【摘要】：熒光材料在生物成像領域已得到廣泛應用,選擇合適的熒光材料作為指示信號也就成為了研究中的重點和難點。熒光材料需要滿足熒光強度高,耐漂白,毒性小,體積小等要求。目前,常用的熒光材料主要包括:有機熒光探針、熒光蛋白、和量子點。本論文圍繞熒光材料應用于HIV-1病毒基因組成像展開,取得以下主要進展:1)為了研究HIV-1在侵染宿主細胞早期階段中的解離過程,我們構(gòu)建了三種有侵染能力的雙色熒光病毒(HIVRu-TC,HIVRu-EGFP,HIVTC-EGFp)和一種有侵染能力的三色熒光病毒(HIVRu-TC-ECFP)。結(jié)合這些多色熒光病毒顆粒和單顆粒成像技術,就可以追蹤并觀測到HIV-1的基質(zhì)蛋白,衣殼蛋白以及基因組RNA在活細胞內(nèi)的分離的全過程。在HIV-1早期侵染階段,病毒顆粒多步解離過程首次被可視化觀察到,我們采用最直觀的方法解決了一個一直以來十分具有爭議的問題。2)為了延遲釕的有機金屬配合物的光漂白問題。我們在病毒顆粒的Vpr蛋白的C端插入了六個半胱氨酸,經(jīng)過病毒的組裝過程,這六個半胱氨酸與病毒基因組RNA相結(jié)合,通過自身的還原性來延遲釕的配合物的光漂白。基于這一光漂白的延遲效果,對HIV-1病毒顆粒進行單色基因組RNA的熒光標記,就可以在不改造病毒衣殼CA蛋白并且不影響病毒侵染能力的情況下,對病毒的脫殼過程進行成像。3)為了實現(xiàn)活細胞內(nèi)HIV-1前病毒基因組的可視化成像,我們利用量子點(QDs)對TALE和CRISPR體系進行熒光標記,從而實現(xiàn)對靶向基因序列的識別和定位,同時解決單拷貝基因序列在活細胞內(nèi)成像的技術難題。
【圖文】：

ＨＩＶ基因組全長大約９．８邋Ｋｂ，共編碼三個聚合蛋白（Ｅｎｖ，Ｐｏ丨和Ｇａｇ）和逡逑六個輔助蛋白（Ｖｉｆ、Ｖｐｒ、Ｖｐｕ、Ｔａｔ、Ｒｅｖ和Ｎｅｆ），及兩個長末端重復序列（ＬＴＲ）逡逑（圖１－２）。Ｅｎｖ邋ｍＲＮＡ被表達并翻譯成ｇＰＩ６０，然后由蛋白酶裂解為表面區(qū)逡逑（ｇｐｌ２０）和跨膜區(qū)（ｇＰ４１）兩部分。ｇＰ１２０負責與受體ＣＤ４和輔助受體相結(jié)合，，逡逑而ｇｐ４１誘導病毒包膜與細胞膜相融合。Ｐｏｌ編碼病毒蛋白酶（ＰＲ）、逆轉(zhuǎn)錄酶（ＲＴ）逡逑和整合酶（ＩＮ）。Ｇａｇ編碼病毒的結(jié)構(gòu)蛋白：基質(zhì)蛋白（ｐｌ７ＭＡ）、衣殼蛋白（ｐ２４逡逑ＣＡ）、核衣殼蛋白（ｐ７ＮＣ）、ｐ６和間隔胎ＳＰ１、ＳＰ２。Ｇａｇ蛋白組裝形成病毒衣逡逑殼；并在病毒出芽期間或剛剛完成出芽過程后，在蛋白酶的水解作用下裂解成為逡逑不同組分，結(jié)構(gòu)產(chǎn)生很大變化并獲得重要的生命功能［１７＿２２】。逡逑２逡逑

由Ｅｎｖ蛋白的負電性與細胞膜表面的一些正電性基團相結(jié)合。通過任何因素，逡逑都使ＨＩＶ－１病毒顆粒表面的Ｅｎｖ蛋白與細胞表面病毒的受體ＣＤ４和共同受體相逡逑互接近，進而增加ＨＩＶ－１病毒對對宿主細胞的侵染效率（圖１－３）邋［３４’。逡逑３逡逑
【學位授予單位】：北京化工大學
【學位級別】：博士
【學位授予年份】：2016
【分類號】：TQ422;R373

