【摘要】：目的建立細(xì)菌周質(zhì)內(nèi)抗原抗體共表達系統(tǒng)。方法將人白介素-1β(hIL-1β)基因和抗人白介素1β單鏈抗體(anti-hIL-1βscFv)基因分別插入到細(xì)菌展示載體pBFD的pelB前導(dǎo)肽(游離型前導(dǎo)肽)和NlpA前導(dǎo)肽(錨定型前導(dǎo)肽)下游構(gòu)建出重組載體pBFD-Ab-Ag。將pBFD-Ab-Ag轉(zhuǎn)入到E.coli DH5α中誘導(dǎo)表達,抗原和抗體蛋白相互結(jié)合而被錨定到細(xì)菌內(nèi)膜外側(cè),破除細(xì)菌外壁(原生質(zhì)球制備)后與適當(dāng)濃度的FITC標(biāo)記的小鼠抗hIL-1β抗體進行孵育,最后經(jīng)流式細(xì)胞儀檢測熒光信號,根據(jù)熒光信號強弱分析抗原抗體表達和相互作用情況。結(jié)果 pBFD-Ab-Ag E.coli DH5α具有很強的熒光信號,陽性率獲得了大大的提高。結(jié)論成功建立了建立細(xì)菌周質(zhì)內(nèi)抗原抗體共表達系統(tǒng),實現(xiàn)了抗體和抗原細(xì)菌周質(zhì)內(nèi)的正確折疊和相互識別。簡化了現(xiàn)有的抗體篩選的流程,為蛋白質(zhì)相互作用的研究提供了新的技術(shù)手段。
[Abstract]:Objective to establish a co-expression system of antigens and antibodies in periplasmic bacteria. Methods Human interleukin-1 尾 (hIL-1 尾) gene and anti-human interleukin-1 尾 single chain antibody (anti-hIL-1 尾 scFv) gene were inserted into the downstream of pelB prepeptide (free precursor) and NlpA precursor (anchoring prepeptide) of bacterial display vector pBFD, respectively, and the recombinant vector pBFD-Ab-Ag. was constructed by inserting human interleukin-1 尾 (hIL-1 尾) gene and anti-human interleukin 1 尾 single chain antibody (anti-hIL-1 尾 scFv) gene into the downstream of the bacterial display vector pBFD. PBFD-Ab-Ag was transferred into E.coli DH5 偽 to induce expression, the antigen and antibody protein were combined and anchored to the outside of the bacterial intima, then the outer wall of the bacteria (protoplast preparation) was removed and incubated with the appropriate concentration of FITC labeled mouse anti-hIL-1 尾 antibody. Finally, fluorescence signals were detected by flow cytometry, and the expression and interaction of antigens and antibodies were analyzed according to the intensity of fluorescence signals. Results pBFD-Ab-Ag E.coli DH5 偽 had strong fluorescence signal and the positive rate was greatly improved. Conclusion the co-expression system of antigens and antibodies in the periplasm of bacteria was successfully established, and the correct folding and mutual recognition of antibodies and antigens in the periplasm of bacteria were realized. It simplifies the existing antibody screening process and provides a new technique for protein interaction research.
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學(xué)研究院黑龍江水產(chǎn)研究所;東北農(nóng)業(yè)大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院生物制藥教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(31001084,30700591)
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前3條

1 馬富強;馮雁;楊廣宇;;基于熒光激活細(xì)胞分選技術(shù)的超高通量酶活性篩選方法及其應(yīng)用[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2012年04期

2 徐黎明;尹成凱;任桂萍;田輝;王雪琴;丁良君;李德山;;篩選Fab抗體庫的細(xì)菌展示技術(shù)的建立[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2011年10期

3 田輝;白福良;徐黎明;王文飛;牛澤杉;任桂萍;李德山;;錯配PCR技術(shù)提高抗hIL17A單鏈抗體親和力的研究[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2012年07期

【共引文獻】

相關(guān)期刊論文 前1條

1 徐黎明;任桂萍;尹杰超;田輝;李德山;;基于流式細(xì)胞術(shù)的scFv抗體庫篩選技術(shù)的建立[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2013年01期

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前1條

1 馬富強;基于熒光激活微液滴分選的脂肪酶/酯酶超高通量篩選體系[D];吉林大學(xué);2012年

【二級參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前8條

1 賈帥爭,孫紅琰,王全立;酵母表面展示技術(shù)及應(yīng)用[J];軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院院刊;2001年02期

2 楊根生;戚映丹;歐志敏;姚善涇;;油包水微乳液中抗體酶催化布洛芬酯選擇性水解的酶學(xué)特性(英文)[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2009年02期

