【摘要】：目的：通過建立青年-老年大鼠腎臟交互移植模型,觀察內(nèi)環(huán)境對腎臟衰老的影響.應(yīng)用非標(biāo)記定量蛋白質(zhì)組學(xué)方法篩選與衰老顯著相關(guān)蛋白,驗證并探討其對衰老影響的可能作用機制。方法：①通過腎臟原位切除和供腎原位移植術(shù)方法,把年輕大鼠的腎臟移植到年老大鼠,同時把年老大鼠的腎臟移植到年輕大鼠,術(shù)后體內(nèi)生長6個月后,建立青年-老年大鼠腎臟交互移植模型；②觀察交互移植后腎臟病理(HE.PAS染色)、組織衰老(β-gal染色)、炎癥因子(TNF-α和IL-1p)的變化情況；③用差異蛋白質(zhì)組分析篩選參與腎臟衰老的蛋白,并在Wi38細胞進行驗證其參與細胞衰老的作用通路。結(jié)果：①成功建立青年-老年大鼠腎臟交互移植模型,移植后腎臟血運正常,腎臟移植后存活；②與青年大鼠腎臟比較,移植到老年大鼠的青年腎臟HE染色、PAS染色腎臟病理無明顯改變,β-gal染色增加,炎癥因子TNF-α和IL-1p表達增加；與老年大鼠腎臟比較,移植到青年大鼠的老年腎臟HE染色、PAS染色腎臟病理無明顯改變,β-gal染色降低,炎癥因子TNF-α和IL-1p表達降低；③蛋白質(zhì)組學(xué)技術(shù)比較腎臟移植各組的差異表達蛋白,共鑒定到了279個差異倍數(shù)2以上的差異蛋白。最終篩選出16個有與ATP能量代謝、凋亡、細胞死亡有關(guān)的蛋白質(zhì),蛋白-蛋白相互作用分析提示Sod1與多個蛋白有相互作用。與20代Wi38細胞比較：40代Wi38細胞Sod1表達降低、p16表達升高。Sod1過表達時,Ac-NF-κB表達降低,細胞衰老減輕；Sod1敲除后Ac-NF-κB表達升高,細胞衰老加重。結(jié)論：1.本研究成功建立青年-老年大鼠腎臟交互移植模型,術(shù)后移植腎臟血運好,存活率高。2.內(nèi)環(huán)境可以影響腎臟衰老狀態(tài),青年-老年大鼠腎臟交互移植模型中,內(nèi)環(huán)境可以使老年腎臟年輕化、年輕腎臟衰老化。3.通過蛋白質(zhì)組學(xué)分析發(fā)現(xiàn)Sod1參與(抑制)腎臟衰老過程,通過抑制Ac-NF-κB拮抗參與衰老重要通路NF-κB通路。
[Abstract]:Aim: to observe the effect of internal environment on renal aging by establishing a model of kidney transplantation in young and aged rats. The unlabeled quantitative proteomics method was used to screen the proteins associated with senescence, and the possible mechanism of its effect on senescence was verified and discussed. Methods the kidney of the young rat was transplanted to the old rat by orthotopic nephrectomy and orthotopic transplantation of the donor kidney. At the same time, the kidney of the aged rat was transplanted to the young rat. After 6 months of operation, the kidney was transplanted to the young rat. The renal pathological changes (HE.PAS staining), tissue senescence (尾 -gal staining) and inflammatory factors (TNF- 偽 and IL-1p) were observed in the kidney of young and aged rats. The protein involved in renal senescence was screened by differential proteome analysis. The pathway involved in cell senescence was verified in Wi38 cells. Results the kidney cross-transplantation model of young and old rats was successfully established by 1: 1. The renal blood flow was normal after transplantation, and the kidney survival after transplantation was compared with that of young rats. There were no significant changes in renal pathology, 尾 -gal staining and the expression of inflammatory cytokines TNF- 偽 and IL-1p in young kidney grafted into aged rats by HE staining and pas staining. The expression of TNF- 偽 and IL-1p was decreased in the aged kidney of young rats by HE staining, pas staining, 尾 -gal staining, and the protein expression of TNF- 偽 and IL-1p. A total of 279 differentially expressed proteins were identified. Finally, 16 proteins related to ATP energy metabolism, apoptosis and cell death were screened. The protein-protein interaction analysis indicated that Sod1 interacted with many proteins. Compared with 20 generation Wi38 cells, the expression of Sod1 in Wi38 cells was decreased. The expression of p16 was increased and the expression of Ac-NF- 魏 B was decreased when Sod1 was overexpressed. The senescence of cells decreased after Sod1 knockout, and the expression of Ac-NF- 魏 B increased, and the senescence of cells increased. Conclusion 1. In this study, the model of kidney transplantation was established successfully in young and old rats. The graft blood was good after operation, and the survival rate was high. 2. The internal environment can affect the aging state of the kidney. In the model of kidney transplantation between young and aged rats, the internal environment can make the old kidney younger and the young kidney aging. 3. Through proteomics analysis, it was found that Sod1 was involved in (inhibit) renal senescence, and through inhibition of Ac-NF- 魏 B antagonism, Sod1 was involved in NF- 魏 B pathway.
【學(xué)位授予單位】：中國人民解放軍醫(yī)學(xué)院
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R692;R-332

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本文編號：2128875