本文選題：粉塵螨 + 變應(yīng)原��； 參考：《中國病原生物學(xué)雜志》2013年06期

【摘要】：目的克隆粉塵螨變應(yīng)原Der f Mal f 6(簡稱Mal f 6)編碼基因并構(gòu)建其原核表達(dá)體系。方法提取粉塵螨總RNA,根據(jù)GenBank中的(AY283280.1)序列設(shè)計并合成引物,RT-PCR擴(kuò)增Der f Mal f 6全長基因,克隆至pColdTF DNA載體,轉(zhuǎn)化至E.coli JM109,取陽性克隆測序;將pCold TF-Mal f 6質(zhì)粒轉(zhuǎn)化至BL21,IPTG誘導(dǎo)表達(dá),采用SDS-PAGE驗證表達(dá)產(chǎn)物,采用生物信息學(xué)軟件預(yù)測Mal f 6的理化特性、結(jié)構(gòu)和功能。結(jié)果 RT-PCR獲得全長為495bp的Mal f 6基因。原核表達(dá)后經(jīng)SDS-PAGE電泳顯示其全細(xì)胞、上清及沉淀物均有蛋白表達(dá),以上清表達(dá)量較高。生物信息學(xué)分析該蛋白由164個氨基酸組成,分子質(zhì)量單位為17.7ku,二級結(jié)構(gòu)由α螺旋(4.88%)、延伸主鏈(37.8%)和無規(guī)則卷曲(57.32%)組成,是親水性細(xì)胞質(zhì)蛋白,具有肽酰-脯氨酰反式異構(gòu)酶活性。結(jié)論粉塵螨變應(yīng)原Mal f 6原核表達(dá)獲得成功,為該變應(yīng)原的進(jìn)一步研究及規(guī)模生產(chǎn)和應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Objective to clone the gene encoding the allergen Der f Mal f 6 of Dermatophagoides farinae and construct its prokaryotic expression system. Methods the total RNAs of Dermatophagoides farinae were extracted. The full-length gene of Der f Mal f 6 was amplified by RT-PCR according to the sequence of AY283280.1 in GenBank, cloned into pColdTF DNA vector, transformed into E. coli JM109, and sequenced, and the plasmid pCold TF-Mal f 6 was transformed into BL21 IPTG. SDS-PAGE was used to verify the expressed product and bioinformatics software was used to predict the physical and chemical properties, structure and function of Mal f 6. Results the full length of Mal f 6 gene of 495bp was obtained by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR). After prokaryotic expression, SDS-PAGE electrophoresis showed that protein was expressed in the whole cell, supernatant and sediment. Bioinformatics analysis showed that the protein was composed of 164 amino acids with a molecular weight unit of 17.7 ku.The secondary structure consisted of a helix 4.88a, an extension of the main chain 37.8% and an irregular crimp of 57.32). It was a hydrophilic cytoplasmic protein with peptidyl-proline reverse isomerase activity. Conclusion the prokaryotic expression of the allergen Mal f 6 of Dermatophagoides farinae was successful, which laid a foundation for the further study, scale production and application of the allergen.
【作者單位】： 鹽城衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)學(xué)院;
【基金】：國家自然科學(xué)基金項目(No.NS-FC31272369,NS-FC81001330) 江蘇省衛(wèi)生廳招標(biāo)項目(No.Z200914) 江蘇省衛(wèi)生職業(yè)技術(shù)教育研究立項課題(No.J200907) 江蘇省“六大人才高峰”第六批資助項目
【分類號】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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【共引文獻(xiàn)】

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【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：2043824