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【摘要】：目的構建分泌性表達布魯氏菌外膜蛋白OMP25基因重組卡介苗(rBCG-omp25),并免疫BALB/c小鼠,觀察其免疫作用。方法利用分子生物學技術構建重組穿梭分泌載體pMV261-Ag85B-omp25,電穿孔技術導入卡介苗(BCG)。通過抗生素篩選、重組卡介苗基因組PCR擴增、測序,以及Western blot對重組卡介苗進行鑒定。分別用rBCG-omp25、BCG腹腔接種BALB/c小鼠,于免疫后第10、20、30、40和50d稱重,尾部采血,用表達純化的融合蛋白OMP25-32a檢測免疫小鼠抗體的生成情況,用流式細胞儀(FCM)檢測CD4+、CD8+T淋巴細胞百分率,并計算CD4+/CD8+T細胞比值。制作小鼠肝組織切片,HE染色觀察病理學變化。結果重組卡介苗rBCG-omp25含有Ag85Bomp25序列,大小為745bp;Western blot表明rBCG-omp25可分泌表達布魯氏菌OMP25。rBCG-omp25免疫小鼠后第20d,用Western blot檢測到布魯氏菌OMP25特異性抗體;rBCG-omp25免疫組和BCG免疫組的CD4+、CD8+T細胞百分率分別為38.68%、11.32%和、48.44%、14.01%,PBS組為33.24%、9.81%,差異有統(tǒng)計學意義(P0.05)。免疫后50d內rBCG-omp25組、BCG組與PBS組小鼠體重差異無統(tǒng)計學意義(P0.05);各實驗組小鼠肝組織均未見明顯病理改變。結論構建的rBCG-omp25能夠表達特異性蛋白OMP25。該蛋白能刺激小鼠產生特異性抗體,能刺激小鼠外周血CD4+、CD8+T淋巴細胞增殖。rBCG-omp25毒力弱,可作為預防布魯氏菌病的疫苗候選株之一。
[Abstract]:Objective to construct recombinant BCG vaccine (rBCG-omp25) expressing OMP25 gene of Brucella spp. Methods Recombinant shuttle secretory vector pMV261-Ag85B-omp25, electroporation technique was used to construct recombinant shuttle secretory vector pMV261-Ag85B-omp25, into BCG (BCG). By molecular biology technique. The recombinant BCG vaccine was identified by antibiotic screening, PCR amplification, sequencing and Western blot. BALB/c mice were inoculated intraperitoneally with rBCG-omp25,BCG and weighed on the 10th day after immunization. Blood was collected from the tail. The antibody production was detected by OMP25-32a, and the percentage of CD4 and CD8 T lymphocytes was detected by flow cytometry (FCM). The ratio of CD4 / CD8 T cells was calculated. The liver tissue sections of mice were made and the pathological changes were observed by HE staining. Results the recombinant BCG rBCG-omp25 contained Ag85Bomp25 sequence. The specific antibody to brucella OMP25 was detected by Western blot on the 20th day after immunization with OMP25.rBCG-omp25. The percentage of CD4 and CD8 T cells in rBCG-omp25 immunized group and BCG immunized group were 38.68% and 11.32%, and 48.44 ~ 14.01%, 33.240.81%, respectively. The difference was statistically significant (P0.05). There was no significant difference in body weight between rBCG-omp25 group, BCG group and PBS group within 50 days after immunization (P0.05). Conclusion the constructed rBCG-omp25 can express the specific protein OMP25.. The protein can stimulate the production of specific antibodies and the proliferation of CD4 and CD8 T lymphocytes in peripheral blood of mice. RBCG-omp25 is weak in virulence and can be used as one of the vaccine candidate strains to prevent brucellosis.
【作者單位】： 石河子大學醫(yī)學院病原生物學與免疫學教研室;阿克蘇地區(qū)天山肉用種羊基地畜牧獸醫(yī)站;新疆石河子市人民醫(yī)院;石河子大學動物科技學院;
【基金】：國家科技支撐計劃(No.2013BAI05B05) 國際科技合作項目(No.2013DFA32380) 國家自然科學基金項目(No.31060334)
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：2291229