【摘要】：本研究旨在探討載帶超氧化物歧化酶基因的腺病毒(AD-ECSOD)感染恒河猴骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(R-BMMSC)生物學(xué)特性的影響。用含有ECSOD和報(bào)告基因EGFP的腺病毒感染經(jīng)梯度密度離心和貼壁培養(yǎng)法分離、培養(yǎng)并純化的R-BMMSC,用倒置熒光顯微鏡及流式細(xì)胞儀觀察檢測(cè)感染效率,ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)上清中的ECSOD蛋白表達(dá)水平;流式細(xì)胞儀檢測(cè)感染后R-BMMSC的表面抗原(CD34,CD29,CD45,CD90,HLA-DR);油紅O和茜素紅染色觀察R-BMMSC的成骨及成脂誘導(dǎo)分化能力;MTT法檢測(cè)AD-ECSOD轉(zhuǎn)染對(duì)R-BMMSC增殖能力的影響。結(jié)果表明,不同滴度AD-ECSOD(感染滴度為每個(gè)細(xì)胞500,1 000,1 500和2 000 pfu)對(duì)R-BMMSC的感染效率均95%。轉(zhuǎn)染后24 h即可在細(xì)胞上清液中檢測(cè)到ECSOD蛋白表達(dá),且明顯高于對(duì)照組(P0.01),轉(zhuǎn)染后48 h蛋白表達(dá)量最高。AD-ECSOD轉(zhuǎn)染后R-BMMSC的增殖能力及其表面抗原表達(dá)和多向分化能力與未轉(zhuǎn)染組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P0.05)。結(jié)論:AD-ECSOD能夠高效轉(zhuǎn)染R-BMMSC,對(duì)其生物學(xué)特性無明顯影響。
[Abstract]:The aim of this study was to investigate the biological characteristics of rhesus monkey bone marrow mesenchymal stem cells (R-BMMSC) infected by adenovirus carrying superoxide dismutase gene (AD-ECSOD). The adenovirus containing ECSOD and reporter gene EGFP was isolated by gradient density centrifugation and adherent culture. The purified R-BMMSC was cultured and purified by inverted fluorescence microscopy. The infection efficiency was observed by flow cytometry, and the expression of ECSOD protein in cell culture supernatant was detected by ELISA; the surface antigens of R-BMMSC (CD34, CD29, CD45, CD90, HLA-DR) were detected by flow cytometry; the osteogenesis and adipogenic differentiation of R-BMMSC were observed by oil red O and alizarin red staining; and the proliferation of R-BMMSC by AD-ECSOD transfection was detected by MTT. The results showed that the infection efficiency of R-BMMSC was 95% with different titers of AD-ECSOD (500,1,1,500 and 2,000 PFU per cell). The expression of ECSOD protein was detected in the supernatant 24 hours after transfection, which was significantly higher than that in the control group (P 0.01). The expression of ECSOD protein was the highest at 48 hours after transfection. Conclusion: AD-ECSOD can transfect R-BMMSC efficiently and has no significant effect on its biological characteristics.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院放射與輻射醫(yī)學(xué)研究所;南昌市疾病預(yù)防控制中心;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金面上項(xiàng)目(編號(hào)81172594)
【分類號(hào)】：R329.28

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本文編號(hào)：2191670