本文關(guān)鍵詞：酸性環(huán)境對人臍帶間充質(zhì)干細胞的影響，，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：間充質(zhì)干細胞(Mesenchymal Stem Cell, MSCs)是一類具有自我更新和多向分化潛能的成體干細胞,因能分化為間質(zhì)組織而得名,在特定的體內(nèi)外環(huán)境下,能夠誘導分化成為多種組織細胞。人臍帶間充質(zhì)干細胞(Human Umbilical Cord Mesenchymal Stem Cell, HUMSCs)來源于新生兒臍帶華通氏膠,取材方便,來源廣泛、不受倫理限制、免疫原性低、體外增殖能力強等特點,因此,HUMSCs作為細胞治療中的種子細胞成為近年來再生醫(yī)學,細胞移植及癌癥治療的研究熱點。研究表明在局部缺血和炎癥環(huán)境中,如呼吸道過敏性哮喘、類風濕性關(guān)節(jié)炎、動脈粥樣硬化、腫瘤微環(huán)境等,由于低氧誘導發(fā)生無氧糖酵解,導致乳酸積累,進而引起胞外環(huán)境的酸化,不利于正常組織細胞生存。而HUMSCs作為種子細胞用于細胞治療的機理尚未有相關(guān)報道,本研究選用HUMSCs為細胞模型,體外模擬病理性酸性環(huán)境,探討酸性環(huán)境對HUMSCs的存活與遷移能力的影響,同時初步研究HUMSCs在酸性條件下的細胞應答機制。方法：采用“爬片”分離獲得HUMSCs;流式細胞術(shù)檢測HUMSCs的表面標記物；Real-time PC R檢測HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體(TDAG8,GPR4, OGR1和G2A)的表達；Real-time PCR檢測酸性條件刺激下HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體(TDAG8,GPR4,OGR1口G2A)的表達；MTT法檢測HUMSCs在酸性條件下的存活能力；Micro Chemotaxis Chamber法檢測HUMSCs在酸性條件下的遷移能力。結(jié)果：利用爬片法成功分離培養(yǎng)獲得HUMSCs,流式細胞儀檢測顯示HUMSCs高表達CD105、CD90、CD73、CD29,低表達CD45、CD34 和 HLA-DR。 Real Time PCR檢測發(fā)現(xiàn)HUMSCs細胞中GPR4受體的相對表達量顯著高于其它幾個受體(P口0.01)。其次是TDAG8和OGR1受體的表達量(TDAG8OGR1), G2A幾乎不表達。Real Time PC R檢測發(fā)現(xiàn)TDAG8在pH6.8時高表達；MTT法檢測結(jié)果顯示在pH6.8、pH7.2、pH7.6條件下,人臍帶間充質(zhì)干細胞的細胞存活率沒有顯著性；Micro Chemotaxis Chamber法檢測pH6.8刺激HUMSCs促進細胞遷移。結(jié)論：在酸性環(huán)境中人臍帶間充質(zhì)干細胞高表達質(zhì)子感知受體TDAG8,并且在酸性環(huán)境中,HUMSCs可以存活,即人臍帶間充質(zhì)干細胞能夠適應酸性環(huán)境,同時酸性刺激促進HUMSCs遷移。該研究首次探討了酸性環(huán)境對HUMSCs存活與轉(zhuǎn)移的影響,為后續(xù)深入研究HUMSCs作為種子細胞用于細胞治療機制提供了一定的基礎(chǔ)理論研究。
【關(guān)鍵詞】：人臍帶間充質(zhì)干細胞 酸性環(huán)境 質(zhì)子感知受體 存活 遷移
【學位授予單位】：內(nèi)蒙古大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2015
【分類號】：R329
【目錄】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-11
• 英文縮略詞表11-12
• 一 前言12-14
• 二 材料與方法14-25
• 2.1 主要試劑及實驗材料14
• 2.2 主要儀器設備14-15
• 2.3 常用溶液的配置15-16
• 2.4 人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUMSCs)的分離培養(yǎng)16-18
• 2.4.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUMSCs)的分離16
• 2.4.2 人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUMSCs)的傳代16-17
• 2.4.3 人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUMSCs)的凍存17-18
• 2.4.4 人臍帶間充質(zhì)干細胞(HUMSCs)的復蘇18
• 2.5 人臍帶間充質(zhì)干細胞生物學特性鑒定18-23
• 2.5.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞形態(tài)學的觀察18
• 2.5.2 人臍帶間充質(zhì)干細胞標準曲線的制作18
• 2.5.3 人臍帶間充質(zhì)干細胞生長曲線的制作18-19
• 2.5.4 人臍帶間充質(zhì)干細胞表面標記物的鑒定19
• 2.5.5 人臍帶間充質(zhì)干細胞總RNA的提取19-20
• 2.5.6 總RNA中的基因DNA的去除20
• 2.5.7 人臍帶間充質(zhì)干細胞cDNA的獲得20-21
• 2.5.8 Real Time PCR檢測HUMSCs中四種質(zhì)子感知受體mRNA的表達量21-23
• 2.6 MTT法檢測人臍帶間充質(zhì)干細胞在酸性條件下的存活能力23
• 2.7 Micro Chemotaxis Chamber檢測人臍帶間充質(zhì)干細胞在酸性條件下的遷移能力23-25
• 三 結(jié)果與分析25-32
• 3.1 人臍帶間充質(zhì)干細胞的分離培養(yǎng)及形態(tài)觀察25-26
• 3.2 人臍帶間充質(zhì)干細胞標準曲線的繪制26
• 3.3 人臍帶間充質(zhì)干細胞生長曲線的繪制26-27
• 3.4 人臍帶間充質(zhì)干細胞表面標記物鑒定27-28
• 3.5 人臍帶間充質(zhì)干細胞中質(zhì)子感知受體mRNA的表達28-30
• 3.6 不同pH刺激后細胞內(nèi)質(zhì)子感知受體mRNA的表達量30-31
• 3.7 人臍帶間充質(zhì)干細胞在酸性條件下的存活能力31
• 3.8 人臍帶間充質(zhì)干細胞在酸性條件下的遷移能力31-32
• 四 討論32-33
• 五 結(jié)論33-34
• 文獻綜述34-39
• 參考文獻39-45
• 致謝45

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本文編號：269255