【摘要】：目的將超級(jí)化環(huán)化核苷酸門控陽(yáng)離子通道4(hHCN4)基因修飾的大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞(BMSCs)與乳鼠心肌細(xì)胞(CM)進(jìn)行共培養(yǎng),觀察其細(xì)胞連接功能及起搏功能。方法分離培養(yǎng)乳鼠CM并進(jìn)行細(xì)胞標(biāo)記,將已標(biāo)記的CM分別與大鼠BMSCs、hHCN4+BMSCs及hHCN4-BMSCs混合培養(yǎng)。共培養(yǎng)4d后檢測(cè)各組細(xì)胞的自發(fā)搏動(dòng)頻率,熒光顯微鏡下觀察兩類細(xì)胞的空間位置關(guān)系,Western blotting檢測(cè)縫隙連接蛋白43(Cx43)的表達(dá),透射電鏡觀察細(xì)胞間縫隙連接的形成情況。結(jié)果共培養(yǎng)4d后,心肌的自發(fā)搏動(dòng)頻率明顯增高。熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)存在空間位置上相鄰的BMSCs和CM。Western blotting結(jié)果顯示,hHCN4+BMSC與CM共培養(yǎng)組Cx43表達(dá)明顯高于hHCN4-BMSCs與CM共培養(yǎng)組。透射電鏡觀察顯示,hHCN4+BMSCs可與相鄰細(xì)胞形成指狀交錯(cuò)的連接。結(jié)論 hHCN4基因修飾的大鼠BMSCs可與CM建立有效的電機(jī)械連接,其自發(fā)起搏功能更接近CM,為進(jìn)一步進(jìn)行生物起搏治療提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
[Abstract]:Objective to co-culture rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) modified by supercyclic nucleotide gated cationic channel 4 (hHCN4) gene with neonatal cardiomyocytes (CM), and to observe their cellular connectivity and pacemaker function. Methods CM was isolated from neonatal rat and labeled with hHCN4-BMSCs. The labeled CM was co-cultured with BMSCshHCN4 BMSCs and hHCN4-BMSCs, respectively. After 4 days of co-culture, the spontaneous pulsatile frequency of each group was detected, the spatial position of the two groups of cells was observed under fluorescence microscope, the expression of gap junction protein 43 (Cx43) was detected by Western blotting, and the formation of gap junction between cells was observed by transmission electron microscope. Results after co-culture for 4 days, the spontaneous pulsatile frequency of myocardium increased significantly. The results of BMSCs and CM.Western blotting showed that the Cx43 expression of hHCN4 BMSC and CM co-cultured group was significantly higher than that of hHCN4-BMSCs and CM co-culture group. Transmission electron microscopy showed that hHCN4 BMSCs could intersect with adjacent cells. Conclusion hHCN4 gene modified rat BMSCs can establish an effective electromechanical connection with CM, and its spontaneous pacing function is closer to that of CM, which provides experimental basis for further biological pacing therapy.
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：遼寧省科學(xué)技術(shù)計(jì)劃項(xiàng)目(2012225019)~~
【分類號(hào)】：R329

【參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前4條

1 唐楊烽;徐激斌;李莉;何斌;韓林;陸方林;宋智鋼;鄒良建;徐志云;;心臟術(shù)后永久性起搏器植入64例臨床分析[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2010年10期

2 佟玉娜;王高頻;;攜帶hHCN4基因重組腺病毒載體體外轉(zhuǎn)染大鼠BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào);2013年04期

3 周圣華,宋治遠(yuǎn);竇房結(jié)細(xì)胞縫隙連接蛋白與電傳導(dǎo)特性的研究進(jìn)展[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2004年05期

4 吳美華;陳章強(qiáng);李華泰;;緩慢性心律失常生物心臟起搏治療的研究進(jìn)展[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2007年03期

【共引文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前5條

1 段翠密;李穎;王海濱;周瑾;劉志強(qiáng);江紅;王常勇;;組織工程心肌研究中心肌肌鈣蛋白T及細(xì)胞間隙連接蛋白43免疫組化檢測(cè)結(jié)果的觀察與分析[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2009年05期

