【摘要】：目的將超級化環(huán)化核苷酸門控陽離子通道4(hHCN4)基因修飾的大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(BMSCs)與乳鼠心肌細胞(CM)進行共培養(yǎng),觀察其細胞連接功能及起搏功能。方法分離培養(yǎng)乳鼠CM并進行細胞標(biāo)記,將已標(biāo)記的CM分別與大鼠BMSCs、hHCN4+BMSCs及hHCN4-BMSCs混合培養(yǎng)。共培養(yǎng)4d后檢測各組細胞的自發(fā)搏動頻率,熒光顯微鏡下觀察兩類細胞的空間位置關(guān)系,Western blotting檢測縫隙連接蛋白43(Cx43)的表達,透射電鏡觀察細胞間縫隙連接的形成情況。結(jié)果共培養(yǎng)4d后,心肌的自發(fā)搏動頻率明顯增高。熒光顯微鏡下觀察發(fā)現(xiàn)存在空間位置上相鄰的BMSCs和CM。Western blotting結(jié)果顯示,hHCN4+BMSC與CM共培養(yǎng)組Cx43表達明顯高于hHCN4-BMSCs與CM共培養(yǎng)組。透射電鏡觀察顯示,hHCN4+BMSCs可與相鄰細胞形成指狀交錯的連接。結(jié)論 hHCN4基因修飾的大鼠BMSCs可與CM建立有效的電機械連接,其自發(fā)起搏功能更接近CM,為進一步進行生物起搏治療提供了實驗依據(jù)。
[Abstract]:Objective to co-culture rat bone marrow mesenchymal stem cells (BMSCs) modified by supercyclic nucleotide gated cationic channel 4 (hHCN4) gene with neonatal cardiomyocytes (CM), and to observe their cellular connectivity and pacemaker function. Methods CM was isolated from neonatal rat and labeled with hHCN4-BMSCs. The labeled CM was co-cultured with BMSCshHCN4 BMSCs and hHCN4-BMSCs, respectively. After 4 days of co-culture, the spontaneous pulsatile frequency of each group was detected, the spatial position of the two groups of cells was observed under fluorescence microscope, the expression of gap junction protein 43 (Cx43) was detected by Western blotting, and the formation of gap junction between cells was observed by transmission electron microscope. Results after co-culture for 4 days, the spontaneous pulsatile frequency of myocardium increased significantly. The results of BMSCs and CM.Western blotting showed that the Cx43 expression of hHCN4 BMSC and CM co-cultured group was significantly higher than that of hHCN4-BMSCs and CM co-culture group. Transmission electron microscopy showed that hHCN4 BMSCs could intersect with adjacent cells. Conclusion hHCN4 gene modified rat BMSCs can establish an effective electromechanical connection with CM, and its spontaneous pacing function is closer to that of CM, which provides experimental basis for further biological pacing therapy.
【作者單位】： 遼寧醫(yī)學(xué)院附屬第一醫(yī)院心內(nèi)科;
【基金】：遼寧省科學(xué)技術(shù)計劃項目(2012225019)~~
【分類號】：R329

【參考文獻】

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本文編號：2148655