本文關(guān)鍵詞：孤兒受體Nr4a對濾泡輔助型T細(xì)胞分化和功能的影響探究，由筆耕文化傳播整理發(fā)布。

【摘要】：生物體清除病原體的過程中,淋巴細(xì)胞從初級淋巴器官發(fā)育成熟后歸巢至次級淋巴器官,在次級淋巴器官中發(fā)生免疫反應(yīng)。生發(fā)中心(Germinal Center,GC)是機(jī)體形成高親和力抗體抵抗外界微生物感染的必要條件。正常的GC反應(yīng)需要一類特異分化的CD4+T細(xì)胞提供輔助信號。這群CD4+T細(xì)胞受抗原呈遞細(xì)胞刺激活化后遷移至濾泡區(qū),輔助B細(xì)胞形成GC,因此被命名為濾泡輔助型T細(xì)胞(Follicular helper T cells,Tfh cells)。目前,關(guān)于CD4+T細(xì)胞如何分化成為Tfh細(xì)胞以及Tfh細(xì)胞調(diào)節(jié)GC反應(yīng)的機(jī)制中還有諸多亟待解決的問題。本論文探討一類孤兒受體家族分子,Nr4a,在Tfh細(xì)胞分化和輔助GC反應(yīng)過程中的功能。首先結(jié)合流式分選和螢光定量PCR技術(shù),我們檢測Nr4a孤兒受體在Tfh細(xì)胞的表達(dá)情況;同時利用T細(xì)胞體外培養(yǎng)技術(shù),檢測Nr4a孤兒受體在CD4+T細(xì)胞活化過程中表達(dá)譜;再以小鼠過繼轉(zhuǎn)移模型為工具,從過量表達(dá)以及基因敲除Nr4a孤兒受體兩方面研究Nr4a在Tfh細(xì)胞分化和輔助GC反應(yīng)過程中的功能,包括生發(fā)中心B淋巴細(xì)胞與濾泡輔助性T淋巴細(xì)胞的分化情況。我們的研究結(jié)果指出,Nr4a孤兒受體在Tfh細(xì)胞中顯著性高表達(dá),并且Nr4a在CD4+T細(xì)胞活化早期立即上調(diào)。過表達(dá)Nr4a孤兒受體并過繼轉(zhuǎn)移至小鼠模型的結(jié)果表明,Nr4a孤兒受體會降低T細(xì)胞擴(kuò)增能力,同時會顯著提高T細(xì)胞輔助GC反應(yīng)的能力。另一方面,同時在CD4+T細(xì)胞上特異性敲除所有Nr4a孤兒受體并不影響Tfh細(xì)胞分化和輔助GC反應(yīng)的能力。這些實驗結(jié)果表明Nr4a孤兒受體可以提升Tfh細(xì)胞輔助GC反應(yīng)的功能,但并非是體內(nèi)Tfh細(xì)胞功能所必需的因素。
【關(guān)鍵詞】：Nr4a孤兒受體 濾泡輔助型T細(xì)胞 生發(fā)中心
【學(xué)位授予單位】：清華大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R392
【目錄】：

