【摘要】：目的:為了深入研究透明帶的功能,體外表達人ZP3的N端肽段。方法:通過PCR克隆人ZP3的第77~703的DNA序列,利用該片段構(gòu)建hZP3的N端肽的原核表達載體,轉(zhuǎn)化大腸桿菌Rosetta(DE3)進行體外表達,利用分離的表達產(chǎn)物免疫小鼠,通過ELISA檢測抗體反應(yīng),利用Western blotting和免疫組化檢測抗血清與重組透明帶蛋白和人卵巢天然的透明帶蛋白的特異反應(yīng)。結(jié)果:Western blotting結(jié)果顯示,獲得了約27 ku的重組蛋白,用該蛋白免疫小鼠獲得了抗體滴度近20000的抗血清,該抗體能與重組透明帶蛋白和人卵巢天然的透明帶蛋白的特異反應(yīng)。結(jié)論:成功表達人ZP3的N端重組肽,表達產(chǎn)物具有免疫原性。
[Abstract]:Aim: to study the function of pellucida in vitro and express the N-terminal peptide of human ZP3. Methods: the DNA sequence of human ZP3 77703 was cloned by PCR, and the prokaryotic expression vector of N-terminal peptide of hZP3 was constructed by using this fragment. The expression of Rosetta (DE3) was transformed into E. coli Rosetta in vitro. The mice were immunized with the isolated expression product, and the antibody reaction was detected by ELISA. The specific reaction of antiserum to recombinant pellucida protein and human ovarian natural pellucida protein was detected by Western blotting and immunohistochemistry. Results the results of Western blotting showed that the recombinant protein was about 27 ku, and the antibody titer was about 20000 in mice. The antibody could react with the recombinant pellucida protein and the natural pellucida protein of human ovary. Conclusion: the N-terminal recombinant peptide of human ZP3 is successfully expressed and the expressed product has immunogenicity.
【作者單位】： 暨南大學(xué)生命科學(xué)技術(shù)學(xué)院發(fā)育與再生生物學(xué)系;
【基金】：國家自然科學(xué)基金重點項目(21307017)
【分類號】：R321

【參考文獻】

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【共引文獻】

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【二級參考文獻】

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本文編號：2202259