【摘要】：目的建立一種環(huán)境水體中空腸彎曲桿菌的熒光定量PCR準(zhǔn)確快速方法。方法采用膜吸附-洗脫法濃縮富集環(huán)境水體中的空腸彎曲桿菌,根據(jù)空腸彎曲桿菌VS1基因序列設(shè)計(jì)引物,以構(gòu)建的空腸彎曲桿菌重組質(zhì)粒作為標(biāo)準(zhǔn)品,建立空腸彎曲桿菌熒光定量PCR檢測(cè)方法。結(jié)果熒光定量PCR反應(yīng)體系在2.66×109～2.66×100copies/μl拷貝數(shù)模板量的線性范圍內(nèi),所獲得回歸方程線性關(guān)系較好(R2=0.998),擴(kuò)增曲線呈S形指數(shù)增長(zhǎng);特異性檢測(cè)中腸炎沙門氏菌等對(duì)照菌擴(kuò)增呈陰性,對(duì)于空腸彎曲桿菌純培養(yǎng)物檢測(cè)限達(dá)到46 cfu/ml,實(shí)際水樣檢測(cè)結(jié)果與常規(guī)生化鑒定結(jié)果一致,整個(gè)檢測(cè)過程可以在4 h內(nèi)完成。結(jié)論本研究中建立的空腸彎曲桿菌熒光定量PCR檢測(cè)方法具有準(zhǔn)確、簡(jiǎn)便、快速等特點(diǎn),具有較強(qiáng)的實(shí)際應(yīng)用價(jià)值,可以用于環(huán)境水體中空腸彎曲桿菌的檢測(cè)。
[Abstract]:Objective to establish an accurate and rapid method for fluorescence quantitative PCR of Campylobacter jejuni in environmental water. Methods the membrane adsorption-elution method was used to concentrate and enrich Campylobacter jejuni in environmental water. Primers were designed according to the VS1 gene sequence of Campylobacter jejuni. The recombinant plasmid of Campylobacter jejuni was used as the standard. A fluorescence quantitative PCR method for detection of Campylobacter jejuni was established. Results in the linear range of 2.66 脳 10 ~ 9 ~ 2.66 脳 100copies/ 渭 l copy number template, the regression equation was linear (R _ 2N _ (0.998), and the amplification curve was increased by S-shaped index, and the amplification of Salmonella enteritidis and other control bacteria was negative in the specific detection. For the pure culture of Campylobacter jejuni, the detection limit was up to 46cf / ml. The result of water sample detection was consistent with that of routine biochemical identification, and the whole detection process could be completed within 4 hours. Conclusion the fluorescent quantitative PCR method for the detection of Campylobacter jejuni in this study is accurate, simple and rapid, and has strong practical application value. It can be used for the detection of Campylobacter jejuni in environmental water.
【作者單位】： 解放軍后勤工程學(xué)院軍事油料應(yīng)用與管理工程系;國(guó)防建筑規(guī)劃與環(huán)境工程系;
【基金】：國(guó)家質(zhì)量監(jiān)督檢驗(yàn)檢疫總局科研項(xiàng)目(200910140-03) 中國(guó)人民解放軍總后勤部基建營(yíng)房部項(xiàng)目(BY111C012)
【分類號(hào)】：R378

【參考文獻(xiàn)】

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1 張崇淼;王曉昌;彭黨聰;;西安市景觀水體腸道病毒實(shí)時(shí)熒光定量RT-PCR檢測(cè)與健康風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J];安全與環(huán)境學(xué)報(bào);2010年03期

2 曾頌;張崇淼;王曉昌;魏夢(mèng)楠;;城市污水二級(jí)處理出水中沙門氏菌的PCR檢測(cè)[J];環(huán)境科學(xué)研究;2010年03期

3 劉永軍;張崇淼;王曉昌;呂英俊;李昂臻;薛小平;;環(huán)境水體中腸道病原細(xì)菌定量PCR檢測(cè)與膜過濾分析方法的比較[J];環(huán)境科學(xué)學(xué)報(bào);2008年07期

4 覃明;王宜峰;孫萬邦;杜聯(lián)峰;徐崗村;羅軍敏;姚新生;;空腸彎曲菌pcDNA3.1(-)-peb1A誘導(dǎo)的T細(xì)胞活化增殖研究[J];免疫學(xué)雜志;2011年10期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前7條

1 馬麗麗;馮偉;毛冠男;余輝;王瑩瑩;;基于流式細(xì)胞法的各水處理工藝病毒含量變化評(píng)價(jià)[J];安全與環(huán)境學(xué)報(bào);2013年01期

2 陳j;;水環(huán)境中大腸桿菌PCR快速檢測(cè)體系的研究[J];環(huán)境科技;2010年02期

3 魏春花;曾文爐;周啟星;謝秀杰;;熒光定量PCR技術(shù)在環(huán)境領(lǐng)域的應(yīng)用[J];中國(guó)環(huán)境監(jiān)測(cè);2012年04期

