本文選題：外泌體 + 間充質(zhì)干細(xì)胞�。� 參考：《河北北方學(xué)院》2017年碩士論文

【摘要】：間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal stem cells,MSC)對(duì)適應(yīng)性免疫和獲得性免疫均有一定的調(diào)節(jié)功能,成功運(yùn)用于治療移植物抗宿主病(Graft-Versus-Host Disease,GVHD)后迅速被臨床上用于治療其他免疫相關(guān)疾病。既往對(duì)MSC的作用機(jī)制研究發(fā)現(xiàn),其功能受到細(xì)胞的來源,體外培養(yǎng)條件,輸入體內(nèi)后的微環(huán)境等多方面因素的影響。大量的臨床實(shí)驗(yàn)證明MSC在臨床上治療GVHD的療效具有很大差異。通過靜脈輸入體內(nèi)后的MSC很難繼續(xù)存活,而主要依靠其旁分泌作用發(fā)揮功能,其中外泌體是重要的作用介質(zhì)�，F(xiàn)已有實(shí)驗(yàn)證實(shí)了外泌體參與MSC的免疫調(diào)節(jié)過程。但外泌體體積較小,直徑只有30nm~100nm,現(xiàn)有的提取方法尚不能快速,高效的制備外泌體。MSC的療效差異是否跟外泌體免疫調(diào)節(jié)能力有差異有關(guān),尚缺乏相關(guān)的研究。本研究通過以下實(shí)驗(yàn),對(duì)該問題進(jìn)行探索。選擇空軍總醫(yī)院2015-01至2015-05健康產(chǎn)婦的臍帶所提取的臍帶MSC細(xì)胞(Human umbilical cord-MSCs,hUC-MSCs),擴(kuò)增代數(shù)為P3-P5。將MSC細(xì)胞分為5組,分別使用終濃度為2%、4%、6%、8%、10%的聚乙二醇6000(Polyethylene glycol 6000,PEG6000)提取無血清MSC培養(yǎng)上清中的外泌體(h UC-MSCs-ex),利用透射電子顯微鏡及流式細(xì)胞術(shù)對(duì)所得的物質(zhì)進(jìn)行鑒定,比較各組蛋白質(zhì)的含量。從入組的MSC中隨機(jī)選取5株不同供者來源的hUC-MSCs,收集無血清培養(yǎng)上清用PEG6000提取外泌體。分離健康供者肝素抗凝臍帶血中的單個(gè)核細(xì)胞(Umbilicalcord blood mononuclear cells,UBMCs)。根據(jù)hUC-MSCs-ex來源不同分5大組(A、B、C、D、E)進(jìn)行實(shí)驗(yàn),每組分為5小組進(jìn)行組間對(duì)比研究,進(jìn)一步觀察UBMCs增殖、分泌及對(duì)K562細(xì)胞殺傷作用的影響,分組為:陰性對(duì)照組,陽性對(duì)照組,實(shí)驗(yàn)組1,實(shí)驗(yàn)組2,實(shí)驗(yàn)組3。均選用含血清的RPMI 1640培養(yǎng)基,陰性對(duì)照組為空白組;陽性對(duì)照組、實(shí)驗(yàn)組1、2、3添加UBMCs激活物:刀豆蛋白A(Concanavalin A,ConA)、重組白介素2(rhIL-2);實(shí)驗(yàn)組1、2、3加入同一供者,不同濃度的(2μg/ml、5μg/ml、10μg/ml)hUC-MSCs-ex共培養(yǎng)。相同的分組將5株不同來源hUC-MSCs-ex和UBMCs共培養(yǎng),觀察UBMCs增殖,分泌,對(duì)K562細(xì)胞殺傷作用的變化。通過研究發(fā)現(xiàn)使用PEG6000提取的外泌體在透射電子顯微鏡下呈圓形,直徑在30nm~100nm左右,表達(dá)CD9,CD63,CD81及CD44,提示提取的物質(zhì)屬于MSC分泌的外泌體。用8%終濃度的PEG6000提取hUC-MSCs-ex的總蛋白的量最佳,為837±107μg/1×107cells。在抑制細(xì)胞增殖方面,外泌體的來源和濃度因素之間無交互作用(F=1.033,P0.05)。不同來源,不同濃度的hUC-MSCs-ex對(duì)UBMCs增殖抑制能力均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=77.362,P0.01;F=13.862,P0.01)。其中C#hUC-MSCs-ex各個(gè)濃度的抑制能力均高于其他實(shí)驗(yàn)組。在抑制細(xì)胞分泌IFN-γ,TNF-α方面,不同來源,不同濃度的hUC-MSCs-ex的抑制能力均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(F=63.390,P0.01;F=14.605,P0.01)。不同濃度的hUC-MSCs-ex抑制UBMCs分泌的能力有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異,其中A#hUC-MSCs-ex各個(gè)濃度的抑制能力均高于其他實(shí)驗(yàn)組。在抑制細(xì)胞殺傷能力方面,濃度為2μg/ml,5μg/ml的不同來源的外泌體對(duì)UBMCs殺傷能力的影響具有差異性(F=12.576,P0.05;F=8.702,P0.05),其中D#hUC-MSCs-ex的抑制能力均高于其他實(shí)驗(yàn)組。綜上,我們的研究發(fā)現(xiàn):使用終濃度為8%的PEG6000可快速,高效地制備外泌體。不同供者來源hUC-MSCs-ex在免疫調(diào)節(jié)方面具有異質(zhì)性。
[Abstract]:MSC cells ( MSC ) were used to treat other immune - related diseases rapidly after graft - host disease ( GVHD ) . The effects of proliferation , secretion and anti - tumor effects on K562 cells were observed . The results showed that there was no interaction between different concentrations of hUC - MSCs - ex and other experimental groups .
【學(xué)位授予單位】：河北北方學(xué)院
【學(xué)位級(jí)別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號(hào)】：R392

【參考文獻(xiàn)】

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1 沈關(guān)心，張悅，，邵靜芳，王曉林，朱慧芬;Experimental　Studyon　Anti－tumor　Effect　of　SplenocytesInduced　by　Anti－CD3McAb，PHA　and　IL－2[J];同濟(jì)醫(yī)科大學(xué)學(xué)報(bào);1994年01期

本文編號(hào)：2003196