2 沈法榮;;中國(guó)心臟起搏治療進(jìn)展[J];中國(guó)繼續(xù)醫(yī)學(xué)教育;2011年11期

3 陸秋芬;孫健;劉曉紅;王群山;李毅剛;陸尚彪;;高齡患者置入心臟起搏器的圍手術(shù)期相關(guān)危險(xiǎn)因素分析[J];中華老年心腦血管病雜志;2009年11期

4 鄭海文;時(shí)兢;;參附注射液治療緩慢性心律失常的療效觀察[J];臨床合理用藥雜志;2012年27期

5 楊俊娟;丁燕生;周菁;盛琴慧;;心臟永久起搏器置入術(shù)后上肢深靜脈血栓的發(fā)生率及治療經(jīng)驗(yàn)[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2008年05期

相關(guān)博士學(xué)位論文 前6條

1 黃驥;模擬缺血預(yù)處理對(duì)原代培養(yǎng)乳鼠竇房結(jié)細(xì)胞Cx及I_（Cl,swell）表達(dá)的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2005年

2 姚青;mHCN4基因修飾大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)分化為心臟起搏樣細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2007年

3 耿乃志;復(fù)心脈方對(duì)病態(tài)竇房結(jié)綜合征家兔模型HR、SNRT、SACT影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2008年

4 章宏;溶血磷脂酸對(duì)心梗過(guò)程中的免疫炎癥反應(yīng)及連接蛋白43的調(diào)控[D];吉林大學(xué);2009年

5 農(nóng)耀明;膜片鉗原位檢測(cè)HCN4基因修飾的MSCs移植至大鼠心臟后的細(xì)胞電生理變化[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

6 魏璐;轉(zhuǎn)染HCN4基因的犬骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞同種異體移植對(duì)傳導(dǎo)阻滯心臟電生理變化的影響[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 蔣偉;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)分化為具有起搏功能的心肌樣細(xì)胞[D];鄭州大學(xué);2010年

2 劉振葳;炙甘草湯辯證論治心律失常的理論探討與臨床分析[D];北京中醫(yī)藥大學(xué);2011年

3 張小琴;風(fēng)濕性心臟病房顫患者左右心耳連接蛋白40和連接蛋白43mRNA水平的對(duì)比研究[D];新疆醫(yī)科大學(xué);2005年

4 趙炎波;起搏器植入并發(fā)鎖骨下擠壓綜合征[D];浙江大學(xué);2006年

5 周云;轉(zhuǎn)錄因子GATA-4在人胎心發(fā)育中的表達(dá)及在先天性心臟病胎兒中的突變檢測(cè)[D];福建醫(yī)科大學(xué);2007年

6 劉小立;HCN離子通道起搏功能的分子基礎(chǔ)[D];山東師范大學(xué);2008年

7 張守紅;復(fù)心脈方治療緩慢性心律失常的臨床療效觀察[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2009年

8 王莉;復(fù)心脈方治療家兔病態(tài)竇房結(jié)綜合征的實(shí)驗(yàn)研究[D];黑龍江中醫(yī)藥大學(xué);2008年

9 王小霞;楊積武教授治療慢性心律失常的經(jīng)驗(yàn)總結(jié)[D];遼寧中醫(yī)藥大學(xué);2010年

10 方歡;嗜酸乳桿菌對(duì)重型顱腦損傷后腸ICC和Cx43影響的實(shí)驗(yàn)研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

【二級(jí)參考文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前9條

1 蕭永福;Natalie Chandler;Halina Dobrzynski;Eric S.Richardson;Erica M.TenBroek;Joshua J.Wilhelm;Vinod Sharma;Anthony Varghese;Mark R.Boyett;Paul A.Iaizzo;Daniel C.Sigg;;人HCN4通道的滯后現(xiàn)象:影響竇房結(jié)起搏的潛在決定因素(英文)[J];生理學(xué)報(bào);2010年01期

2 周浩粵;邱漢嬰;盧炯斌;李學(xué)東;;兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外向心肌樣細(xì)胞誘導(dǎo)分化:縫隙連接蛋白43的表達(dá)變化[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2010年19期