【相似文獻】

相關期刊論文 前10條

1 劉衛(wèi)民;;微顆粒熒光材料的制備方法[J];發(fā)光快報;1988年Z1期

2 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1994年06期

3 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1995年02期

4 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1995年06期

5 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1996年01期

6 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1997年06期

7 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1998年05期

8 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1998年04期

9 ;發(fā)光、熒光材料[J];中國光學與應用光學文摘;1998年06期

10 李全臣;熒光材料的色度測定[J];應用光學;1998年02期

相關會議論文 前10條

1 徐晶;夏威;鄧華;肖志國;;硅酸鹽熒光材料的開發(fā)與研制[A];第11屆全國發(fā)光學學術會議論文摘要集[C];2007年

2 周芳;戴守愚;方炎;;熒光多晶材料Y_2O_3：Eu液氨溫區(qū)的Raman譜分析[A];第十四屆全國光散射學術會議論文摘要集[C];2007年

3 王育華;王靈利;;VUV激發(fā)的硼酸鹽熒光材料的結(jié)構(gòu)與性質(zhì)關系研究[A];大珩先生九十華誕文集暨中國光學學會2004年學術大會論文集[C];2004年

4 劉行仁;初本莉;黃立輝;馬龍;王曉君;;稀土熒光材料最新發(fā)展動態(tài)[A];中國稀土學會第四屆學術年會論文集[C];2000年

5 張家驊;郝振東;張霞;王笑軍;;能量傳遞與白光LED熒光材料的研究[A];第七屆全國稀土發(fā)光材料學術研討會會議論文摘要集[C];2011年

6 周婷;曾三杰;文心田;肖馳;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒重慶株的分離鑒定[A];第六屆全國會員代表大學暨第11次學術研討會論文集（上）[C];2005年

7 周婷;曹三杰;文心田;肖馳;;豬繁殖與呼吸綜合征病毒重慶株的分離鑒定[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第六屆全國會員代表大會暨第11次學術研討會論文集[C];2005年

8 莊衛(wèi)東;;半導體照明用稀土熒光材料[A];LED產(chǎn)業(yè)及其材料技術市場高層論壇論文集[C];2010年

9 方美玉;任瑞文;劉建偉;;我國甲病毒的研究進展及其預防[A];新發(fā)和再發(fā)傳染病防治熱點研討會論文集[C];2009年

10 劉光清;云濤;倪征;;豬生殖與呼吸綜合征病毒的基因組及致病的分子基礎[A];中國畜牧獸醫(yī)學會家畜傳染病學分會第六屆理事會第二次會議暨教學專業(yè)委員會第六屆代表大會論文集[C];2006年

相關重要報紙文章 前10條

1 編譯 姚春霞;能殺死癌細胞且對健康細胞無害的病毒[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2009年

2 記者 鄭靈巧;我國西北地區(qū)發(fā)現(xiàn)塔希納病毒[N];健康報;2010年

3 曉艷;誘導突變殺滅病毒[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2002年

4 記者毛磊;美公布非典病毒基因組序列[N];人民日報;2003年

5 記者 盧蘇燕;法國發(fā)現(xiàn)特大病毒可能侵害人體肺部[N];新華每日電訊;2003年

6 記者 毛磊;非典病毒基因組序列[N];新華每日電訊;2003年

7 楊駿;巨病毒不是病毒[N];大眾衛(wèi)生報;2005年

8 楊駿;巨病毒可能是“第四類微生物”[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2005年

9 記者 李斌;非典病毒全基因組芯片問世[N];新華每日電訊;2003年

10 梓信;法國發(fā)現(xiàn)最大體積病毒[N];醫(yī)藥經(jīng)濟報;2003年

相關博士學位論文 前10條

1 馬英新;熒光材料用于HIV-1病毒基因組成像[D];北京化工大學;2016年

2 方文彥;氰基二苯乙烯類刺激響應型熒光材料的設計、合成與性質(zhì)[D];安徽大學;2017年

3 董r

本文編號：2538396