發(fā)布時(shí)間：2020-04-29 09:57

【摘要】：NK細(xì)胞是一群具有細(xì)胞殺傷能力的固有免疫細(xì)胞,在抗感染和抗腫瘤的免疫過程中發(fā)揮著重要的作用。在很長(zhǎng)的一段時(shí)間里面,CD49b-NK1.1+NKp46+的細(xì)胞被視作不成熟NK(iNK)細(xì)胞,而CD49b+NK1.1+NKp46+的細(xì)胞被視作成熟的NK細(xì)胞。然而隨著研究的深入,NK細(xì)胞的異質(zhì)性逐漸被大家所認(rèn)識(shí)。人們發(fā)現(xiàn)除了參與外周循環(huán)的經(jīng)典NK(cNK)細(xì)胞以外,在各個(gè)組織中還存在著組織特有的NK細(xì)胞,這些NK細(xì)胞往往具有組織駐留特性,并常表現(xiàn)為CD49b-的表型。曾被視為iNK細(xì)胞的肝臟CD49b-NK細(xì)胞,后來發(fā)現(xiàn)是一群表型穩(wěn)定的CD49a+CD49b-肝臟駐留NK細(xì)胞。骨髓的CD49b-NK細(xì)胞也被發(fā)現(xiàn)主要發(fā)育為肝臟駐留NK細(xì)胞。更多的研究將cNK細(xì)胞與組織駐留NK細(xì)胞從發(fā)育上區(qū)分開來。而iNK這一發(fā)育階段是否存在,又該用什么樣表型來定義,則成了一個(gè)令人疑惑的問題。帶著這個(gè)疑問,我們進(jìn)行了以下的研究。1.脾臟而非骨毮CD49b NK細(xì)胞在外周組織中具有多樣的發(fā)育潛能我們首先分選了骨髓CD49b-NK細(xì)胞,將其過繼轉(zhuǎn)輸?shù)絹喼滤垒椪者^的WT小鼠,發(fā)現(xiàn)這群細(xì)胞很難在正常的受者鼠中存留。接著,我們分選了脾臟CD49b-NK細(xì)胞進(jìn)行類似實(shí)驗(yàn),發(fā)現(xiàn)這群細(xì)胞可以在各個(gè)組織中,形成多種NK亞群,包括cNK與肝臟駐留NK細(xì)胞。2.脾臟CD49b NK細(xì)胞分為CD49a+細(xì)胞與CD49a領(lǐng)胞兩個(gè)亞群通過表型分析,我們發(fā)現(xiàn),脾臟CD49b-NK細(xì)胞可以分為CD49a+與CD49a-兩個(gè)亞群。我們將CD49a+CD49b-NK細(xì)胞與CD49a-CD49b-NK細(xì)胞分別命名為49A NK與DN NK細(xì)胞。我們發(fā)現(xiàn)脾臟49A NK細(xì)胞具有獨(dú)特的表型和轉(zhuǎn)錄因子表達(dá):CD127+CD27+CXCR3+T-bet+Eomes。而脾臟DNNK細(xì)胞則表現(xiàn)不成熟的表型,其雖然表達(dá)T-bet,但Eomes只是部分表達(dá),另外這群細(xì)胞不表達(dá)NK細(xì)胞成熟的標(biāo)志分子KLRG1,主要處于CD11b-CD27+這一不成熟的階段。通過比較各個(gè)組織,發(fā)現(xiàn)只有脾臟中有著數(shù)量明顯的DNNK細(xì)胞。3.脾臟49A NK細(xì)胞轉(zhuǎn)輸后傾向性地發(fā)育為肝臟駐留NK細(xì)胞脾臟49ANK細(xì)胞在過繼轉(zhuǎn)輸后,主要遷移到肝臟中,維持CD49a+CD49b-的表型,形成肝臟駐留NK細(xì)胞。下調(diào)了 CD127和CD27的表達(dá),維持CXCR3的表達(dá),維持T-bet陽性與Eomes陰性,這些都與肝臟駐留NK細(xì)胞一致。另外,脾臟49ANK細(xì)胞轉(zhuǎn)輸后會(huì)有少量回到脾臟,維持原有表型,在骨髓和外周血中則很難檢測(cè)到。另外,雖然脾臟49ANK細(xì)胞為CXCR3陽性,但CXCR3缺陷并不影響其遷移到肝臟形成肝臟駐留NK細(xì)胞。4.脾臟DNNK細(xì)胞具有多樣的發(fā)育潛能脾臟DNNK細(xì)胞轉(zhuǎn)輸后,能在各個(gè)組織中形成各個(gè)NK細(xì)胞亞群。既能遷移到肝臟中,上調(diào)Trail、CD200R、CXCR6,發(fā)育為CD49a+CD49b-肝臟駐留NK細(xì)胞,CXCR3缺陷不影響該發(fā)育;也能回到脾臟,上調(diào)CD49b、CD62L、CD11b、KLRG1、Eomes,發(fā)育為成熟的cNK細(xì)胞。另外,也會(huì)有部分回到脾臟的細(xì)胞維持DNNK細(xì)胞的表型。5.脾臟對(duì)肝臟駐留NK細(xì)胞的維持并沒有關(guān)鍵性的影響手術(shù)切除小鼠脾臟后,小鼠肝臟駐留NK細(xì)胞的比例、數(shù)量和表型均沒有發(fā)生變化。通過將T-bet缺陷鼠與WT鼠進(jìn)行聯(lián)體手術(shù),我們發(fā)現(xiàn)T-bet缺陷鼠的肝臟可以通過這種方式,獲得外周來源的肝臟駐留NK細(xì)胞。但是對(duì)聯(lián)體的WT小鼠進(jìn)行脾切手術(shù),依然不會(huì)影響T-bet缺陷小鼠肝臟駐留NK細(xì)胞的外周來源。6.脾臟DNNK與49ANK細(xì)胞具有組織駐留特性通過聯(lián)體實(shí)驗(yàn),我們發(fā)現(xiàn)脾臟DNNK與49ANK細(xì)胞,幾乎沒有外周來源,具有組織駐留的特性。7.T-bet內(nèi)源性地影響DN NK細(xì)胞向成熟的cNK細(xì)胞的發(fā)育我們發(fā)現(xiàn)T-bet缺陷的小鼠脾臟的cNK細(xì)胞數(shù)量和比例明顯降低,終末成熟的比例也降低。相反,脾臟DNNK細(xì)胞數(shù)量和比例明顯升高。通過將T-bet缺陷與WT小鼠脾臟DNNK細(xì)胞1:1混合后共同轉(zhuǎn)輸,我們發(fā)現(xiàn)T-bet缺陷的細(xì)胞向成熟的cNK細(xì)胞的發(fā)育受阻。結(jié)論:我們發(fā)現(xiàn)了兩群新的脾臟NK細(xì)胞亞群:49ANK(CD49a+CD49b-)與DNNK(CD49a-CD49b-)細(xì)胞。其中脾臟49ANK細(xì)胞過繼轉(zhuǎn)輸后傾向于發(fā)育為肝臟駐留NK細(xì)胞。而DNNK細(xì)胞具有多樣的發(fā)育潛能,可以發(fā)育為肝臟駐留NK細(xì)胞,也可以回到脾臟中發(fā)育為成熟的cNK細(xì)胞或者保持DN NK細(xì)胞的表型。但是我們進(jìn)一步發(fā)現(xiàn),這兩群細(xì)胞都具有組織駐留的特性。這說明在正常生理?xiàng)l件下,脾臟DN NK細(xì)胞只能駐留在脾臟中向cNK細(xì)胞發(fā)育,因此可以認(rèn)為脾臟DNNK細(xì)胞就是外周組織的iNK細(xì)胞。另外,CXCR3缺陷并不影響這兩群細(xì)胞轉(zhuǎn)輸后向肝臟駐留NK細(xì)胞的發(fā)育。而T-bet缺陷則會(huì)內(nèi)源性地阻礙DN NK細(xì)胞向成熟的cNK細(xì)胞發(fā)育。
【圖文】：