3 王妮娜;劉如秀;;竇房結(jié)細(xì)胞起搏基因HCN4的研究進(jìn)展[J];醫(yī)學(xué)綜述;2011年10期

4 陳永久,李宜富,姜昕,李蕓,吳盛標(biāo),董少紅;心房顫動(dòng)患者臨床癥狀與動(dòng)態(tài)心電變化的關(guān)系探討[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2003年02期

5 任曉慶,浦介麟,張澍,賈玉和,吳國(guó)玫,孟亮,王方正;自體骨髓間葉干細(xì)胞誘導(dǎo)分化移植治療房室阻滯的初步觀察[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2005年01期

6 李繼文;郭繼鴻;張萍;李春;劉元偉;周春燕;;起搏通道基因亞型HCN4重組腺病毒載體的構(gòu)建及通道電流檢測(cè)[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2006年01期

7 李紅霞;楊向軍;趙欣;韓蓮花;程緒杰;陳彈;宋建平;劉志華;蔣文平;;乳鼠心室肌起搏電流的特點(diǎn)及其基因的表達(dá)[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2006年05期

8 仝識(shí)非;宋治遠(yuǎn);姚青;萬(wàn)瑛;鄒麗云;鐘理;;mHCN4基因修飾小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞重建起搏離子流通道[J];中國(guó)心臟起搏與心電生理雜志;2007年01期

9 潘新元;梁博偉;趙勁民;殷國(guó)前;;膜聯(lián)蛋白A1在兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)成骨和成脂早期的表達(dá)[J];中國(guó)組織工程研究;2012年23期

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 洪小楊,王斌,杜江,朱德新,封志純;人臍帶血間充質(zhì)干細(xì)胞體外分離培養(yǎng)研究[J];中國(guó)誤診學(xué)雜志;2005年17期

2 王利培;姜紅;;臍血間充質(zhì)干細(xì)胞培養(yǎng)體系的建立[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年03期

3 劉杰;王建;周躍;;兔骨髓間質(zhì)干細(xì)胞的體外生物學(xué)特性及超微結(jié)構(gòu)研究[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2008年10期

4 鞠秀麗,黃志偉,時(shí)慶,侯懷水,段春紅;體外擴(kuò)增臍血間充質(zhì)干細(xì)胞的生物學(xué)特性和誘導(dǎo)分化能力的研究[J];中華兒科雜志;2005年07期

5 須玨華;胡靜波;周燕;譚文松;;培養(yǎng)基對(duì)兔骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞擴(kuò)增與分化的影響[J];中國(guó)組織工程研究與臨床康復(fù);2007年03期

6 王佳南;張曉剛;鄭麗娜;湯為學(xué);;仿生電刺激在離體心肌誘導(dǎo)骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化中的作用[J];解放軍醫(yī)學(xué)雜志;2009年05期

7 王金林,閔軍,周曉東,陳亞進(jìn),陳積圣;加強(qiáng)型黃色熒光蛋白和VEGF雙基因載體在肝細(xì)胞共轉(zhuǎn)染表達(dá)[J];中山醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);2002年04期

8 張徐;錢暉;朱偉;曹慧玲;徐學(xué)靜;司煜安;王梅;許文榮;;慢病毒轉(zhuǎn)染人骨髓間質(zhì)干細(xì)胞研究[J];江蘇大學(xué)學(xué)報(bào)(醫(yī)學(xué)版);2008年02期

9 趙素蘭!515041汕頭,劉征利,謝若男,焦艷!515041汕頭,李洪梅,彭英!515041汕頭,方鐵錚!515041汕頭,曹俊英,朱慶宣!515041汕頭;Z-HL16C細(xì)胞株的建立及應(yīng)用[J];中華實(shí)驗(yàn)和臨床病毒學(xué)雜志;2000年01期

10 李文林,石小玉,熊麗霞,周瑩;重組人白細(xì)胞介素-13 刺激Dami 細(xì)胞增殖(英文)[J];中國(guó)病理生理雜志;1999年12期

相關(guān)會(huì)議論文 前10條

1 孫文佶;張立煌;王全興;姚航平;曹雪濤;;轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β_1基因修飾的樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)同種移植免疫耐受的實(shí)驗(yàn)研究[A];新世紀(jì) 新機(jī)遇 新挑戰(zhàn)——知識(shí)創(chuàng)新和高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)發(fā)展（下冊(cè)）[C];2001年

