【摘要】：目的研究小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(mouse bone marrow stem cells,mBMSCs)在氧化應(yīng)激損傷中哺乳動物雷帕霉素靶蛋白(mammaliatargetofrapamycin,mTOR)及其下游信號通路的變化及其作用。方法從30只雄性健康昆明小鼠的股骨中分離、培養(yǎng)和擴(kuò)增BMSCs。H2O2刺激mBMSCs建立氧化應(yīng)激損傷模型。實驗分為對照組(不予H2O2處理)、不同濃度H2O2(100、200、300、400、500、800、1 000μmol/L處理mBMSCs)損傷組(n=5)。采用MTT法檢測24、48、72 h各組的細(xì)胞活力;倒置顯微鏡觀察BMSCs的形態(tài)學(xué)改變;采用細(xì)胞核Hoechst33342染色觀察凋亡細(xì)胞核形態(tài);Western blot檢測各組Bcl-2、Bax、mTOR及其下游蛋白以及蛋白的磷酸化的表達(dá)。結(jié)果 100～1 000μmol/L濃度的H2O2作用mBMSCs24 h后,其形態(tài)學(xué)和病理學(xué)發(fā)生濃度依賴性的改變。H2O2濃度在100～300μmol/L時,隨著H2O2濃度的增高,mBMSCs的mTOR、p70S6K、S6的表達(dá)水平有增高的趨勢,磷酸化水平明顯增高(P0.01),抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá)增高(P0.01),凋亡蛋白Bax表達(dá)不明顯(P0.05)。H2O2濃度在400μmol/L以上時,隨著H2O2濃度的增高,p-mTOR、p-p70S6K、p-S6、BCL-2的表達(dá)水平降低(P0.05,P0.01),而mTOR、p70S6K、S6蛋白變化不明顯,同時Bax的表達(dá)水平明顯增高(P0.01)。結(jié)論一定強(qiáng)度的氧化應(yīng)激可以降低mBMSCs存活率,促進(jìn)細(xì)胞凋亡,其機(jī)理可能與抑制mTOR及其下游信號通路的活性和抗凋亡蛋白Bcl-2表達(dá),促進(jìn)凋亡蛋白Bax表達(dá)有關(guān)。
[Abstract]:Objective To study the changes of mammalian target to frapamycin (mTOR) and its downstream signaling pathway in oxidative stress injury of mouse bone marrow stem cells (mBMSCs). The model of oxidative stress injury was established by stimulating mBMSCs. The experiment was divided into control group (without H2O2 treatment) and injury group (n=5) with different concentrations of H2O2 (100,200,300,400,500,800,1 000 micromol/L treatment). Cell viability was detected by MTT assay at 24,48,72 hours; morphological changes of BMSCs were observed by inverted microscope; and apoptosis was observed by Hoechst 33342 staining. The expression of Bcl-2, Bax, mTOR and its downstream proteins and protein phosphorylation were detected by Western blot. Results The morphology and pathology of mBMSCs changed in a concentration-dependent manner after 24 h exposure to H2O2 at 100-1 000 micromol/L concentration. The expression levels of 6K, S6, Bcl-2, Bcl-2 and Bax increased significantly (P 0.01). When the concentration of H2O2 was above 400 micromol/L, the expression levels of p-mTOR, p-p70S6K, p-S6 and BCL-2 decreased with the increase of H2O2 concentration (P 0.05, P 0.01). Conclusion A certain intensity of oxidative stress can reduce the survival rate of mBMSCs and promote cell apoptosis. The mechanism may be related to inhibiting the activity of mTOR and its downstream signaling pathway and the expression of anti-apoptotic protein Bcl-2 and promoting the expression of apoptotic protein Bax.
【作者單位】： 重慶醫(yī)科大學(xué)神經(jīng)科學(xué)研究中心;第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所第一研究室 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室;第三軍醫(yī)大學(xué)大坪醫(yī)院野戰(zhàn)外科研究所第四研究室 創(chuàng)傷、燒傷與復(fù)合傷國家重點實驗室;
【基金】：國家重點基礎(chǔ)研究發(fā)展計劃(973計劃,2012CB518104) 國家重點實驗室基金(SKLZZ200907) 重慶市科委回國人員啟動基金(CSTC2010BB5036)~~
【分類號】：R329.25