圖１．１邋ＮＫ細(xì)胞的三種免疫記憶模型逡逑引自（Ｍｉｎ－Ｏｏｅｔａｌ．，２０１３）逡逑在人體中，受到人巨細(xì)胞病毒（ｈｕｍａｎ邋ｃｙｔｏｍｅｇａｌｏｖｉｒｕｓ，邋ＨＣＭＶ）感染的個(gè)逡逑體再次被感染后，會(huì)觀察到一群ＣＤ５７邋＋邋ＮＫＧ２Ｃ邋＋邋ＮＫ細(xì)胞亞群能夠進(jìn)行擴(kuò)增并逡逑長(zhǎng)期維持，并且這與ＮＫ細(xì)胞受體基因的表觀遺傳修飾有關(guān)（Ｆｏｌｅｙ邋ｅｔ邋ａｌ．，２０１２；邋Ｌｅｅ逡逑ｅｔ邋ａｌ．，邋２０１５；邋Ｌｕｅｔｋｅ－Ｅｖｅｒｓｌｏｈ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０１４；邋Ｓｃｈｌｕｍｓ邋ｅｔ邋ａｌ．，邋２０１５）。該現(xiàn)象可以解釋為逡逑ＮＫ細(xì)胞活化狀態(tài)的增加，也有人認(rèn)為這其實(shí)反映了邋ＮＫ細(xì)胞的適應(yīng)性免疫應(yīng)答逡逑的特性。逡逑而在小鼠中，則有較為明確的ＮＫ細(xì)胞擁有免疫記憶特性的證據(jù)。最初觀察逡逑到小鼠ＮＫ細(xì)胞確實(shí)能夠獲得適應(yīng)性免疫和記憶特性，是在半抗原致敏模型中。逡逑有研宄發(fā)現(xiàn)，半抗原特異性接觸超敏反應(yīng)可以以Ｔ、Ｂ細(xì)胞非依賴的方式從半抗逡逑原致敏小鼠轉(zhuǎn)移到?jīng)]有致敏過的小鼠，該過程由一部分肝臟駐留的ＮＫ細(xì)胞介導(dǎo)逡逑（Ｌｅａｒｙ邋ｅｔａｌ．，２００６）。而在巨細(xì)胞病毒感染的小鼠模型中，也證實(shí)了特異性識(shí)別逡逑ｍｌ５７病毒糖蛋白后被激活的ＮＫ細(xì)胞，在二次刺激下，能夠表現(xiàn)出病毒特異性逡逑刺激下的擴(kuò)增，長(zhǎng)時(shí)間存活以及強(qiáng)力應(yīng)答（Ｓｕｎ邋ｅｔａｌ．，邋２００９）。同樣地，在用流感病逡逑