2 譚映霞;俞康;胡永仙;章圣輝;韓義香;高申孟;吳建波;;基因修飾CD20-scFv-IgGFc-CD28-ζ T細(xì)胞靶向殺傷Raji細(xì)胞凋亡的研究[A];全國(guó)臨床免疫檢驗(yàn)研討會(huì)暨第六屆全國(guó)臨床免疫學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2009年

3 李曉紅;余細(xì)勇;肖定璋;符永恒;單志新;林秋雄;鄧春玉;鄺素娟;楊敏;林曙光;;縫隙連接蛋白基因修飾BMSCs的實(shí)驗(yàn)研究[A];2008第十一次全國(guó)臨床藥理學(xué)學(xué)術(shù)大會(huì)論文集[C];2008年

4 林賢凡;吳金明;陳瑾;孫慧;金思思;申蘇建;;HBV S-ecdCD40L融合基因修飾對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞功能的影響[A];第二屆浙江省消化病學(xué)術(shù)大會(huì)論文匯編[C];2009年

5 張建;許曉群;馮進(jìn)波;張建化;孫芮;田志剛;;人IL-15基因修飾NK細(xì)胞系的生物學(xué)特性研究[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第四屆學(xué)術(shù)大會(huì)會(huì)議議程及論文摘要集[C];2002年

6 劉佳梅;;腦內(nèi)皮細(xì)胞與神經(jīng)干細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)神經(jīng)干細(xì)胞的遷移[A];中國(guó)解剖學(xué)會(huì)第十一屆全國(guó)組織學(xué)與胚胎學(xué)青年學(xué)術(shù)研討會(huì)論文匯編[C];2009年

7 韓圣;田建廣;王鈺;夏照帆;;培養(yǎng)微環(huán)境對(duì)小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞分化特性影響的實(shí)驗(yàn)研究[A];第六屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)論文匯編[C];2009年

8 連志云;周紅雨;李惠英;劉立斌;羅麗;張伶君;劉舉;趙代弟;;MICRO-DYSTROPHIN基因修飾骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[A];第十一屆全國(guó)神經(jīng)病學(xué)學(xué)術(shù)會(huì)議論文匯編[C];2008年

9 江文正;于益芝;曹雪濤;;LIGHT基因修飾對(duì)樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)乙肝轉(zhuǎn)基因小鼠免疫應(yīng)答影響的研究[A];中國(guó)免疫學(xué)會(huì)第五屆全國(guó)代表大會(huì)暨學(xué)術(shù)會(huì)議論文摘要[C];2006年

10 歐陽(yáng)云淑;賈赤宇;戚可名;付小兵;;與人汗腺細(xì)胞共培養(yǎng)的人骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞表型轉(zhuǎn)化及相關(guān)機(jī)制的初步研究[A];第四屆全國(guó)燒傷救治專題研討會(huì)燒傷感染救治新進(jìn)展論文匯編[C];2006年

相關(guān)重要報(bào)紙文章 前10條

1 趙焱邋陳威華;采間質(zhì)干細(xì)胞,臍帶可能比臍帶血更有用[N];新華每日電訊;2007年

2 趙焱邋陳威華;科學(xué)家在人類臍帶上發(fā)現(xiàn)新干細(xì)胞源[N];人民日?qǐng)?bào);2007年

3 李杰;抗原特異TCR基因修飾T細(xì)胞技術(shù)的建立和應(yīng)用[N];科技日?qǐng)?bào);2007年

4 李連達(dá);張榮利;骨髓干細(xì)胞移植能不能治冠心病？[N];中國(guó)醫(yī)藥報(bào);2004年

5 ;骨髓干細(xì)胞移植治療冠心病的爭(zhēng)論[N];中國(guó)中醫(yī)藥報(bào);2005年

6 ;美用干細(xì)胞和基因移植培育出新骨[N];中國(guó)高新技術(shù)產(chǎn)業(yè)導(dǎo)報(bào);2001年

7 羅剛;該不該為孩子保存自體臍血[N];健康報(bào);2005年

8 孫聞邋吳晶晶;“基因敲除小鼠”：任意改變小鼠基因成現(xiàn)實(shí)[N];新華每日電訊;2007年

9 記者 馮衛(wèi)東;科學(xué)家誘使骨髓釋放額外成體干細(xì)胞[N];科技日?qǐng)?bào);2009年

10 梁永忠;核酸-基因-疾病[N];解放日?qǐng)?bào);2000年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 劉勇;輪狀病毒VP7基因修飾、表達(dá)及免疫原性研究[D];中國(guó)協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2000年

