【摘要】：目的本研究旨在探索“通督啟神”法指導(dǎo)下的不同針刺干預(yù)方法對(duì)8月齡SAMP8快速老化小鼠的作用差異,以期為臨床選擇不同針刺干預(yù)方法治療老年癡呆提供客觀的科學(xué)依據(jù)；并在此基礎(chǔ)上,探討“通督啟神”針?lè)ǜ深A(yù)8月齡SAMP8快速老化小鼠在腦內(nèi)海馬區(qū)改善神經(jīng)炎性方面可能的作用機(jī)制,以期揭示“通督啟神”針?lè)òl(fā)揮治療效用的機(jī)理。方法選用8月齡SAMP8快速老化小鼠60只,按隨機(jī)數(shù)字法分為老年癡呆組(AD)、藥物治療組(M)、針刺治療組(A)、針?biāo)幗Y(jié)合組(MA)、脈沖電針組(EA)、音樂(lè)電針組(MEA)6組,每組10只,同背景正常老化小鼠SAMR1小鼠10只為正常對(duì)照組(N)。N組：相同飼養(yǎng)條件下不做任何處理,但要在其他組治療時(shí),抓取一次,并用相同鼠套進(jìn)行束縛,以保證處理?xiàng)l件相同,每天1次,共15天。AD組：干預(yù)方法同空白組。M組：按0.65μ g/g體重灌胃給藥,并在灌胃給藥結(jié)束后用相同鼠套進(jìn)行束縛,以保證處理?xiàng)l件相同,每天1次,共15天。A組：選取百會(huì)穴、印堂穴、人中穴三個(gè)穴位。人中穴采用快速點(diǎn)刺方法。點(diǎn)刺結(jié)束后,相同鼠套將小鼠固定好,百會(huì)穴向下、印堂穴向上平刺進(jìn)針,進(jìn)針深度為0.5cm,膠帶固定,留針20min,每天1次,共15天。MA組：在灌胃給藥結(jié)束后,依照針刺治療組干預(yù)方法進(jìn)行干預(yù)。EA組：穴位選取與進(jìn)針深度同針刺治療組,進(jìn)針固定后,針柄連接韓式電針儀,疏波,電針頻率為2Hz,電壓為2V,電流強(qiáng)度為0.1mA,針刺強(qiáng)度以小鼠頭部微顫為宜。每次治療20min,每天1次,共15天。MEA組：穴位選取與進(jìn)針深度同針刺治療組,進(jìn)針固定后,針柄連接音樂(lè)電針儀,選取“癡呆治療”的音樂(lè)處方,電流強(qiáng)度以小鼠保持安靜,不掙扎撕咬為宜。每次治療20min,每天1次,共15天。15天治療結(jié)束后,運(yùn)用Morris水迷宮實(shí)驗(yàn)對(duì)各組小鼠進(jìn)行行為學(xué)檢測(cè)；運(yùn)用Micro-PET對(duì)各組小鼠不同腦區(qū)葡萄糖代謝水平進(jìn)行檢測(cè)；運(yùn)用蘇木精-伊紅染色觀察各組小鼠海馬齒狀回神經(jīng)元形態(tài)與排列情況；采用免疫組織化學(xué)方法觀察各組小鼠海馬區(qū)A β1-42表達(dá)情況,及NLRP3炎性小體相關(guān)蛋白(NLRP3、 ASC、Caspase-1、 IL-1β)的定性表達(dá)；采用Western blot分析各組小鼠NLRP3炎性小體相關(guān)蛋白NLRP3 Caspase-1、IL-1β)的相對(duì)表達(dá)含量。結(jié)果1,Morris水迷宮結(jié)果顯示：各組逃避潛伏期：與N組相比較,從訓(xùn)練第1天至第5天,其余各組的逃避潛伏期均高于N組(P0.05)。與AD組相比較,從訓(xùn)練第1天至第5天,M組、A組、MA組、EA組、MEA組的逃避潛伏期均低于AD組；在訓(xùn)練的第1天,MA組的逃避潛伏期就明顯低于AD組(P0.05)：在訓(xùn)練的第4天與第5天,MA組、EA組、MEA組的逃避潛伏期均明顯低于AD組(P0.05)。