【摘要】：目的利用酵母雙雜交方法,篩選與弓形蟲毒力因子ROP18相互作用的宿主蛋白。方法 RT-PCR擴增弓形蟲RH株速殖子ROP18基因片段,擴增產(chǎn)物經(jīng)雙酶切后插入酵母雙雜交誘餌載體pGBKT7中,將重組質(zhì)粒導(dǎo)入酵母AH109菌株中,檢測誘餌載體有無毒性和自激活作用,利用酵母雙雜交系統(tǒng)從人胚胎腦cDNA文庫中篩選與ROP18相互作用的宿主蛋白。結(jié)果構(gòu)建了誘餌載體pGBKT7-ROP18,ROP18具有自激活功能。用ROP18~(25-25lan)為誘餌,篩選獲得一系列與ROP18相互作用的宿主蛋白:DNA損傷特異性結(jié)合蛋白1(DDB1)、torsin A相互作用蛋白1(TOR1AIP1)、整聯(lián)蛋白β1(integrinβ1)、溶質(zhì)運載蛋白3(SLC3A2)、酪氨酸硫化轉(zhuǎn)移酶2(TPST2)、Derl樣域家族成員2(DERL2)和OCIA結(jié)構(gòu)域蛋白1(OCIAD1)。結(jié)論通過酵母雙雜交技術(shù)篩選出與弓形蟲毒力因子ROP18相互作用的多種宿主蛋白。
[Abstract]:Objective to screen host proteins interacting with toxoplasma virulence factor ROP18 by yeast two-hybrid method. Methods Toxoplasma gondii RH strain Toxoplasma gondii Toxoplasma gondii RH strain tachyzoite ROP18 gene fragment was amplified by RT-PCR. The amplified product was digested by double enzyme and inserted into yeast two-hybrid bait vector pGBKT7. The recombinant plasmid was introduced into yeast AH109 strain to detect the nontoxicity and self-activation of bait vector. Yeast two-hybrid system was used to screen host proteins interacting with ROP18 from human embryonic brain cDNA library. Results the decoy vector pGBKT 7-ROP 18 has self-activation function. Using ROP18 ~ (25-25lan) as bait, A series of host proteins that interact with ROP18, such as TOR1AIP1 (TOR1AIP1), integrin 尾 1 (integrin 尾 1), solute transport protein 3 (SLC3A2), tyrosine sulphide transferase 2 (TPST2), DERL2 and OCIA domain protein 1 (OCIAD1), were obtained. Conclusion several host proteins interacting with toxoplasma virulence factor ROP18 were screened by yeast two-hybrid technique.
【作者單位】： 安徽醫(yī)科大學(xué)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)院生化與分子生物學(xué)教研室;安徽醫(yī)科大學(xué)藥學(xué)院;安徽醫(yī)科大學(xué)省部級基因研究重點實驗室 病原生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(No.81271864,30801329) 教育部霍英東教育基金會高等院校青年教師基金(No.131033) 安徽省杰出青年基金(No.10040606Y19)~~
【分類號】：R382.5

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本文編號：2147599