發(fā)布時間：2018-05-16 06:09

  本文選題：骨髓間充質(zhì)干細胞 + 基因沉默��； 參考：《中國病理生理雜志》2013年08期

【摘要】：目的:探討沉默caspase-3對大鼠骨髓間充質(zhì)干細胞(MSCs)增殖、細胞周期和凋亡的影響。方法:構(gòu)建靶向caspase-3的shRNA重組慢病毒并轉(zhuǎn)染MSCs,通過real-time PCR和Western blotting在mRNA及蛋白水平鑒定轉(zhuǎn)染結(jié)果。采用MTS法檢測細胞增殖,流式細胞術(shù)檢測細胞周期。Real-time PCR檢測bcl-2和bax mRNA的表達。Hoechst熒光染色法檢測細胞的凋亡情況。結(jié)果:Real-time PCR和Western blotting結(jié)果均表明成功建立穩(wěn)定轉(zhuǎn)染shRNA-caspase-3的大鼠MSCs細胞株。沉默caspase-3使MSCs的增殖率明顯提高(P0.05),且S期細胞百分比明顯增多,為(52.66±0.30)%。沉默caspase-3后bcl-2 mRNA表達上調(diào),bax mRNA表達下調(diào),bcl-2/bax比值升高(P0.05)。轉(zhuǎn)染組的細胞凋亡率為(15.01±1.73)%,低于空載體組的(25.67±3.05)%和空白對照組的(23.67±1.16)%(P0.05)。結(jié)論:沉默caspase-3能調(diào)控MSCs的細胞周期,促進細胞增殖,減少細胞凋亡。
[Abstract]:Aim: to investigate the effects of silencing caspase-3 on proliferation, cell cycle and apoptosis of rat bone marrow mesenchymal stem cells (MSCs). Methods: the recombinant shRNA lentivirus targeting caspase-3 was constructed and transfected into MSCs. The transfection results were identified by real-time PCR and Western blotting at the level of mRNA and protein. MTS assay was used to detect cell proliferation and flow cytometry to detect cell cycle. Real-time PCR was used to detect the expression of bcl-2 and bax mRNA. Hoechst fluorescence staining was used to detect apoptosis. Results the results of PCR and Western blotting showed that the stable rat MSCs cells transfected with shRNA-caspase-3 were successfully established. Silencing caspase-3 significantly increased the proliferation rate of MSCs and the percentage of S phase cells, which was 52.66 鹵0.30%. After silencing caspase-3, the expression of bcl-2 mRNA up-regulated and down-regulated the ratio of bcl-2 / Bax to increase P0.05. The rate of apoptosis in the transfected group was 15.01 鹵1.73, which was lower than that in the empty vector group (25.67 鹵3.05) and the blank control group (23.67 鹵1.16). Conclusion: silencing caspase-3 can regulate the cell cycle of MSCs, promote cell proliferation and reduce apoptosis.
【作者單位】： 中山大學(xué)孫逸仙紀念醫(yī)院心胸外科;廣州市第一人民醫(yī)院腦內(nèi)科;
【基金】：廣東省科技計劃項目(No.2012B031800258) 中山大學(xué)青年教師培育項目(No.11ykpy30)
【分類號】：R363

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本文編號：1895765