本文選題：CpG寡聚脫氧核苷序列 + 佐劑��； 參考：《華北理工大學》2017年碩士論文

【摘要】：目的狂犬病(Rabies)是由狂犬病病毒引起的疾病,狂犬病的死亡率幾乎100%,目前主要的保護方式是接種疫苗。純化Vero細胞狂犬病疫苗(Purified Vero Cell Rabies Vaccine,PVRV)是目前的主流應用疫苗和人二倍體細胞狂犬病疫苗(Human diploid cell rabies vaccine,HDCV)是目前公認的安全性高的疫苗。但HDCV沒有取得大規(guī)模工業(yè)化生產突破導致其價格昂貴。更長免疫持久性的PVRV是以后的研究方向加上很多發(fā)展中國家對HDCV的費用負擔沉重,另外狂犬病被動免疫制劑的供應不足,及暴露后疫苗接種方案大多需要注射四或五針;獸用狂犬病疫苗接種犬只后免疫效果不佳,27%的免疫犬只中和抗體滴度不足對機體起到免疫防御效果。鑒于此,尋找一種能夠增強狂犬病疫苗免疫效果的佐劑能使PVRV具有更長免疫持久性佐劑和縮短HDCV免疫方案和減少每針劑的抗原量是今后發(fā)展的主要方向,對于人用疫苗和獸用疫苗均具有潛在的商業(yè)價值。方法Cp G寡聚脫氧核苷酸(Cp G Oligodeoxynucleotides,Cp G ODN)是人工合成含非甲基化胞嘧啶和鳥嘌呤二核酸的寡聚脫氧核苷酸序列,有關實驗證實該序列是一種效果很好的免疫佐劑。本研究通過探究不同劑量的Cp G ODN的注射小鼠引起的體液免疫活性并用快速熒光灶抑制試驗(Rapid fluorescent focus inhibition test,RFFIT)檢測抗狂犬病病毒中和抗體(Rabies virus neutralizing antibody,RVNA)效價。通過酶聯免疫斑點法(Enzyme-linked immunospot assay,ELISPOT)和實時熒光定量PCR(Polymerase Chain Reaction,PCR)檢測小鼠脾臟細胞內細胞因子IFN-γ和IL-4探討此佐劑聯合狂犬病疫苗對小鼠細胞免疫應答類型。通過觀察不同劑量Cp G ODN組小鼠脾臟形態(tài)變化、HE染色后的病理改變來對佐劑的安全性進行評估。以上實驗研究確定在小鼠體內最佳Cp G ODN劑量后。最佳劑量Cp G ODN聯合市售狂犬病疫苗抗原量和免疫程序的優(yōu)化實驗:分為RV組、RV+Cp G ODN組、1/2RV+Cp G ODN組、1/4RV+Cp G ODN組、1/8RV+Cp G ODN組,Essen程序免疫Balb/C小鼠,于首次免疫后第35天取血,離心分離血清進行RFFIT檢測RVNA效價。Cp G ODN聯合市售狂犬病疫苗免疫程序優(yōu)化實驗:以兩針、三針、四針、五針的免疫程序,分為含佐劑兩針組(0、3天)、三針組(0、3、7天)、四針組(0、3、7、14天)、五針組(0、3、7、14、28天)和無佐劑五針組(0、3、7、14、28天),抗原為狂犬病疫苗,佐劑量為最佳劑量,在免疫Balb/C小鼠后,取首次免疫后第35天的鼠血清,進行RFFIT抗狂犬病病毒中和抗體效價檢測。Cp G ODN聯合市售狂犬病疫苗暴露后保護效果研究,狂犬病毒標準攻擊毒珠CVS-11對Balb/c小鼠攻毒后,用Cp G ODN聯合不同狂犬病疫苗量(RV、1/2RV、1/4RV、1/8RV)進行ESSEN免疫程序注射,對Balb/c小鼠的暴露后保護效果進行評價。結果小鼠體內實驗,Cp G ODN與狂犬病疫苗組抗體陽轉率高于疫苗對照組,抗體陽轉時間早于疫苗對照組。首次免疫后第35天低劑量和中劑量抗原劑量組中和抗體滴度分別提高5-6倍和3-4倍。首次免疫后第6天,低劑量Cp G ODN組激活的脾細胞分泌IFN-γ的淋巴細胞數均高于RV組,差異具有統計學意義(P0.001)。首次免疫后第14天,Cp G ODN能增加免疫小鼠脾細胞中分泌IFN-γ的淋巴細胞數量,中、低劑量Cp G ODN組分泌IFN-γ的淋巴細胞的數高于RV組,差異具有統計學意義(P0.01)。首次免疫后14天和35天,細胞因子IFN-γm RNA的相對表達量5μg Cp G ODN組的相對表達量顯著高于RV組(P0.05)。Cp G ODN佐劑能夠顯著增強狂犬病疫苗的Th1型免疫應答,能夠促進小鼠脾細胞的IFN-γ分泌,而Th2型免疫應答的細胞因子IL-4分泌沒有明顯變化。首次免疫后第14天,高劑量佐劑免疫組的小鼠脾臟腫大,HE染色后鏡下觀察其白髓中的動脈周圍淋巴鞘增厚,易染體巨噬細胞數目增多,副皮質區(qū)易染體巨噬細胞數目增多,而低劑量和中劑量組的小鼠的脾臟無腫大,白髓及其動脈周圍淋巴鞘正常且脾小體體積較小。疫苗對照組(RV)的白髓、紅髓界限清晰,組織結構正常。1/4 RV+Cp G ODN組的RVNA效價略高于無佐劑的狂犬病疫苗組,1/2RV+Cp G ODN組小鼠血清的RVNA效價最高。在佐劑Cp G ODN聯合狂犬病疫苗4針免疫程序下,小鼠產生RVNA效價最高。RV+Cp G狂犬病疫苗組存活率為50%,高于無佐劑疫苗對照組的存活率(30%),差異具有統計學意義。結論Cp G ODN在小鼠模型上對狂犬病疫苗有顯著的免疫增效作用,并且Cp G ODN能增強狂犬病疫苗對暴露后小鼠的免疫保護效果,是一種潛在的狂犬病疫苗佐劑。
[Abstract]:In this study , we find a kind of adjuvant which can enhance the immune effect of rabies vaccine . The results were as follows : 1 / 2RV + Cp G ODN group , 1 / 4RV + Cp G ODN group , 1 / 8RV + Cp G ODN group , Essen program immunized Balb / C mice . After the first immunization , the antibody positive rate was increased by 5 - 6 and 3 - 4 times . Conclusion Cp - ODN could enhance the immune protective effect of rabies vaccine against rabies vaccine . Conclusion Cp - ODN could enhance the immune protective effect of rabies vaccine against rabies vaccine , and it is a potential vaccine adjuvant for rabies vaccine .
【學位授予單位】：華北理工大學
【學位級別】：碩士
【學位授予年份】：2017
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關期刊論文 前2條

1 何鵬;胡忠玉;;鋁佐劑效應的影響因素及鋁佐劑疫苗改進的研究進展[J];中國生物制品學雜志;2016年06期

2 陳艷;沈波;紀惠玲;;影響狂犬疫苗免疫效果因素的分析及預防措施[J];醫(yī)學動物防制;2010年06期

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本文編號：2091147