3 章杰;劉瓊明;許丹科;賀福初;;無細(xì)胞系統(tǒng)原位制備蛋白質(zhì)芯片及其應(yīng)用[J];生物化學(xué)與生物物理進展;2009年04期

4 劉向昕,展德文,張兆山;細(xì)菌表面展示技術(shù)的應(yīng)用研究進展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;2005年02期

5 尹成凱;徐黎明;任桂萍;張巧;劉向宇;田輝;李德山;;酵母展示篩選scFv方法的建立[J];細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志;2009年12期

6 鐘彥偉,成軍,施雙雙,夏小兵,李克,董菁,劉妍,楊繼珍;抗HBsAg人源單鏈可變區(qū)抗體的篩選與可溶性抗體的表達[J];中國病毒學(xué);2001年02期

7 陳曉穗,汪保安,周麗君,王欲曉,曲佳,張達矜,王琰;熱點突變法提高人源抗TNF-α抗體的親和力[J];中華微生物學(xué)和免疫學(xué)雜志;2004年08期

8 朱慧萌;谷學(xué)佳;任桂萍;孫陽;彭中宜;徐彤;李德山;;SUMO融合系統(tǒng)表達人白細(xì)胞介素17及其活性的研究[J];中國免疫學(xué)雜志;2010年07期

【相似文獻】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 胡斯奇;高友鶴;;高危型HPV E6蛋白與宿主PDZ蛋白相互作用的研究進展[J];微生物學(xué)免疫學(xué)進展;2009年02期

2 尹肖云;孟元光;楊潔;伍志強;趙亞力;韓為東;;白血病相關(guān)蛋白16與角蛋白18相互作用的鑒定[J];生物技術(shù)通訊;2009年05期

3 楊海寧;;人乳頭瘤病毒E6蛋白致病作用的研究進展[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);2001年02期

4 李克;王琳;成軍;陸蔭英;洪源;劉妍;張玲霞;;乙型肝炎病毒蛋白結(jié)合蛋白的研究[J];世界華人消化雜志;2002年02期

5 房師松;董捷;程小雯;呂星;何建凡;逯建華;舒躍龍;;帶TAP標(biāo)簽的流感病毒8質(zhì)粒反向遺傳包裝系統(tǒng)的初步構(gòu)建[J];中國熱帶醫(yī)學(xué);2008年06期

6 劉景生,金蔭昌;鈣調(diào)蛋白的構(gòu)效關(guān)系及其與藥物的相互作用[J];生理科學(xué)進展;1985年02期

7 于洪波;;E2F:Rb抑癌蛋白與病毒癌蛋白間的紐帶[J];醫(yī)學(xué)分子生物學(xué)雜志;1993年04期

8 路艷萍;;細(xì)菌轉(zhuǎn)錄器內(nèi)的蛋白-蛋白相互作用[J];國外醫(yī)學(xué)(微生物學(xué)分冊);1994年02期

9 蘇燕,秦文斌,雎天林;幾種魚類血紅蛋白不與人血紅蛋白相互作用及其進化意義[J];包頭醫(yī)學(xué)院學(xué)報;2000年02期

10 沈傳陸;;癌基因TRE17與肌鈣蛋白C2相互作用的鑒定[J];中國病理生理雜志;2005年12期

相關(guān)會議論文 前10條

1 孟祥芝;王芹;李德新;;應(yīng)SPR／BIA和MALDI-TOF MS發(fā)現(xiàn)HUVEC中與漢坦病毒核蛋白相互作用的蛋白[A];第七次全國腎綜合征出血熱學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

2 韓俊;張瑾;姚海蘭;王小凡;李鋒;陳嵐;高晨;高建梅;聶凱;董小平;;微管相關(guān)蛋白Tau與朊蛋白PrP的相互作用的研究[A];第一屆全國腦與認(rèn)知科學(xué)學(xué)術(shù)研討會論文集[C];2005年

3 宋旭;李靈;王剛;俸婷婷;崔瑩;吳傳芳;Alan Garen;;大分子非編碼RNA誘導(dǎo)細(xì)胞惡性轉(zhuǎn)化的作用機制研究[A];中國遺傳學(xué)會第八次代表大會暨學(xué)術(shù)討論會論文摘要匯編（2004-2008）[C];2008年

4 王平忠;于海濤;張野;白雪帆;;漢坦病毒蛋白之間相互作用研究進展[A];中華醫(yī)學(xué)會第四次全國艾滋病、病毒性丙型肝炎暨全國熱帶病學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2009年

5 黃孝天;余克花;陳洪;劉發(fā)娣;劉晶星;;柯薩奇病毒蛋白VP1和細(xì)胞蛋白GM130存在相互作用[A];2006中國微生物學(xué)會第九次全國會員代表大會暨學(xué)術(shù)年會論文摘要集[C];2006年

