目的:通過(guò)篩選并鑒定(肌)營(yíng)養(yǎng)不良短小蛋白結(jié)合蛋白1(dystrobrevin binding protein1,dysbindin-1)在睪丸組織中的相互作用蛋白,研究dysbindin-1在睪丸中的可能功能。方法:在Rosetta(DE3)菌種中誘導(dǎo)表達(dá)可溶性GST-dysbindin-1融合蛋白,經(jīng)谷胱甘肽-瓊脂糖珠親和純化后,與小鼠的睪丸組織蛋白孵育進(jìn)行GST pull-down實(shí)驗(yàn),通過(guò)液相色譜串聯(lián)質(zhì)譜(LC MS/MS)分析篩選dysbindin-1在睪丸組織中的相互作用蛋白。利用BioGPS數(shù)據(jù)庫(kù)聚類睪丸組織中高表達(dá)和特異性表達(dá)的互作蛋白,運(yùn)用DAVID6.8在線分析工具從細(xì)胞組分、分子功能、生物學(xué)過(guò)程和京都基因與基因組百科全書(shū)通路等方面對(duì)篩選出的互作蛋白進(jìn)行GO(gene ontology)富集分析。選擇我們感興趣的潛在互作蛋白囊泡分選蛋白4A(vacuolar protein sorting 4A,vps4a),通過(guò)分子克隆技術(shù)構(gòu)建原核和真核表達(dá)載體,運(yùn)用GST pull-down、免疫共沉淀等實(shí)驗(yàn),驗(yàn)證dysbindin-1與vps4a的互作關(guān)系。結(jié)果:1.本實(shí)驗(yàn)共篩選出108個(gè)dysbindin-1在睪丸組織中的潛在互作蛋白,其中98個(gè)為尚未報(bào)道的dysbindin-1互作蛋白,7個(gè)為睪丸高表達(dá)蛋白,5個(gè)為睪丸特異性表達(dá)蛋白。2.DAVID 6.8在線分析工具GO富集分析發(fā)現(xiàn):這些候選蛋白主要分布在細(xì)胞質(zhì)、細(xì)胞核、細(xì)胞膜、細(xì)胞外泌體等細(xì)胞組分中,通過(guò)與蛋白質(zhì)、核酸等分子結(jié)合參與蛋白翻譯和轉(zhuǎn)運(yùn)、囊泡運(yùn)輸及凋亡等生物學(xué)過(guò)程以及氨基酸生物合成、溶酶體及蛋白酶體等生物學(xué)通路。3.通過(guò)GST pull-down和免疫共沉淀實(shí)驗(yàn)證實(shí)dysbindin-1和vps4a存在相互作用。結(jié)論:Dysbindin-1在小鼠睪丸組織中與多種蛋白相互作用,可能參與精子發(fā)生和受精等生物學(xué)過(guò)程。
【學(xué)位授予單位】：山西醫(yī)科大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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1 閆慧;劉慧霞;魏宗波;郭蕊;張濤;馮雅琴;;小鼠精子發(fā)生過(guò)程中dysbindin-1的表達(dá)[J];解剖學(xué)報(bào);2015年04期

2 徐秀民;于德新;張志強(qiáng);謝棟棟;王毅;張濤;陳磊;閔捷;丁德茂;鄒慈;;男性不育患者精子DNA損傷與非整倍體精子的研究[J];安徽醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2013年11期

3 李巍;馮雅琴;郝嬋娟;郭小黎;崔艷艷;賀敏;何新;;溶酶體相關(guān)細(xì)胞器生物發(fā)生復(fù)合體相互作用組構(gòu)成胞內(nèi)體運(yùn)輸網(wǎng)絡(luò)(英文)[J];遺傳學(xué)報(bào);2007年08期

本文編號(hào)：2415509