發(fā)布時間：2021-03-18 14:05

  目的:通過篩選并鑒定(肌)營養(yǎng)不良短小蛋白結(jié)合蛋白1(dystrobrevin binding protein1,dysbindin-1)在睪丸組織中的相互作用蛋白,研究dysbindin-1在睪丸中的可能功能。方法:在Rosetta(DE3)菌種中誘導(dǎo)表達可溶性GST-dysbindin-1融合蛋白,經(jīng)谷胱甘肽-瓊脂糖珠親和純化后,與小鼠的睪丸組織蛋白孵育進行GST pull-down實驗,通過液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC MS/MS)分析篩選dysbindin-1在睪丸組織中的相互作用蛋白。利用BioGPS數(shù)據(jù)庫聚類睪丸組織中高表達和特異性表達的互作蛋白,運用DAVID6.8在線分析工具從細胞組分、分子功能、生物學(xué)過程和京都基因與基因組百科全書通路等方面對篩選出的互作蛋白進行GO(gene ontology)富集分析。選擇我們感興趣的潛在互作蛋白囊泡分選蛋白4A(vacuolar protein sorting 4A,vps4a),通過分子克隆技術(shù)構(gòu)建原核和真核表達載體,運用GST pull-down、免疫共沉淀等實驗,驗證dysbindin-1與vps4a的互作關(guān)系。結(jié)果:1.本實驗共篩選出108個dysbindin-1在睪丸組織中的潛在互作蛋白,其中98個為尚未報道的dysbindin-1互作蛋白,7個為睪丸高表達蛋白,5個為睪丸特異性表達蛋白。2.DAVID 6.8在線分析工具GO富集分析發(fā)現(xiàn):這些候選蛋白主要分布在細胞質(zhì)、細胞核、細胞膜、細胞外泌體等細胞組分中,通過與蛋白質(zhì)、核酸等分子結(jié)合參與蛋白翻譯和轉(zhuǎn)運、囊泡運輸及凋亡等生物學(xué)過程以及氨基酸生物合成、溶酶體及蛋白酶體等生物學(xué)通路。3.通過GST pull-down和免疫共沉淀實驗證實dysbindin-1和vps4a存在相互作用。結(jié)論:Dysbindin-1在小鼠睪丸組織中與多種蛋白相互作用,可能參與精子發(fā)生和受精等生物學(xué)過程。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R363

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 閆慧;劉慧霞;魏宗波;郭蕊;張濤;馮雅琴;;小鼠精子發(fā)生過程中dysbindin-1的表達[J];解剖學(xué)報;2015年04期

2 徐秀民;于德新;張志強;謝棟棟;王毅;張濤;陳磊;閔捷;丁德茂;鄒慈;;男性不育患者精子DNA損傷與非整倍體精子的研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報;2013年11期

3 李巍;馮雅琴;郝嬋娟;郭小黎;崔艷艷;賀敏;何新;;溶酶體相關(guān)細胞器生物發(fā)生復(fù)合體相互作用組構(gòu)成胞內(nèi)體運輸網(wǎng)絡(luò)(英文)[J];遺傳學(xué)報;2007年08期

本文編號：2415509