【摘要】：目的建立一種環(huán)境水體中空腸彎曲桿菌的熒光定量PCR準確快速方法。方法采用膜吸附-洗脫法濃縮富集環(huán)境水體中的空腸彎曲桿菌,根據(jù)空腸彎曲桿菌VS1基因序列設計引物,以構建的空腸彎曲桿菌重組質粒作為標準品,建立空腸彎曲桿菌熒光定量PCR檢測方法。結果熒光定量PCR反應體系在2.66×109～2.66×100copies/μl拷貝數(shù)模板量的線性范圍內,所獲得回歸方程線性關系較好(R2=0.998),擴增曲線呈S形指數(shù)增長;特異性檢測中腸炎沙門氏菌等對照菌擴增呈陰性,對于空腸彎曲桿菌純培養(yǎng)物檢測限達到46 cfu/ml,實際水樣檢測結果與常規(guī)生化鑒定結果一致,整個檢測過程可以在4 h內完成。結論本研究中建立的空腸彎曲桿菌熒光定量PCR檢測方法具有準確、簡便、快速等特點,具有較強的實際應用價值,可以用于環(huán)境水體中空腸彎曲桿菌的檢測。
[Abstract]:Objective to establish an accurate and rapid method for fluorescence quantitative PCR of Campylobacter jejuni in environmental water. Methods the membrane adsorption-elution method was used to concentrate and enrich Campylobacter jejuni in environmental water. Primers were designed according to the VS1 gene sequence of Campylobacter jejuni. The recombinant plasmid of Campylobacter jejuni was used as the standard. A fluorescence quantitative PCR method for detection of Campylobacter jejuni was established. Results in the linear range of 2.66 脳 10 ~ 9 ~ 2.66 脳 100copies/ 渭 l copy number template, the regression equation was linear (R _ 2N _ (0.998), and the amplification curve was increased by S-shaped index, and the amplification of Salmonella enteritidis and other control bacteria was negative in the specific detection. For the pure culture of Campylobacter jejuni, the detection limit was up to 46cf / ml. The result of water sample detection was consistent with that of routine biochemical identification, and the whole detection process could be completed within 4 hours. Conclusion the fluorescent quantitative PCR method for the detection of Campylobacter jejuni in this study is accurate, simple and rapid, and has strong practical application value. It can be used for the detection of Campylobacter jejuni in environmental water.
【作者單位】： 解放軍后勤工程學院軍事油料應用與管理工程系;國防建筑規(guī)劃與環(huán)境工程系;
【基金】：國家質量監(jiān)督檢驗檢疫總局科研項目(200910140-03) 中國人民解放軍總后勤部基建營房部項目(BY111C012)
【分類號】：R378

【參考文獻】

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本文編號：2165205