本文選題：THP-巨噬細(xì)胞 + 脂多糖��； 參考：《中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)》2013年08期

【摘要】：目的研究炎癥介質(zhì)-脂多糖(LPS)誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)激是否通過(guò)擾亂固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白裂解激活蛋白-固醇調(diào)節(jié)元件結(jié)合蛋白2(SCAP-SREBP2)復(fù)合物介導(dǎo)的低密度脂蛋白受體(LDLr)負(fù)反饋調(diào)控,增加THP-1巨噬細(xì)胞對(duì)非修飾低密度脂蛋白膽固醇(LDL)攝取,導(dǎo)致泡沫細(xì)胞形成。方法誘導(dǎo)分化成功的THP-1巨噬細(xì)胞在無(wú)血清培養(yǎng)基中培養(yǎng)4 h后,分為對(duì)照組(繼續(xù)無(wú)血清培養(yǎng)),高脂組(加入LDL負(fù)荷,終濃度為25 mg·L-1),高脂加炎癥刺激組(加入LDL負(fù)荷,終濃度為25 mg·L-1,同時(shí)加入炎癥介質(zhì)LPS,終濃度200μg·L-1),單純炎癥刺激組(加入炎癥介質(zhì)LPS,終濃度200μg·L-1),以上各組細(xì)胞培養(yǎng)24 h后收獲。ELISA法檢測(cè)細(xì)胞培養(yǎng)基中TNF-α濃度,酶化學(xué)法檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)膽固醇濃度,瓊脂糖電泳檢測(cè)LDL氧化程度,Real time PCR法檢測(cè)LDLr、SREBP2和SCAP mRNA表達(dá)水平,Western blot法檢測(cè)LDLr、SREBP2和SCAP蛋白表達(dá),激光共聚焦檢測(cè)SCAP在內(nèi)質(zhì)網(wǎng)與高爾基體間的轉(zhuǎn)位情況。結(jié)果細(xì)胞內(nèi)膽固醇測(cè)定發(fā)現(xiàn),炎癥介質(zhì)LPS通過(guò)增加THP-1巨噬細(xì)胞對(duì)非修飾LDL攝取,導(dǎo)致巨噬細(xì)胞轉(zhuǎn)變?yōu)榕菽?xì)胞。在無(wú)炎癥介質(zhì)LPS時(shí),25 mg·L-1LDL減少LDLr mRNA和蛋白表達(dá)(P0.05)。然而,LPS增加LDLr mRNA和蛋白表達(dá),逆轉(zhuǎn)25 mg·L-1LDL對(duì)LDLr的抑制效應(yīng),不恰當(dāng)?shù)脑黾恿司奘杉?xì)胞對(duì)LDL攝取(P0.05),LPS刺激也導(dǎo)致了SCAP和SREBP2的mRNA和蛋白過(guò)表達(dá)(P0.05),同時(shí)促進(jìn)了SCAP從內(nèi)質(zhì)網(wǎng)轉(zhuǎn)移到高爾基體。這些結(jié)果提示LPS干擾了膽固醇介導(dǎo)的LDLr負(fù)反饋調(diào)控,使非修飾LDL在巨噬細(xì)胞內(nèi)堆積,導(dǎo)致泡沫細(xì)胞形成。結(jié)論本研究提示,在LPS誘導(dǎo)的炎癥應(yīng)激狀態(tài)條件下,天然LDL可以通過(guò)LDLr被巨噬細(xì)胞大量攝取入細(xì)胞內(nèi),導(dǎo)致泡沫細(xì)胞形成,這可能是巨噬細(xì)胞泡沫化的另一條通路。
[Abstract]:Objective to investigate whether the inflammatory stress induced by lipopolysaccharide (LPS) disrupts the negative feedback regulation of LDLrs mediated by the steroid regulatory element binding proteolytic activator-steroid regulatory element binding protein (2SCAP-SREBP2) complex. Increased uptake of unmodified low density lipoprotein cholesterol (LDL) by THP-1 macrophages resulted in foam formation. Methods the differentiated THP-1 macrophages were cultured in serum-free medium for 4 h and were divided into two groups: control group (continuous serum-free culture), hyperlipidemia group (adding LDL load, final concentration 25 mg / L), hyperlipidemia plus inflammatory stimulation group (adding LDL load). The final concentration was 25 mg / L, and the final concentration was 200 渭 g / L ~ (-1). The TNF- 偽 concentration in the cell culture medium was measured by Elisa after 24 hours of culture, and the final concentration was 200 渭 g / L ~ (-1) in the simple inflammatory stimulation group, and the final concentration was 200 渭 g / L ~ (-1). The intracellular cholesterol concentration was detected by enzyme method, the degree of oxidation of LDL by agarose electrophoresis and the expression level of SREBP2 and SCAP mRNA by real time PCR method. The expression of SREBP2 and SCAP protein was detected by Western blot method. The translocation of SCAP between endoplasmic reticulum and Golgi apparatus was detected by confocal laser. Results Intra-cellular cholesterol assay showed that the inflammatory mediator LPS increased the uptake of unmodified LDL by THP-1 macrophages and resulted in the transformation of macrophages into foam cells. In the absence of LPS, 25 mg L-1LDL decreased the expression of LDLr mRNA and protein (P 0.05). However, LPs increased the expression of LDLr mRNA and protein, reversed the inhibitory effect of 25 mg L-1LDL on LDLr, and improperly increased the uptake of LDL by macrophages. LPs also resulted in the overexpression of mRNA and protein in SCAP and SREBP2, and promoted the transfer of SCAP from endoplasmic reticulum to Golgi body. These results suggest that LPS interferes with the cholesterol-mediated negative feedback regulation of LDLr, resulting in the accumulation of unmodified LDL in macrophages and the formation of foam cells. Conclusion under the condition of inflammatory stress induced by LPS, natural LDL can be absorbed into the cells by macrophages through LDLr, leading to the formation of foam cells, which may be another pathway of macrophage foaming.
【作者單位】： 瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院心血管內(nèi)科;重慶醫(yī)科大學(xué)脂質(zhì)研究中心重慶市糖脂代謝重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室;重慶醫(yī)科大學(xué)附屬第一院心血管內(nèi)科;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(No 30670869) 四川省衛(wèi)生廳基金資助項(xiàng)目(No 2011-110335) 瀘州市科技局基金資助項(xiàng)目[No 2011-I-S37(6/7)] 瀘州醫(yī)學(xué)院基金資助項(xiàng)目(No 2010-108) 瀘州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院基金資助項(xiàng)目(No2011-43)
【分類(lèi)號(hào)】：R363

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1917546