【摘要】：在我國(guó)約有10%-15%的育齡婦女不孕,全球多達(dá)六分之一的夫妻會(huì)遇到生育問(wèn)題。多數(shù)夫妻選擇通過(guò)輔助生殖技術(shù)(Assited Reproductive Technology,ART)來(lái)孕育后代。囊胚的挑選和胚胎移植是ART中關(guān)鍵的環(huán)節(jié)。哺乳動(dòng)物的胚胎在囊胚時(shí)期會(huì)形成兩種不同的細(xì)胞類型:內(nèi)細(xì)胞團(tuán)(Inner Cell Mass,ICM)和滋養(yǎng)層(Trophectoderm,TE)。處于囊胚時(shí)期的胚胎,需要先從透明帶(Zona Pellucida,ZP)中孵化出來(lái),才有植入子宮的能力。ZP是一層包裹在哺乳動(dòng)物卵母細(xì)胞和著床前胚胎外的一層非細(xì)胞性糖蛋白,具有識(shí)別精子、阻止多精受精和保護(hù)卵母細(xì)胞及孵化前胚胎的作用。囊胚在孵化前會(huì)持續(xù)性的擴(kuò)張,ZP變薄并產(chǎn)生小孔,這類小孔被稱為孵化位點(diǎn)。胚胎從孵化位點(diǎn)中孵出后會(huì)繼續(xù)完成著床和妊娠過(guò)程。孵化過(guò)程對(duì)于后續(xù)胚胎的繼續(xù)發(fā)育至關(guān)重要,但是相關(guān)的研究卻少有報(bào)道。孵化位點(diǎn)在透明帶上的位置是隨機(jī)出現(xiàn)還是有著一定規(guī)律,孵化位點(diǎn)的位置對(duì)于小鼠胚胎后續(xù)著床、妊娠以及對(duì)子代是否有影響還有待考究。本研究中我們測(cè)量了囊胚孵化位點(diǎn)與內(nèi)細(xì)胞團(tuán)圓弧中點(diǎn)切線夾角θ的角度,并分為三組:0o≤θ≤30o組,30oθ≤60o和60oθ≤90o組。實(shí)驗(yàn)采用非手術(shù)胚胎移植(Nonsurgical Embryo Transfer,NSET)的方法,在不進(jìn)行麻醉與外科手術(shù)的情況下,將三組不同孵化角度范圍的囊胚通過(guò)宮頸直接移入代孕母鼠的子宮內(nèi)。統(tǒng)計(jì)胚胎著床率、妊娠率、產(chǎn)仔率以及后代的生長(zhǎng)情況。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:囊胚孵化的位置并不影響胚胎的著床率和著床數(shù)。但是,囊胚孵化位點(diǎn)的不同會(huì)影響到子代小鼠的出生率。對(duì)后代進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析,我們發(fā)現(xiàn)不同孵化位點(diǎn)囊胚對(duì)后代的性別比例和出生重?zé)o影響,對(duì)雄性后代的生長(zhǎng)曲線也無(wú)影響,但是對(duì)雌性后代的生長(zhǎng)曲線卻有著影響。我們的實(shí)驗(yàn)結(jié)果可為臨床上挑選發(fā)育潛力更高的囊胚提供參考。
【圖文】：

圖 2.1 囊胚孵化位點(diǎn)角度測(cè)量示意圖。測(cè)量時(shí)從 ZP 內(nèi)側(cè)繪制內(nèi)細(xì)胞團(tuán)圓弧中點(diǎn)切線、圓弧中點(diǎn)點(diǎn)的連線。Figure 2.1 Schematic diagramof angle measurement of blastocyst hatching site. During the measuremengent of the arc midpoint of the ICM and the connection between the midpoint of the arc and the hatchinre drawn from the inside of the ZP.3.6 非手術(shù)胚胎移植在 60mm 培養(yǎng)皿中用 M2 操作液做滴，，每滴 50μL，共四個(gè)滴。將按照角度分組的囊養(yǎng)箱中拿出，用口吸管移入到 M2 操作液中反復(fù)吹吸清洗幾次，再移入到新的 M2 操滴里，盡量保證 M2 操作液小滴上面沒(méi)有石蠟油。將 NSET 的移植導(dǎo)管取出并與 2.5μL 的移液槍連接，將移液槍刻度調(diào)至 1.8μL。在顯

內(nèi)蒙古大學(xué) 碩士學(xué)位論文2.4 實(shí)驗(yàn)結(jié)果及分析2.4.1 囊胚孵化角度的觀察和測(cè)量day7 的上午，用 M2 操作液沖出供體母鼠子宮角內(nèi)的囊胚，放入 CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。從注射 hCG 后 94h 起，每隔 2 小時(shí)觀察囊胚的孵化情況，記錄囊胚孵化位點(diǎn)角度、孵化個(gè)數(shù)，直到注射 hCG 后 100h。這個(gè)時(shí)間段以外，過(guò)早或過(guò)晚孵化的囊胚都不記入孵化數(shù)據(jù)中。有孵化位點(diǎn)的囊胚按照 ICM 圓弧中點(diǎn)切線和孵化位點(diǎn)的夾角 θ 分為 3 組：0o ≤ θ ≤ 30o、30o < θ ≤ 60o和 60o < θ ≤ 90o。圖 2.2 列出了了三種不同孵化角度的典型形態(tài)。
【學(xué)位授予單位】：內(nèi)蒙古大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2018
【分類號(hào)】：R321

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：2617360