2 孫曉春;不同來(lái)源間質(zhì)干細(xì)胞的分離及多種藥物因素對(duì)其生物學(xué)特性的影響[D];江蘇大學(xué);2010年

3 周小瑩;rAAV介導(dǎo)TPO基因修飾的骨髓MSCs對(duì)巨核系造血生成的作用研究[D];中南大學(xué);2007年

4 李香琴;骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞體外擴(kuò)增及其與神經(jīng)類細(xì)胞共培養(yǎng)的研究[D];大連理工大學(xué);2012年

5 馬勇江;骨髓與脂肪間質(zhì)干細(xì)胞分離與誘導(dǎo)分化為成骨細(xì)胞的研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2004年

6 陳英虎;MBL阻遏人MD-DC捕獲和呈遞HCMV的研究[D];浙江大學(xué);2010年

7 劉柳;miR-181a調(diào)控MSC影響PE發(fā)病機(jī)制的研究[D];南京大學(xué);2012年

8 韓澍;吲哚胺2，3-過(guò)氧化酶基因修飾的骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞誘導(dǎo)移植免疫耐受的作用及其機(jī)理[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2003年

9 張傳永;Fas Ligand 基因修飾的骨髓樹(shù)突狀細(xì)胞在同種移植中的作用[D];第二軍醫(yī)大學(xué);2004年

10 王博蔚;多藥耐藥基因MDR1逆轉(zhuǎn)錄病毒載體的構(gòu)建及其轉(zhuǎn)染人胎盤源間充質(zhì)干細(xì)胞的研究[D];吉林大學(xué);2006年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 毛飛;骨髓間質(zhì)干細(xì)胞免疫調(diào)節(jié)作用的實(shí)驗(yàn)研究[D];江蘇大學(xué);2005年

2 王俊燕;睪酮對(duì)小鼠巨噬細(xì)胞及脂肪細(xì)胞共培養(yǎng)體系炎癥因子生成的影響及其機(jī)制的研究[D];復(fù)旦大學(xué);2012年

3 張學(xué)彬;臍血間質(zhì)干細(xì)胞做載體轉(zhuǎn)基因TNF-α誘導(dǎo)裸鼠胃癌細(xì)胞凋亡的實(shí)驗(yàn)研究[D];青島大學(xué);2010年

4 陳太邦;樹(shù)突狀細(xì)胞與神經(jīng)干/祖體細(xì)胞共培養(yǎng)促進(jìn)神經(jīng)干/祖細(xì)胞分化的體外研究[D];第三軍醫(yī)大學(xué);2013年

5 丁英龍;IDO基因修飾的小鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞誘導(dǎo)免疫耐受的體外實(shí)驗(yàn)研究[D];蘇州大學(xué);2012年

6 吳明祥;堿性成纖維生長(zhǎng)因子基因修飾大鼠骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的體外分化實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2011年

7 劉世瓊;細(xì)胞共培養(yǎng)條件下肌源性干細(xì)胞對(duì)氧化應(yīng)激損傷神經(jīng)元的保護(hù)作用[D];遼寧醫(yī)學(xué)院;2011年

8 趙晨成;人骨毮間充質(zhì)干細(xì)胞與毮核細(xì)胞共培養(yǎng)后的類髓核分化效應(yīng)及其對(duì)髓核細(xì)胞表型的調(diào)節(jié)作用[D];山西醫(yī)科大學(xué);2012年

9 文香;無(wú)鎂誘導(dǎo)神經(jīng)元體外驚厥樣放電后細(xì)胞微環(huán)境的變化[D];重慶醫(yī)科大學(xué);2012年

10 李愛(ài)梅;大鼠骨髓間質(zhì)干細(xì)胞體外誘導(dǎo)橫向分化為胰島素分泌細(xì)胞的實(shí)驗(yàn)研究[D];東南大學(xué);2006年

，

本文編號(hào)：2148655