4 孫傅;沙婧;張一帆;劉彥華;;城市景觀娛樂水體微生物風(fēng)險(xiǎn)評(píng)價(jià)[J];環(huán)境科學(xué);2013年03期

5 尹紅果;馬小雪;商栩;任湘鵬;Randy A Dehlgren;張明華;;環(huán)境水體中沙門菌環(huán)介導(dǎo)等溫?cái)U(kuò)增快速檢測(cè)方法[J];環(huán)境與健康雜志;2013年02期

6 劉琳琳;;空腸彎曲菌PEB1-LTB DNA疫苗構(gòu)建及其對(duì)小鼠免疫保護(hù)性的研究[J];中國(guó)免疫學(xué)雜志;2012年05期

7 林雨新;張震南;徐亞慧;李娟;劉新春;;氧化溝污水處理系統(tǒng)中病原菌的檢測(cè)與歸趨分析[J];中國(guó)科學(xué)院研究生院學(xué)報(bào);2013年01期

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 馬千里;張巧;姚偉;李琦;王長(zhǎng)征;;肺炎鏈球菌毒力蛋白DNA疫苗優(yōu)勢(shì)抗原組合篩選及鑒定[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報(bào);2009年10期

2 王毳;閆磊;曾慶祝;;沙門氏菌的檢測(cè)技術(shù)與方法[J];現(xiàn)代食品科技;2007年05期

3 劉永軍;張崇淼;王曉昌;孫茵;薛小平;;通用引物PCR方法在地表水病原菌檢測(cè)中的應(yīng)用[J];環(huán)境科學(xué)研究;2007年02期

4 張崇淼;劉永軍;王曉昌;薛小平;;逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)技術(shù)同時(shí)檢測(cè)水中多種腸道病毒[J];環(huán)境科學(xué)研究;2007年03期

5 張崇淼;劉永軍;王曉昌;薛小平;;環(huán)境水體中腸道病毒的膜吸附-洗脫濃縮方法研究[J];環(huán)境科學(xué);2007年07期

6 李成文;王栩;高燕;孫萬邦;余妍;馮勝軍;;空腸彎曲菌外膜蛋白亞單位疫苗的研制及免疫原性研究[J];免疫學(xué)雜志;2008年04期

7 趙愷;楊濱燕;吳長(zhǎng)有;;SARS S DNA疫苗不同免疫方案誘導(dǎo)細(xì)胞免疫應(yīng)答的影響[J];免疫學(xué)雜志;2011年01期

8 張?bào)w銀;黃曉蓉;鄭晶;邵碧英;黃嫦嬌;陳彬;林杰;湯敏英;;免疫捕捉-通用引物PCR檢測(cè)食品中沙門氏菌[J];食品科學(xué);2009年12期

9 馮勝軍,孫萬邦,姚新生,肖政;空腸彎曲菌28-31 ku外膜蛋白的免疫原性[J];世界華人消化雜志;2004年12期

10 蔣培紅;;沙門氏菌的危害及其對(duì)畜產(chǎn)品污染的控制策略[J];中國(guó)動(dòng)物檢疫;2007年10期

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1 鄒麗容;鄭夔;周杰;莫艷玲;方苓;陳秋霞;李暉;柯昌文;;熒光定量PCR方法快速檢測(cè)人博卡病毒的研究[J];華南預(yù)防醫(yī)學(xué);2009年06期

2 沈月華;徐德順;吳曉芳;;霍亂弧菌實(shí)時(shí)熒光PCR方法的建立[J];中國(guó)衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志;2009年01期

3 陸永干;戴賢君;姚建紅;黃利權(quán);;豬瘟病毒熒光定量PCR標(biāo)準(zhǔn)陽性模板的構(gòu)建[J];浙江農(nóng)業(yè)學(xué)報(bào);2009年01期

4 余傳星;趙自云;潘玉欽;朱玲;;熒光定量PCR在結(jié)核桿菌微菌落培養(yǎng)研究中的應(yīng)用[J];福建中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2009年06期

5 陶海靜;王老七;;基于Taq Man探針的豬繁殖與呼吸綜合征病毒熒光定量PCR檢測(cè)方法的研究[J];中國(guó)獸醫(yī)雜志;2009年10期

6 葉飛舟;何震宇;李月琴;李弘劍;張欣;黃曉峰;周天鴻;;BMPR-Ⅱ基因mRNA熒光定量PCR檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)品的構(gòu)建[J];廣東藥學(xué)院學(xué)報(bào);2006年03期

7 嚴(yán)子禾;潘世揚(yáng);陳丹;魏源華;高麗;謝而付;黃s顂，

本文編號(hào)：2165205