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 董曉偉;王家寧;唐俊明;孔霞;郭凌鄖;鄭飛;張蕾;黃永章;楊建業(yè);;PEP-1-SOD1融合蛋白預(yù)處理對大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在缺氧無血清條件下的保護(hù)作用[J];湖北醫(yī)藥學(xué)院學(xué)報;2011年03期

2 方利君;付小兵;程飚;孫同柱;李建福;曹榮;王玉新;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞參與皮脂腺導(dǎo)管構(gòu)成的初步研究[J];感染.炎癥.修復(fù);2003年04期

3 付小兵,方利君,王玉新,孫同柱,程飚;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞自體移植提高豬皮膚創(chuàng)面修復(fù)質(zhì)量的初步研究[J];中華醫(yī)學(xué)雜志;2004年11期

4 王光輝,牟虹,梁傳余;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及其在軟骨組織缺損修復(fù)中的研究進(jìn)展[J];中國矯形外科雜志;2004年11期

5 周亞偉,梁婧,李巖;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞在造血干細(xì)胞移植中的應(yīng)用研究[J];腫瘤防治雜志;2005年12期

6 徐長憲,許運(yùn)賓,郭蘭敏,張永善,孟國偉;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外定向分化為心肌細(xì)胞的實驗研究[J];山東大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年09期

7 郭麗,尹飛,王欣,凌翎,呼和塔娜,李鵬,段德生,范洪學(xué);bFGF促增殖后骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向多巴胺能神經(jīng)元樣細(xì)胞的分化[J];中國生物制品學(xué)雜志;2005年06期

8 祝建中,苗宗寧,錢寒光,趙基棟;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞成骨性能的實驗研究[J];蘇州大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版);2005年05期

9 楊峰;;腺病毒介導(dǎo)血管內(nèi)皮生長因子基因_(165)在骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中的表達(dá)及其影響[J];中華老年心腦血管病雜志;2005年06期

10 項舟;胡煒;孔清泉;周海濤;張喜海;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞種植Ⅰ型膠原支架材料修復(fù)關(guān)節(jié)軟骨缺損的初步研究(英文)[J];中國修復(fù)重建外科雜志;2006年02期

相關(guān)會議論文 前10條

1 顏建英;;子癇前期與氧化應(yīng)激損傷[A];中華醫(yī)學(xué)會第三次全國妊娠期高血壓疾病學(xué)術(shù)研討會論文匯編[C];2011年

2 劉昱;宋健;陳錫昌;胡成俊;劉維新;;體外“心肌環(huán)境”誘導(dǎo)大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化的研究[A];解剖學(xué)雜志——中國解剖學(xué)會2002年年會文摘匯編[C];2002年

3 王詠波;王茜;于振乾;杜建玲;;窖蛋白-1在波動性高糖誘導(dǎo)的內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷中的作用及機(jī)制[A];中華醫(yī)學(xué)會第十次全國內(nèi)分泌學(xué)學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2011年

4 張婷;王凡;朱俊東;易龍;付鈺潔;糜漫天;;染料木黃酮對人血管內(nèi)皮細(xì)胞氧化應(yīng)激損傷的保護(hù)作用[A];重慶市營養(yǎng)學(xué)會學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

5 胡凱騫;張龍澤;陳春英;孫寶云;邢更妹;趙保路;趙宇亮;聶廣軍;;功能化富勒烯衍生物效應(yīng)探索:延長線蟲壽命和保護(hù)氧化應(yīng)激損傷的分子機(jī)理研究[A];第十一次中國生物物理學(xué)術(shù)大會暨第九屆全國會員代表大會摘要集[C];2009年

6 易龍;糜漫天;;植物化學(xué)物抗氧化應(yīng)激損傷結(jié)構(gòu)與功效關(guān)系的研究[A];重慶市營養(yǎng)學(xué)會學(xué)術(shù)會議論文匯編[C];2010年

7 馮凱;陳健琳;烏仁娜;徐晨;李欲航;陳虎;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞抑制異體T細(xì)胞反應(yīng)的實驗研究[A];第三屆全國血液免疫學(xué)學(xué)術(shù)大會論文集[C];2003年

