【摘要】：目的建立細菌周質(zhì)內(nèi)抗原抗體共表達系統(tǒng)。方法將人白介素-1β(hIL-1β)基因和抗人白介素1β單鏈抗體(anti-hIL-1βscFv)基因分別插入到細菌展示載體pBFD的pelB前導肽(游離型前導肽)和NlpA前導肽(錨定型前導肽)下游構建出重組載體pBFD-Ab-Ag。將pBFD-Ab-Ag轉入到E.coli DH5α中誘導表達,抗原和抗體蛋白相互結合而被錨定到細菌內(nèi)膜外側,破除細菌外壁(原生質(zhì)球制備)后與適當濃度的FITC標記的小鼠抗hIL-1β抗體進行孵育,最后經(jīng)流式細胞儀檢測熒光信號,根據(jù)熒光信號強弱分析抗原抗體表達和相互作用情況。結果 pBFD-Ab-Ag E.coli DH5α具有很強的熒光信號,陽性率獲得了大大的提高。結論成功建立了建立細菌周質(zhì)內(nèi)抗原抗體共表達系統(tǒng),實現(xiàn)了抗體和抗原細菌周質(zhì)內(nèi)的正確折疊和相互識別。簡化了現(xiàn)有的抗體篩選的流程,為蛋白質(zhì)相互作用的研究提供了新的技術手段。
[Abstract]:Objective to establish a co-expression system of antigens and antibodies in periplasmic bacteria. Methods Human interleukin-1 尾 (hIL-1 尾) gene and anti-human interleukin-1 尾 single chain antibody (anti-hIL-1 尾 scFv) gene were inserted into the downstream of pelB prepeptide (free precursor) and NlpA precursor (anchoring prepeptide) of bacterial display vector pBFD, respectively, and the recombinant vector pBFD-Ab-Ag. was constructed by inserting human interleukin-1 尾 (hIL-1 尾) gene and anti-human interleukin 1 尾 single chain antibody (anti-hIL-1 尾 scFv) gene into the downstream of the bacterial display vector pBFD. PBFD-Ab-Ag was transferred into E.coli DH5 偽 to induce expression, the antigen and antibody protein were combined and anchored to the outside of the bacterial intima, then the outer wall of the bacteria (protoplast preparation) was removed and incubated with the appropriate concentration of FITC labeled mouse anti-hIL-1 尾 antibody. Finally, fluorescence signals were detected by flow cytometry, and the expression and interaction of antigens and antibodies were analyzed according to the intensity of fluorescence signals. Results pBFD-Ab-Ag E.coli DH5 偽 had strong fluorescence signal and the positive rate was greatly improved. Conclusion the co-expression system of antigens and antibodies in the periplasm of bacteria was successfully established, and the correct folding and mutual recognition of antibodies and antigens in the periplasm of bacteria were realized. It simplifies the existing antibody screening process and provides a new technique for protein interaction research.
【作者單位】： 中國水產(chǎn)科學研究院黑龍江水產(chǎn)研究所;東北農(nóng)業(yè)大學生命科學學院生物制藥教研室;
【基金】：國家自然科學基金(31001084,30700591)
【分類號】：R392.1

【參考文獻】

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本文編號：2272697