【摘要】：目的研制一種安全、有效且易于生產(chǎn)的熱滅活肺炎鏈球菌死菌疫苗D39X,評價其作為肺炎鏈球菌候選疫苗的可行性。方法通過熱滅活肺炎鏈球菌突變菌株D39X,得到無毒的死菌疫苗,鼻腔免疫Balb/c小鼠,每周1次,連續(xù)4周。末次免疫1周后,間接ELISA檢測免疫小鼠特異性抗體水平;同時檢測抗體亞型及細(xì)胞因子水平,并進(jìn)行不同菌株攻毒的主動保護(hù)實(shí)驗(yàn)。結(jié)果免疫組小鼠血清中特異性IgG和唾液中特異性IgA顯著升高,IgG亞型主要為IgG1和IgG2b;免疫小鼠脾細(xì)胞特異性分泌IL-4和IL-17A;19F型肺炎鏈球菌在免疫小鼠中的載量顯著低于對照組小鼠;滅活D39X黏膜免疫可有效延長肺炎鏈球菌D39、6B型和3型感染小鼠的生存時間;被動免疫也具有保護(hù)作用。結(jié)論熱滅活的D39X黏膜免疫可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生體液免疫和細(xì)胞免疫反應(yīng),有效抵抗不同血清型肺炎鏈球菌的感染,是一種有開發(fā)前景的肺炎鏈球菌疫苗。
【圖文】：

中的細(xì)菌數(shù)量顯著降低（P<0.05），說明鼻腔免疫熱滅活的D39X可有效抵抗19F型肺炎鏈球菌在小鼠上呼吸道的定植。2.4黏膜免疫D39X可抵抗致死性肺炎鏈球菌感染由圖5可以發(fā)現(xiàn)，D39鼻腔攻毒后，免疫小鼠的平均生存率和生存時間均顯著延長，提示鼻腔免疫滅活D39X可有效抵抗致死性劑量D39的感染。同時，免疫滅活D39X也可抵抗在我國較流行的臨床6B型和3型肺炎鏈球菌菌株的感染。2.5被動免疫可抵抗侵襲性肺炎鏈球菌感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，注射了免疫小鼠血清的小鼠平均存活率接近70%，對照組小鼠生存率僅為10%左右，差異有統(tǒng)計(jì)圖1D39X電鏡下特征（D36,×60000;D39X,×120000）Fig1TransmissionelectronmicrographanalysisofD39X(D36,×60000;D39X,×120000)*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜0.001.圖2黏膜免疫D39X誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)Fig2EffectsofmucosalimmunizationwithD39Xonantibodyresponsesinmice*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜0.001.圖3D39X誘導(dǎo)的細(xì)胞因子水平Fig3EffectsofmucosalimmunizationwithD39XoncellularimmuneresponsesinmiceBacterialloadsinnasalwashesandlunghomogenatesweredeterminedthreedayspostinfection.**P＜0.01;***P＜0.001.圖4黏膜免疫D39X在定植模型中的保護(hù)作用Fig4EffectofmucosalimmunizationwithD39XinpneumococcalcolonizationmodelMicewerei.n.challengedwithS.pneumoniaestrainsD39(7×107CFU),serotype6B(CMCC31207,9×108CFU)orserotype3(CMCC31436,1.5×108CFU),respectively.*P＜0.05;**P＜0.01.圖5D39X對不同血清型肺炎鏈球菌的主動保護(hù)Fig5ActiveprotectionbyD39XagainstlethalS.pneumoniaeinfection·397·

免疫學(xué)雜志2013年5月第29卷第5期IMMUNOLOGICALJOURNALVol.29No.5May2013IgG1和IgG2b為主，同時也有IgG2a檢出，未檢測出IgG3（圖2）。細(xì)胞因子水平檢測提示，免疫組小鼠可產(chǎn)生高水平的IL-4和IL-17A（P均<0.05）（圖3）。免疫組和佐劑對照組的IFN-γ均顯著升高，無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（數(shù)據(jù)未顯示）。2.3黏膜免疫D39X可減少肺炎鏈球菌在小鼠體內(nèi)的定植圖4顯示免疫組小鼠鼻腔灌洗液及肺勻漿中的細(xì)菌數(shù)量顯著降低（P<0.05），說明鼻腔免疫熱滅活的D39X可有效抵抗19F型肺炎鏈球菌在小鼠上呼吸道的定植。2.4黏膜免疫D39X可抵抗致死性肺炎鏈球菌感染由圖5可以發(fā)現(xiàn)，D39鼻腔攻毒后，免疫小鼠的平均生存率和生存時間均顯著延長，提示鼻腔免疫滅活D39X可有效抵抗致死性劑量D39的感染。同時，免疫滅活D39X也可抵抗在我國較流行的臨床6B型和3型肺炎鏈球菌菌株的感染。2.5被動免疫可抵抗侵襲性肺炎鏈球菌感染實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，注射了免疫小鼠血清的小鼠平均存活率接近70%，對照組小鼠生存率僅為10%左右，差異有統(tǒng)計(jì)圖1D39X電鏡下特征（D36,×60000;D39X,×120000）Fig1TransmissionelectronmicrographanalysisofD39X(D36,×60000;D39X,×120000)*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜0.001.圖2黏膜免疫D39X誘導(dǎo)的體液免疫反應(yīng)Fig2EffectsofmucosalimmunizationwithD39Xonantibodyresponsesinmice*P＜0.05;**P＜0.01;***P＜0.001.圖3D39X誘導(dǎo)的細(xì)胞因子水平Fig3EffectsofmucosalimmunizationwithD39XoncellularimmuneresponsesinmiceBacterialloadsinnasalwashesandlunghomogenatesweredeterminedthreedayspostinfection.**P＜0.01;***P＜0.001.圖4黏膜免疫D39X在定植模型中的保護(hù)作用Fig4EffectofmucosalimmunizationwithD39Xinpneumococcalcolonizationm

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3 王春t，

本文編號：2566503