8 徐衛(wèi);李建勇;朱光榮;費(fèi)曉明;孟麗娟;周小玉;汪承亞;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外培養(yǎng)的臨床研究[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

9 宮立眾;夏順中;張翼軍;張紅賓;史曦凱;鐘大平;裴莉;張勇;;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞中大小兩群細(xì)胞的生物學(xué)特性比較[A];第九屆全國實驗血液學(xué)會議論文摘要匯編[C];2003年

10 韓婧;李學(xué)軍;;姜黃素通過誘導(dǎo)人內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生自噬抗氧化應(yīng)激損傷[A];全國第十二屆生化與分子藥理學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2011年

相關(guān)重要報紙文章 前6條

1 趙煒;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞可減輕排異反應(yīng)[N];健康報;2004年

2 本報記者 吳潔;為實現(xiàn)“人體配件工廠”的夢想[N];科技日報;2002年

3 記者　秦軍　;“萬能細(xì)胞”巧治心臟病[N];浙江日報;2004年

4 本報記者 張曄;骨髓干細(xì)胞移植治心梗成功[N];科技日報;2003年

5 記者 張忠田;基因治療動脈粥樣硬化有了新途徑[N];健康報;2010年

6 山東省濟(jì)南醫(yī)院糖尿病診療中心副主任醫(yī)師 王建華;都是糖尿病神經(jīng)病變?nèi)堑牡淸N];醫(yī)藥經(jīng)濟(jì)報;2011年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 李海生;低氧促進(jìn)人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞增殖和分化及其機(jī)制研究[D];中國人民解放軍軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院;2005年

2 史達(dá);木豆葉聯(lián)合骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療股骨頭壞死的實驗與相關(guān)臨床研究[D];廣州中醫(yī)藥大學(xué);2007年

3 顧紹峰;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化為角膜上皮樣細(xì)胞的體外研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2008年

4 張偉;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)機(jī)制的研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2004年

5 張海峰;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植對大鼠急性肝功能衰竭治療作用的實驗研究[D];山東大學(xué);2007年

6 牟大鵬;抑制消減雜交技術(shù)篩選骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化前后差異表達(dá)基因[D];吉林大學(xué);2007年

7 景紅;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)為腎臟系膜細(xì)胞樣細(xì)胞的實驗研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

8 宋可新;黑色素細(xì)胞與骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞復(fù)合構(gòu)建組織工程皮膚的初步研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2008年

9 滕春燕;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞對急性胰腺炎損傷修復(fù)及其機(jī)制的實驗研究[D];吉林大學(xué);2009年

10 任曉勇;人生長分化因子-5基因轉(zhuǎn)染骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞及用于軟骨缺損修復(fù)的初步研究[D];第四軍醫(yī)大學(xué);2005年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 陳書尚;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植治療心力衰竭的實驗研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2005年

2 劉宏志;大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為神經(jīng)前體細(xì)胞的研究[D];中國醫(yī)科大學(xué);2005年

3 王艷芳;生物反應(yīng)器內(nèi)培養(yǎng)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞[D];大連理工大學(xué);2006年

4 陳潔;同種異體移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠心梗后心室重構(gòu)[D];浙江大學(xué);2006年

5 劉弘光;嘗試移植骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療大鼠糖尿病[D];中國醫(yī)科大學(xué);2006年

6 董玉泉;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、鑒定及生物學(xué)特性研究[D];青島大學(xué);2006年

7 項正兵;人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向膽堿能神經(jīng)元樣細(xì)胞定向分化的實驗研究[D];南昌大學(xué);2007年

8 周哲;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞bFGF復(fù)合降解膜修復(fù)皮膚缺損的研究[D];吉林大學(xué);2008年

9 賈小力;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞靜脈移植對損傷大鼠脊髓VEGF、bFGF表達(dá)及血管新生的影響[D];福建醫(yī)科大學(xué);2008年

10 劉書會;局部應(yīng)用血管內(nèi)皮生長因子及間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)物提高皮瓣成活率的實驗性研究[D];吉林大學(xué);2009年

，

本文編號：2243042