本文選題：川芎嗪衍生物CXC195 + 6-羥基多巴胺�。� 參考：《山東大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：[研究背景及目的]帕金森病(Parkinson's disease,PD)是一種即阿爾茲海默癥(Alzheimer's disease,AD)之后較為常見的中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病,呈進行性退行改變,嚴(yán)重危害人類健康。因此,探究導(dǎo)致PD的發(fā)病機制,找出可以直接作用于PD關(guān)鍵靶點的醫(yī)治藥物,無論在理論基礎(chǔ)還是臨床應(yīng)用方面均具有非常重要的意義。黑質(zhì)紋狀體內(nèi)多巴胺(dopamine,DA)能神經(jīng)元細(xì)胞凋亡(apoptosis)致使其缺失是引發(fā)PD的一個首要機制。最近的研究已經(jīng)表明,絲氨酸/蘇氨酸激酶Akt的磷酸化抑制糖原合成酶激酶-3β(Glycogen synthase kinase-3β,GSK-3β)活性,能夠減弱6-羥基多巴胺(6-hydroxyldopamine,6-OHDA)致PD模型中多巴胺能神經(jīng)元的凋亡�；衔顲XC195是我校藥學(xué)院劉新泳教授團隊新研制的一種川芎嗪烴基哌嗪類衍生物。我們前期的研究結(jié)果顯示,CXC195能明顯抑制腦缺血引發(fā)的細(xì)胞凋亡。但是,CXC195對PD的作用及機制未見報道。本次課題初次探究CXC195是否對6-OHDA致PD小鼠模型的DA能神經(jīng)元具有保護作用,以及CXC195是否通過PI3K/Akt/GSK-3β相關(guān)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路抑制DA能神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。[方法]1.CXC195對6-OHDA致PD小鼠模型的DA能神經(jīng)元的保護作用選擇雄性C57BL/6健康小鼠,于右側(cè)紋狀體內(nèi)注射6-OHDA構(gòu)建PD模型,模型制備后每日腹腔注射不同劑量的CXC195(10mg/kg、3 mg/kg、1 mg/kg),分別檢測下列指標(biāo):1.1分別于7d、14d阿撲嗎啡皮下注射誘導(dǎo),進行旋轉(zhuǎn)行為學(xué)檢測。1.2于14 d取紋狀體,通過液相質(zhì)譜聯(lián)用系統(tǒng)(LC/MS)測定紋狀體DA濃度。1.3于14 d取小鼠黑質(zhì)和紋狀體,以蛋白印跡法(Western blot)檢測酪氨酸羥化酶(Tyrosine Hydroxylase,TH)含量。1.4通過免疫組化漂染方法觀察DA能神經(jīng)元TH的蛋白水平。1.5通過TUNEL染色標(biāo)識法觀察黑質(zhì)內(nèi)DA能神經(jīng)元的細(xì)胞凋亡。1.6通過Western blot檢測與凋亡信號通路有關(guān)的Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白表達水平的改變。1.7 通過 Western blot 檢測黑質(zhì)內(nèi) p-Akt(Ser 473)和 p-GSK-3β(Ser 9)的水平。2.CXC195通過PI3K/Akt/GSK-3 β信號轉(zhuǎn)導(dǎo)通路,減少DA能神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。由于CXC195可顯著上調(diào)6-OHDA致PD小鼠模型中黑質(zhì)Akt蛋白Ser 473位點和GSK-3β蛋白Ser 9位點磷酸化,所以使用PI3K特異性抑制劑Wortmannin抑制Akt磷酸化來研究CXC195抗凋亡的作用是否通過激活A(yù)kt實現(xiàn)的。2.1 通過 Western blot 檢測黑質(zhì)內(nèi) p-Akt(Ser 473)和 p-GSK-3β(Ser 9)的水平。2.2 通過TUNEL染色標(biāo)記法測定小鼠PD模型黑質(zhì)內(nèi)細(xì)胞凋亡的含量變化。2.3通過Western blot測定與凋亡有關(guān)的Bcl-2、Bax及caspase-3蛋白表達水平。[結(jié)果]1.CXC195明顯減少6-OHDA誘導(dǎo)PD模型小鼠向左側(cè)旋轉(zhuǎn)的次數(shù)。2.CXC195增加6-OHDA誘導(dǎo)PD模型小鼠紋狀體內(nèi)DA的含量。3.CXC195改善6-OHDA誘導(dǎo)PD模型小鼠紋狀體和黑質(zhì)中TH的缺失。4.CXC195減少6-OHDA誘導(dǎo)PD小鼠模型黑質(zhì)DA能神經(jīng)元細(xì)胞凋亡。5.CXC195抑制6-OHDA引起的PD小鼠模型黑質(zhì)Bcl-2下調(diào)、Bax上調(diào)及caspase-3 活化。6.CXC195上調(diào)6-OHDA誘導(dǎo)的PD小鼠模型Akt蛋白Ser473位點和GSK-3β蛋白Ser 9位點磷酸化。7.PI3K抑制劑通過阻斷PI3K/Akt/GSK-3β信號通路抑制CXC195對6-OHDA誘導(dǎo)的PD小鼠的抗凋亡作用。[結(jié)論]CXC195 通過其抗凋亡特性和參與調(diào)控PI3K/Akt/GSK-3β信號通路,保護6-OHDA致PD模型DA能神經(jīng)元的損傷。
[Abstract]:The research background and purpose of Parkinson ' s disease ( PD ) is a common central nervous system disease after Alzheimer ' s disease ( AD ) . 1 . The level of apoptosis in the nigra of PD model mice was determined by Western blot .
【學(xué)位授予單位】：山東大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R285.5;R-332

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本文編號：1933824