發(fā)布時間：2019-11-28 18:59

【摘要】：目的:通過PDMS微柱法建立細胞傷口愈合模型,通過對比等滲透壓,研究低滲透壓對細胞缺口愈合的影響,研究低滲透壓對細胞遷移速度、細胞肌動蛋白環(huán)及板狀偽足的影響,并對低滲透壓對細胞缺口關閉的作用機制進行初步探討。方法:實驗細胞MDCK細胞(犬腎上皮細胞),隨機分為低滲組(n=5)和等滲組(n=6)作延時拍攝觀察細胞運動;用深反應離子刻蝕法制作好圓形微陣列凹槽的硅片板,深100μm,直徑180μm。往硅片板上灌注1:10PDMS,加熱后切下即可造好PDMS微柱模具。消毒PDMS微柱模具后,往模具下方種下MDCK細胞,待單層細胞長滿后,拔出柱子即在單層細胞中造出直徑180微米的缺口�；罴毎ぷ髡鞠�(37°C,5%CO2),顯微鏡下連續(xù)延時定點拍照,5分鐘拍一張,獲得圖片后分析低滲透壓(~150m Osm)和等滲透壓(~300m Osm)條件下細胞缺口關閉速度、偽足面積伸出的情況。此外,MDCK細胞低滲透壓和等滲透壓條件下分別處理15分鐘后,固定細胞,并做熒光染色,觀察不同滲透壓下細胞肌動蛋白環(huán)的形成情況。結果:細胞缺口關閉過程邊緣曲線周長變化圖中,可以看出低滲透下細胞缺口關閉比等滲壓下要快。計算速度后發(fā)現(xiàn),低滲組細胞愈合速度3.93±1.04μm/min(n=5,mean±s.d.),等滲組細胞愈合速度1.76±0.18μm/min(n=6,mean±s.d.)。細胞缺口關閉過程偽足伸出邊緣面積變化圖中,可以看出低滲透壓下板狀偽足要比等滲壓下的要明顯,低滲壓板狀偽足伸出面積1137.46±70.26μm2(n=5,mean±s.d.),等滲壓板狀偽足伸出面積60.44±21.87μm2(n=6,mean±s.d.)。等滲壓下可見肌動蛋白環(huán)的形成,而低滲透壓下幾乎觀察不到。熒光光密度分析曲線圖中,等滲壓下在缺口邊緣出現(xiàn)了熒光光密度的波峰,而低滲透壓下沒有出現(xiàn)。結論:1、低滲壓環(huán)境下,MDCK細胞傷口愈合速度比等滲透壓下的更加快。低滲透壓下的板狀偽足比等滲透壓下的更明顯,而低滲透壓下沒有形成肌動蛋白環(huán)。2、低滲透壓下,加速細胞缺口的關閉可能機制是通過促進板狀偽足的形成。3、在細胞缺口關閉過程中,板狀偽足對關閉速度的影響比肌動蛋白環(huán)的影響更大。
【學位授予單位】：廣西醫(yī)科大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R363

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相關碩士學位論文 前1條

1 陳泰霖;低滲透壓通過促進板狀偽足的形成加速細胞缺口的關閉[D];廣西醫(yī)科大學;2017年

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本文編號：2567126