發(fā)布時間：2018-05-17 20:35

  本文選題：重癥肌無力 + 乙酰膽堿受體　； 參考：《細(xì)胞與分子免疫學(xué)雜志》2013年02期

【摘要】：目的獲得具有生物學(xué)活性的重組人煙堿型乙酰膽堿受體(nAChR)α1亞基胞外域(ECD)蛋白。方法從TE761細(xì)胞中提取人nAChRα1亞單位全長基因,以PCR法擴(kuò)增nAChRα1亞基ECD1-216,酶切后裝入pcDNA3.1表達(dá)載體中,脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入CHO細(xì)胞,分別在轉(zhuǎn)染后6～72 h的7個時間點(diǎn)進(jìn)行熒光實(shí)時定量PCR鑒定ECD基因的表達(dá)水平,利用125I標(biāo)記的銀環(huán)蛇毒素測定細(xì)胞培養(yǎng)上清中ECD蛋白的表達(dá)。結(jié)果 Hα1-216 PCR后所得708 bp片段大小符合預(yù)計(jì)結(jié)果,測序所得核苷酸序列與GenBank中人AChRα1序列完全一致。所構(gòu)建的新載體經(jīng)酶切鑒定目的基因正確插入,載體構(gòu)建成功。隨著細(xì)胞培養(yǎng)時間的延長ECD基因mRNA表達(dá)水平逐漸增加,且ECD蛋白表達(dá)水平也不斷提高。結(jié)論在CHO細(xì)胞成功表達(dá)了具有生物學(xué)活性的重組人nAChRα1胞外域蛋白。
[Abstract]:Objective to obtain recombinant human nicotinic acetylcholine receptor (nAChR) 偽 1 extracellular domain (ECD) protein with biological activity. Methods the full-length gene of human nAChR 偽 1 subunit was extracted from TE761 cells. The nAChR 偽 1 subunit ECD1-216 was amplified by PCR. The gene was digested into pcDNA3.1 expression vector and transfected into CHO cells by liposome. The expression level of ECD gene was detected by fluorescence real-time PCR at 7 time points at 6h 72 h after transfection, and the expression of ECD protein in the supernatant of cell culture was detected by 125I-labeled Agkistrotoxin. Results the size of the 708bp fragment obtained after H 偽 1-216 PCR was in accordance with the predicted results, and the nucleotide sequence obtained by sequencing was completely consistent with the human AChR 偽 1 sequence in GenBank. The target gene was inserted correctly and the vector was successfully constructed. With the extension of cell culture time, the level of mRNA expression of ECD gene increased gradually, and the expression of ECD protein increased. Conclusion Recombinant human nAChR 偽 1 extracellular domain protein with biological activity was successfully expressed in CHO cells.
【作者單位】： 第四軍醫(yī)大學(xué)唐都醫(yī)院神經(jīng)內(nèi)科;第四軍醫(yī)大學(xué)病原與微生物學(xué)教研室;
【基金】：國家自然科學(xué)基金(30972721)
【分類號】：R392.12

【二級參考文獻(xiàn)】

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本文編號：1902770