穿越平臺(tái)次數(shù)、目標(biāo)象限游泳距離比與目標(biāo)象限游泳時(shí)間比：A組、MA組、EA組、MEA組均優(yōu)于AD組(P0.05),且MA組、EA組、MEA組分別在與目標(biāo)象限游泳時(shí)間比、穿越平臺(tái)次數(shù)中優(yōu)于M組(目標(biāo)象限游泳時(shí)間比：MA組P0.05、EA組P0.05、MEA組P0.01;穿越平臺(tái)次數(shù)：MEA組P0.05)。2. Micro-PET結(jié)果顯示：海馬區(qū)18F-FDG每克組織攝取率情況：與N組相比較,AD組與M組海馬區(qū)FDG每克組織攝取率明顯低于N組(P0.01)。同AD組相比較,A組、MA組、EA組與MEA組海馬區(qū)18F-FDG每克組織攝取率均明顯高于AD組(P0.01)。同M組相比較,MA組、EA組與MEA組海馬區(qū)18F-FDG每克組織攝取率均明顯高于M組(MA組、EA組P0.05;MEA組P0.01)。額葉18F-FDG每克組織攝取率情況：與N組相比較,其余各組小鼠額葉對(duì)于18F-FDG的每克組織攝取率均低于N組(AD組、M組、A組、MA組與EA組P0.01；MEA組P0.05)。頂葉18F-FDG每克組織攝取率情況：與N組相比較,其余各組小鼠頂葉對(duì)于18F-FDG的每克組織攝取率均低于N組(AD組、M組、A組與MA組P0.01；EA組與MEA組P0.05)。3.HE染色結(jié)果顯示：正常對(duì)照組小鼠海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層顆粒細(xì)胞排列有序、緊密,胞體呈卵圓形,染色清楚且均勻,細(xì)胞核呈圓形,核仁清晰,基本沒(méi)有核仁固縮現(xiàn)象；分子層與多形細(xì)胞層亦排列整齊。老年癡呆組：首先,分子層細(xì)胞排列松散；其次,顆粒細(xì)胞層中顆粒細(xì)胞排列散亂,不規(guī)則,胞體形狀不規(guī)則,并出現(xiàn)大量細(xì)胞的核仁固縮,細(xì)胞漿深染；再次,多形細(xì)胞層中細(xì)胞排列紊亂,部分細(xì)胞出現(xiàn)核仁固縮現(xiàn)象。將藥物治療組、針刺治療組、針?biāo)幗Y(jié)合組、脈沖電針組及音樂(lè)電針組小鼠海馬齒狀回HE染色結(jié)果同老年癡呆組相比較,可見(jiàn)海馬齒狀回顆粒細(xì)胞層中顆粒細(xì)胞排列均較為整齊,且核仁固縮情況均有一定改善。4.Aβ1-42免疫組化積分光密度分析結(jié)果顯示：與N組相比較,AD組小鼠海馬區(qū)A β1-42蛋白的積分光密度明顯升高(P0.01)。與AD組相比較,M組、A組、MA組、EA組及MEA組小鼠海馬區(qū)A β 1-42蛋白的積分光密度均顯著下降(M組：P0.05；A組、MA組、EA組及MEA組：P0.01)。與M組相比較,A組、MA組、EA組及MEA組小鼠海馬區(qū)A β 1-42蛋白的積分光密度均顯著下降(A組：P0.05；MA組、EA組及MEA組：P0.01)。與A組相比較,EA組與MEA組小鼠海馬區(qū)Aβ 1-42蛋白的積分光密度均顯著下降(EA組：P0.05；MEA組：P0.01)。5. NLRP3炎性小體相關(guān)蛋白(NLRP3、ASC、Caspase-1、IL-1β)免疫組化與Western blot分析結(jié)果顯示：NLRP3相對(duì)表達(dá)量：與N組相比較,AD組NLRP3蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯增高(P0.01)。同樣,M組、A組、MA組、EA組及MEA組小鼠海馬區(qū)內(nèi)的NLRP3蛋白相對(duì)表達(dá)量也較N組有所增加(P0.05)。同AD組相比較,M組、A組、MA組、EA組及MEA組小鼠海馬區(qū)內(nèi)的NLRP3蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯下降(P0.01)。