【摘要】：【目的】建立一種培養(yǎng)臍血高增殖潛能內(nèi)皮祖細(xì)胞(High proliferative potential-endothelial progenitorcells,HPP-EPCs)的穩(wěn)定經(jīng)濟的新方法,并將由HPP-EPCs增殖而來的內(nèi)皮祖細(xì)胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)與臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞(Human umbilical vein endothelial cells,HUVECs)進(jìn)行體外比較。【方法】分離臍血單個核細(xì)胞,接種到纖連蛋白(Fibronectin,FN)預(yù)處理的器皿中,用含有血管內(nèi)皮生長因子(VEGF)和內(nèi)皮細(xì)胞生長添加物(ECGS)等的MCDB131培養(yǎng)基培養(yǎng),4d后去除未貼壁細(xì)胞,繼續(xù)培養(yǎng)10～21d后,可以得到HPP-EPCs來源的EPC克隆;從人臍帶中分離HUVECs,用含有EGF的MCDB131培養(yǎng)基擴增培養(yǎng);同時分離培養(yǎng)人成纖維細(xì)胞(Humanembryonic fibroblast cells,hEFs)。通過免疫表型、UEA1結(jié)合試驗、Matrigel試驗、DiI-Ac-LDL吞噬試驗等對分離的臍血EPCs進(jìn)行鑒定,以HUVECs為陽性對照,hEFs為陰性對照。【結(jié)果】1個HPP-EPC可在2個月中擴增出108～1010個EPCs細(xì)胞,在長期體外培養(yǎng)中可以保持正常核型。臍血EPCs和HUVECs均可表達(dá)CD31、CD144、vWF,結(jié)合UEA1,并能在Matrigel上形成毛細(xì)血管樣結(jié)構(gòu),也能吞噬DiI-Ac-LDL�！窘Y(jié)論】本研究所建立的新方法能從臍血中高效經(jīng)濟地獲得較原始的EPCs,并能在體外長期擴增培養(yǎng),有望成為缺血性疾病細(xì)胞替代治療有效的種子細(xì)胞。
[Abstract]:[objective] to establish a stable and economical method for the culture of umbilical cord blood endothelial progenitor cells (High proliferative potential-endothelial progenitorcells,HPP-EPCs) with high proliferative potential, and to establish a stable and economical method for the proliferation of endothelial progenitor cells (Endothelial progenitor cells,) derived from HPP-EPCs. [methods] umbilical cord blood mononuclear cells were isolated and inoculated into vessels pretreated with fibronectin (Fibronectin,FN). EPC clones derived from HPP-EPCs could be obtained by using MCDB131 medium containing vascular endothelial growth factor (VEGF) and endothelial cell growth additive (ECGS). After 4 days of culture, unadherent cells were removed. After 1021 days of culture, EPC clones derived from HPP-EPCs could be obtained. HUVECs, isolated from human umbilical cord was amplified by MCDB131 medium containing EGF, and human fibroblast (Humanembryonic fibroblast cells,hEFs was isolated and cultured at the same time. The isolated umbilical cord blood EPCs was identified by immunophenotype, UEA1 binding test, Matrigel test and DiI-Ac-LDL phagocytosis test. HUVECs was used as positive control. [results] one HPP-EPC could amplify 108G 1010 EPCs cells in 2 months and maintain normal karyotype in long-term culture in vitro. Both EPCs and HUVECs can express CD31,CD144,vWF, combined with UEA1, and form capillary structure on Matrigel, and can also phagocystify DiI-Ac-LDL. [conclusion] the new method developed in this study can efficiently and economically obtain primitive EPCs, from cord blood. It is expected to be an effective seed cell for cell replacement therapy of ischemic disease.
【作者單位】： 中南大學(xué)生殖與干細(xì)胞工程研究所;人類干細(xì)胞國家工程研究中心;
【基金】：國家高技術(shù)研究發(fā)展計劃(“863”計劃)項目(2011AA020113) 湖南省科技計劃項目(2011FJ3159) 長沙市科技計劃項目(K1104069-31)
【分類號】：R329

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本文編號：2365755