• 摘要3-4
• Abstract4-8
• 主要符號對照表8-9
• 第1章 引言9-16
• 1.1 濾泡輔助型T細(xì)胞的分化和功能9-11
• 1.2 孤兒受體Nr4a家族11-12
• 1.3 孤兒受體Nr4a家族在免疫系統(tǒng)中的功能12-13
• 1.4 本論文的目的和意義13-14
• 1.5 本論文的主要研究Qg容14-16
• 第2章 Nr4a受體在Tfh細(xì)胞的表達(dá)分析16-28
• 2.1 本章引論16
• 2.2 實驗材料與方法16-24
• 2.2.1 主要試劑16-17
• 2.2.2 主要儀器17
• 2.2.3 主要試劑的配置17-18
• 2.2.4 主要實驗動物18
• 2.2.5 實驗方法18-24
• 2.2.5.1 原代淋巴細(xì)胞的制備18-19
• 2.2.5.2 原代T淋巴細(xì)胞的磁珠分離19
• 2.2.5.3 淋巴細(xì)胞的過繼轉(zhuǎn)移和小鼠免疫19-20
• 2.2.5.4 淋巴細(xì)胞的免疫熒光標(biāo)記與流式分選20-21
• 2.2.5.5 T淋巴細(xì)胞體外活化培養(yǎng)和收集21
• 2.2.5.6 m RNA的提取與RT-PCR21-23
• 2.2.5.7 實時熒光定量PCR23-24
• 2.3 實驗結(jié)果24-26
• 2.3.1 Nr4a家族分子在Tfh細(xì)胞亞群的表達(dá)情況24-25
• 2.3.2 Nr4a家族分子T細(xì)胞活化過程中的表達(dá)情況25-26
• 2.4 討論26-28
• 第3章 Nr4a家族分子T細(xì)胞活化過程中的表達(dá)情況28-44
• 3.1 本章引論28-29
• 3.2 實驗材料與方法29-37
• 3.2.1 主要試劑29-31
• 3.2.2 主要儀器31
• 3.2.3 主要試劑的配置31-33
• 3.2.4 主要實驗動物33
• 3.2.5 實驗方法33-37
• 3.2.5.1 基因克隆及表達(dá)載體構(gòu)建33-35
• 3.2.5.2 反轉(zhuǎn)錄病毒的制備35-36
• 3.2.5.3 初始淋巴細(xì)胞的磁珠分選，，培養(yǎng)與感染36
• 3.2.5.4 感染的T細(xì)胞的流式分選36-37
• 3.2.5.5 淋巴細(xì)胞的過繼轉(zhuǎn)移37
• 3.2.5.6 淋巴細(xì)胞免疫熒光標(biāo)記與流式分析37
• 3.3 結(jié)果37-42
• 3.3.1 Nr4a過表達(dá)系統(tǒng)的建立37-38
• 3.3.2 體內(nèi)檢測Nr4a過表達(dá)T細(xì)胞分化成為Tfh細(xì)胞的能力38-40
• 3.3.3 Nr4a過表達(dá)對Tfh細(xì)胞輔助GC反應(yīng)的能力的影響40-42
• 3.4 討論42-44
• 第4章 Nr4a基因缺陷T細(xì)胞的Tfh分化和功能44-54
• 4.1 本章引論44-45
• 4.2 實驗材料與方法45-50
• 4.2.1 主要試劑45-46
• 4.2.2 主要儀器46
• 4.2.3 主要試劑的配置46
• 4.2.4 主要實驗動物46-47
• 4.2.5 實驗方法47-50
• 4.2.5.1 小鼠基因組DNA的制備與基因型鑒定47-48
• 4.2.5.2 初始淋巴細(xì)胞的磁珠分離48
• 4.2.5.3 T淋巴細(xì)胞運(yùn)動的體外培養(yǎng)和感染標(biāo)記48-49
• 4.2.5.4 感染的T細(xì)胞的流式分選49
• 4.2.5.5 骨髓嵌合體小鼠模型建立49-50
• 4.3 實驗結(jié)果50-53
• 4.3.1 T細(xì)胞特異性Nr4a全敲除小鼠表型和配種50-51
• 4.3.2 Nr4a-TKOOT-2 骨髓嵌合體小鼠模型建立51-52
• 4.3.3 Nr4a缺陷對Tfh細(xì)胞分化和輔助功能影響的分析52-53
• 4.4 討論53-54
• 第5章總結(jié)和展望54-56
• 5.1 工作總結(jié)54
• 5.2 工作展望54-56
• 參考文獻(xiàn)56-63
• 致謝63-65
• 附錄65-67
• 個人簡歷、在學(xué)期間發(fā)表的學(xué)術(shù)論文與研究成果67

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