引自（Ｐａｈｌ邋ａｎｄ邋Ｃｅｒｗｅｎｋａ，２０１７）逡逑另一方面，ＮＫ細(xì)胞的功能也是受到各種機(jī)制調(diào)控的，譬如在腫瘤微環(huán)境中，逡逑負(fù)調(diào)信號(hào)就可能抑制ＮＫ細(xì)胞的功能，進(jìn)而使得腫瘤逃逸（圖１．２）。在腫瘤微逡逑環(huán)境中，ＮＫ細(xì)胞被腫瘤細(xì)胞表面表達(dá)的大量的抑制性配體所抑制。同時(shí)，腫瘤逡逑細(xì)胞會(huì)促使免疫抑制細(xì)胞如調(diào)節(jié)性Ｔ細(xì)胞（ｒｅｇｕｌａｔｏｒｙ邋Ｔ邋ｃｅｌｌｓ，，邋Ｔｒｅｇ）、骨髓來源逡逑的抑制性細(xì)胞（ｍｙｅｌｏｉｄ－ｄｅｒｉｖｅｄ邋ｓｕｐｐｒｅｓｓｏｒ邋ｃｅｌｌｓ，邋ＭＤＳＣ）和ＩＩ型巨嗤細(xì)胞分泌免逡逑４逡逑
【學(xué)位授予單位】：中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2019
【分類號(hào)】：R392

【相似文獻(xiàn)】

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1 王寶輝;脾臟CD49b-NK細(xì)胞的發(fā)育分化研究[D];中國(guó)科學(xué)技術(shù)大學(xué);2019年

本文編號(hào)：2644452