膠原纖維粗糙，呈輕微玻璃樣改變，膠原纖維間成纖維細(xì)胞表達(dá)增加，髓核稍微收縮，終板的鈣化層變厚。潮標(biāo)向軟骨表面移動(dòng)（圖 3）。骨痹合劑組：纖維環(huán)結(jié)構(gòu)仍然完好，膠原纖維粗糙，呈輕微玻璃樣改變，膠原纖維間成纖維細(xì)胞表達(dá)增加，髓核略微皺縮，軟骨終板完整，鈣化層和非鈣化層呈潮標(biāo)分布，生長(zhǎng)軟骨呈密集的柱狀排列。（圖 4）。圖 1：空白對(duì)照組×50 圖 2：生理鹽水組×50圖 3：氨糖美辛組×50 圖 4：骨痹合劑組×503.2.2 骨組織計(jì)量學(xué)分析3.2.2.1 腰椎軟骨終板軟骨下骨骨小梁體積如圖 5 所示，骨痹合劑組軟骨下骨小梁體積分?jǐn)?shù)比與其他三組比較明顯增加（P＜0.05），差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；而空白對(duì)照組、生理鹽水組及氨糖美辛組三組比較（P＞0.05），差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。3.2 腰椎形態(tài)學(xué)改變

第一部分 骨痹合劑對(duì)腰椎退變大鼠模型的機(jī)制研究3.2.1 HE 染色形態(tài)學(xué)改變空白對(duì)照組及生理鹽水組鏡下觀察結(jié)果：纖維環(huán)有幾個(gè)較大的放射狀裂隙，與軟骨終板分離。部分髓核邊緣與纖維環(huán)分離，有部分突出趨勢(shì)。軟骨終板有破壞征象，部分與椎體分離。生長(zhǎng)軟骨可見(jiàn)明顯的裂隙，透明軟骨幾乎看不見(jiàn)。（圖1、2）。氨糖美辛組：纖維環(huán)結(jié)構(gòu)仍然完好，膠原纖維粗糙，呈輕微玻璃樣改變，膠原纖維間成纖維細(xì)胞表達(dá)增加，髓核稍微收縮，終板的鈣化層變厚。潮標(biāo)向軟骨表面移動(dòng)（圖 3）。骨痹合劑組：纖維環(huán)結(jié)構(gòu)仍然完好，膠原纖維粗糙，呈輕微玻璃樣改變，膠原纖維間成纖維細(xì)胞表達(dá)增加，，髓核略微皺縮，軟骨終板完整，鈣化層和非鈣化層呈潮標(biāo)分布，生長(zhǎng)軟骨呈密集的柱狀排列。（圖 4）。3.2 腰椎形態(tài)學(xué)改變
【學(xué)位授予單位】：云南中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R684.3;R-332

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本文編號(hào)：2710013