【摘要】：目的探尋從豚鼠心肌組織中提取純化全長的心肌Cav1.2鈣通道蛋白的實驗方法。方法采用組織勻漿、超高速離心的方法獲得溶解狀態(tài)的Cav1.2鈣通道蛋白,使用親和層析的方法對鈣通道蛋白進行進一步的純化,再應(yīng)用Western blot技術(shù)使用不同的Cav1.2鈣通道抗體對所制備的心肌Cav1.2鈣通道蛋白進行鑒定。結(jié)果比較CHAPS和Triton X-100的增溶效果,發(fā)現(xiàn)去污劑CHAPS能夠更好地促進鈣通道蛋白的溶解,且濃度為2%CHAPS是能夠使鈣通道蛋白溶解且不損害鈣通道結(jié)構(gòu)的最適濃度;同時,蛋白電泳和免疫印跡結(jié)果顯示,提取制備所得的蛋白為心肌Cav1.2鈣通道蛋白。結(jié)論親和層析方法提取了純度較高的全長的心肌Cav1.2鈣通道蛋白,為系統(tǒng)研究心肌Cav1.2鈣通道奠定了堅實的基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to explore the method of extracting and purifying Cav1.2 calcium channel protein from guinea pig myocardium. Methods the soluble Cav1.2 calcium channel protein was obtained by tissue homogenate and ultrahigh speed centrifugation. The calcium channel protein was further purified by affinity chromatography. Different Cav1.2 calcium channel antibodies were used to identify the prepared cardiac Cav1.2 calcium channel protein by Western blot technique. Results by comparing the solubilization effect of CHAPS and Triton X-100, it was found that CHAPS could promote the dissolution of calcium channel protein better, and the concentration of 2%CHAPS was the optimum concentration for dissolving calcium channel protein without damaging the structure of calcium channel. The results of electrophoresis and Western blotting showed that the extracted protein was cardiac Cav1.2 calcium channel protein. Conclusion the high purity Cav1.2 calcium channel protein was extracted by affinity chromatography, which laid a solid foundation for systematic study of myocardial Cav1.2 calcium channel.
【作者單位】： 中國醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院藥物毒理學(xué)教研室;鹿兒島大學(xué)醫(yī)學(xué)部;
【基金】：國家自然科學(xué)基金資助項目(No 31071004,30870907,81100108)
【分類號】：R363

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本文編號：2179098