6 王震;孟憲敏;郭蓮軍;;人類新基因Nelin及其生物學(xué)特性的研究[A];湖北省暨武漢生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會第八屆會員代表大會和第十五次學(xué)術(shù)年會論文摘要匯編[C];2004年

7 吳建國;;病毒與致病、致癌因子的相互作用及功能研究[A];湖北省生物工程學(xué)會2004年年會學(xué)術(shù)報告及論文摘要匯編[C];2004年

8 程勇前;王琳;劉妍;徐東平;鐘彥偉;曲建慧;田江克;戴久增;李曉東;成軍;;HCV NS4A與參與調(diào)節(jié)鈣離子信號的CAML蛋白相互作用的研究[A];第五屆全國肝臟疾病臨床暨中華肝臟病雜志成立十周年學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2006年

9 胡寶成;劉爽;高寧;繩紀(jì)坡;;MEPE/OF45在DNA損傷應(yīng)答中的作用機制研究[A];中國遺傳學(xué)會“發(fā)育、遺傳和疾病”研討會論文匯編集[C];2007年

10 桑梅香;丁春艷;周欣亮;劉麗華;孟君;單保恩;;蛋白激酶Plk3對p73轉(zhuǎn)錄活性的影響及對其磷酸化位點的分析[A];河北省免疫學(xué)會第六次免疫學(xué)大會資料匯編[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前2條

1 記者 耿挺;科學(xué)家揭秘神經(jīng)軸突生長[N];上�？萍紙�;2007年

2 丁丁;科學(xué)家將發(fā)起人類蛋白質(zhì)組計劃[N];中國醫(yī)藥報;2008年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 林萬松;乙型肝炎病毒X蛋白與翻譯延長因子lal（eEFlal）的相互作用及對其功能的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

2 王鑫;人乳頭瘤病毒58型（HPV58）E2蛋白與E7蛋白的直接相互作用及效果研究[D];山東大學(xué);2012年

3 陳金煙;2447nt-489nt乙型肝炎病毒剪接特異性蛋白與肝細(xì)胞蛋白相互作用研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2010年

4 孫宇;豬天然抗病毒分子APOBEC3F對豬內(nèi)源性反轉(zhuǎn)錄病毒的抑制作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2011年

5 王芳;志賀氏菌Ⅲ型分泌系統(tǒng)效應(yīng)子蛋白IpaH4.5功能研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2010年

6 李強;腺病毒12型癌蛋白E1B55-kDa與宿主細(xì)胞內(nèi)蛋白相互作用的研究[D];華中科技大學(xué);2010年

7 王蕾;單純皰疹病毒Ⅰ型VP26蛋白在病毒感染過程中的分子生物學(xué)功能分析[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2008年

8 耿彥生;戊型肝炎病毒在家禽、家畜中的流行及其ORF3蛋白與人肝細(xì)胞蛋白相互作用的研究[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2011年

9 郝肇菁;Ferritin-L和SCCA1作為HBV共受體的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2008年

10 呂銘宇;HIV-1 Vpu蛋白與人類Tetherin蛋白相互作用機制研究[D];吉林大學(xué);2012年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 曹志國;睪丸特異蛋白GGN1與GGNBP2的相互作用研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

2 楊丹麗;人巨細(xì)胞病毒編碼蛋白pUL23與宿主細(xì)胞蛋白IFP35相互作用[D];暨南大學(xué);2010年

3 曾琳姣;流感病毒NS1蛋白對細(xì)胞生長調(diào)控及與Nucleolin相互作用的研究[D];天津大學(xué);2012年

4 昝金行;幾類重要蛋白—蛋白相互作用的分子模擬[D];北京協(xié)和醫(yī)學(xué)院;2012年

5 楊瑞峰;MIWI蛋白在小鼠睪丸發(fā)育過程中的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2010年

6 林健;小分子與蛋白相互作用分析的生物傳感方法研究[D];湖南大學(xué);2011年

7 曾保娟;人巨細(xì)胞病毒蛋白pUL23影響宿主蛋白RACK1與STAT1間的相互作用[D];暨南大學(xué);2012年

8 王峰;表皮調(diào)節(jié)素、纖聯(lián)蛋白與去唾液酸糖蛋白受體介導(dǎo)HBV進入肝細(xì)胞機理初步研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2007年

9 李志杰;T7噬菌體展示篩選系統(tǒng)篩選與p38MAPK及PRAK相結(jié)合蛋白[D];第一軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 周麗娜;酵母雙雜交系統(tǒng)篩選FOXP3相互作用蛋白[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2006年

，

本文編號：2272697