ASC相對(duì)表達(dá)量：與N組相比較,AD組的ASC蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯增高(P0.01)。與AD組相比較,M組、A組、MA組、EA組與MEA組小鼠海馬區(qū)ASC蛋白相對(duì)表達(dá)量明顯下降(P0.01)。Caspase-1相對(duì)表達(dá)量：與N組相比較,AD組小鼠海馬區(qū)Caspase-1蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯增高(P0.01)。與AD組相比較,M組、A組、MA組、EA組與MEA組小鼠海馬區(qū)Caspase-1蛋白的相對(duì)表達(dá)量明顯降低(P0.01)。IL-1β相對(duì)表達(dá)量：與N組相比較,其他各組小鼠海馬區(qū)IL-1β蛋白的表達(dá)均顯著增高(AD組、M組、A組、MA組與EA組P0.01；MEA組P0.05)。與AD組相比較,M組、A組、MA組、EA組及MEA組小鼠海馬區(qū)IL-1β蛋白的表達(dá)均顯著下降(P0.01)。與M組相比較,EA組與MEA組海馬區(qū)IL-1β蛋白的表達(dá)較M組有所下降(P0.05)。結(jié)論1.針刺干預(yù)方法可改善老年癡呆模型小鼠的空間學(xué)習(xí)記憶能力,針?biāo)幝?lián)合干預(yù)的改善效果優(yōu)于單一藥物(多奈哌齊)干預(yù)；脈沖電針與音樂(lè)電針的干預(yù)效果均優(yōu)于藥物干預(yù),且音樂(lè)電針的優(yōu)勢(shì)作用更為明顯。2.針刺干預(yù)方法可改善老年癡呆模型小鼠海馬區(qū)神經(jīng)元葡萄糖代謝水平,針?biāo)幝?lián)合干預(yù)的改善效果優(yōu)于單一藥物(多奈哌齊)干預(yù)；脈沖電針與音樂(lè)電針的干預(yù)效果均優(yōu)于藥物干預(yù),且音樂(lè)電針的優(yōu)勢(shì)作用更為明顯。3.針刺干預(yù)方法可改善老年癡呆模型小鼠海馬齒狀回神經(jīng)元的凋亡現(xiàn)象,并能有效抑制A β1-42的表達(dá)且作用效果優(yōu)于藥物多奈哌齊,針?biāo)幝?lián)合干預(yù)對(duì)此的改善效果可明顯優(yōu)于單一藥物(多奈哌齊)干預(yù)；脈沖電針與音樂(lè)電針對(duì)A β1-42的抑制作用既優(yōu)于藥物多奈哌齊,又優(yōu)于單一針刺干預(yù),且音樂(lè)電針的優(yōu)勢(shì)作用更為明顯。4.針刺干預(yù)方法可有效抑制老年癡呆模型小鼠海馬區(qū)炎性因子IL-1β的表達(dá),針?biāo)幝?lián)合干預(yù)的抑制效果優(yōu)于單一針刺干預(yù)；脈沖電針與音樂(lè)電針的干預(yù)效果均優(yōu)于藥物干預(yù),且音樂(lè)電針的優(yōu)勢(shì)作用更為明顯。5.“通督啟神”針刺干預(yù)方法可有效抑制小膠質(zhì)細(xì)胞內(nèi)Aβ蛋白內(nèi)源性受體NLRP3炎性小體相關(guān)蛋白：NLRP3、ASC與Caspase-1的合成與表達(dá),從而降低炎性因子IL-1β的分泌與釋放。
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【學(xué)位授予單位】：北京中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級(jí)別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類(lèi)號(hào)】：R245;R-332
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本文編號(hào)：2366794