發(fā)布時間：2018-05-14 21:25

  本文選題：BCG + 神經(jīng)-免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)　； 參考：《吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：系統(tǒng)疫苗學(xué)能夠在RNA、蛋白質(zhì)水平整體了解疫苗潛在的分子機制,從而有效預(yù)測疫苗的免疫效果。神經(jīng)-免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)是機體維持內(nèi)環(huán)境穩(wěn)態(tài)的重要機制,免疫系統(tǒng)和神經(jīng)系統(tǒng)通過肽類激素、神經(jīng)遞質(zhì)和細胞因子等的相互作用,共同構(gòu)成機體的防御體系,保證機體能夠?qū)?nèi)外刺激作出及時和準確的應(yīng)答。從神經(jīng)-免疫調(diào)控網(wǎng)絡(luò)的角度應(yīng)用系統(tǒng)疫苗的原理研究疫苗誘導(dǎo)機體的免疫效應(yīng),能夠更加全面的分析免疫后各指標間的調(diào)控關(guān)系�？ń槊�(Bacillus Calmettee-Guerin,BCG)作為目前世界上唯一得到許可并被廣泛應(yīng)用的結(jié)核病疫苗,是人們預(yù)防結(jié)核病(tuberculosis,TB)的重要手段之一。然而隨著接種人群擴大、接種時間延長,BCG接種所產(chǎn)生的弊端也逐漸被發(fā)現(xiàn),新型抗結(jié)核疫苗的研發(fā)難題亟待解決。應(yīng)用系統(tǒng)疫苗學(xué)的方法全面深入的理解BCG誘導(dǎo)機體產(chǎn)生免疫效應(yīng)的機制,才能在此基礎(chǔ)上做更進一步的研發(fā)工作。本研究首先利用M7H9肉湯培養(yǎng)基培養(yǎng)卡介苗,成功獲得了符合中國藥典規(guī)定的卡介苗菌株。將培養(yǎng)的卡介苗稀釋至5×105CFU/100μL,在小鼠足部及尾根部注射,于不同時間點采集外周血、下丘腦、脾臟及引流淋巴結(jié)樣本。應(yīng)用ELISA方法檢測免疫后各周小鼠血清特異性抗體效價水平,流式細胞術(shù)檢測脾臟和引流淋巴結(jié)T細胞亞群含量,應(yīng)用RT-PCR方法對下丘腦、脾臟和引流淋巴結(jié)的瘦素和輔助性T細胞的細胞因子水平進行檢測,進而對各指標間聯(lián)系進行分析。經(jīng)過對BCG免疫后小鼠神經(jīng)系統(tǒng)和免疫系統(tǒng)的研究,為我們更深入了解BCG的免疫機制提供實驗依據(jù),同時也為新型結(jié)核疫苗的開發(fā)奠定基礎(chǔ)。具體實驗結(jié)果如下:1、本研究采用ELISA方法檢測IgG抗體效價,設(shè)置波長492nm處效價為縱坐標,取樣時間為橫坐標,繪制抗體效價水平曲線。小鼠在BCG免疫1周后,血清中IgG水平逐漸上升,到第5周抗體OD600檢測值基本維持在0.4左右,說明BCG免疫能保持長時間的高水平抗體效價。2、免疫后小鼠于各周采集樣品用于流式檢測T細胞亞群含量,淋巴結(jié)在免疫后顯著增生,而T細胞水平顯著下降,說明增生以B細胞或其他免疫細胞為主,而且免疫后CD4+/CD8+沒有顯著變化。說明BCG能同時引發(fā)引流淋巴結(jié)CD4+、CD8+應(yīng)答,BCG免疫后主要引起脾臟產(chǎn)生CD4+T細胞應(yīng)答。3、流式檢測Treg含量結(jié)果表明,BCG免疫后引起淋巴結(jié)Treg細胞水平顯著升高,且持續(xù)時間長,脾臟中Treg細胞水平僅短暫升高。這一結(jié)果可能與脾臟和淋巴結(jié)中BCG菌體含量不同有關(guān),也可能與BCG引起兩者不同的炎性反應(yīng)有關(guān)。4、應(yīng)用RT-PCR方法檢測各組織中瘦素及瘦素受體表達量。免疫后,下丘腦與引流淋巴結(jié)的瘦素和瘦素受體表達量變化趨勢大致相同,免疫后瘦素水平極顯著高于對照組,之后逐漸降低。在脾臟中,BCG免疫后各周瘦素表達量均低于對照組,而瘦素受體表達量于各周均無顯著性變化。說明在BCG免疫后淋巴結(jié)為主要的免疫應(yīng)答器官,且下丘腦與引流淋巴結(jié)的調(diào)控呈相關(guān)性。5、BCG免疫后對下丘腦、脾臟及引流淋巴結(jié)Th1型細胞因子IL-2和IFN-γ進行檢測,結(jié)果表明,在脾臟中主要引發(fā)Th1型細胞因子應(yīng)答,在淋巴結(jié)中主要引發(fā)IFN-γ應(yīng)答,且下丘腦與免疫器官間關(guān)于Th1型細胞因子的調(diào)控相關(guān)關(guān)系。6、BCG免疫后對下丘腦、脾臟及引流淋巴結(jié)Th2型細胞因子IL-4和IL-10進行檢測,結(jié)果表明,BCG免疫主要引起引流淋巴結(jié)IL-4應(yīng)答。7、BCG免疫后對下丘腦、脾臟及引流淋巴結(jié)Th17型細胞因子IL-17A進行檢測。免疫主要引發(fā)引流淋巴結(jié)中Th17型細胞應(yīng)答,而且引流淋巴結(jié)關(guān)于IL-17A的應(yīng)答與下丘腦之間具有一定的調(diào)節(jié)作用。8、BCG免疫后對下丘腦、脾臟及引流淋巴結(jié)炎性細胞因子IL-1β、IL-6和TNF-α進行檢測。免疫能夠引發(fā)脾臟和引流淋巴結(jié)發(fā)生不同程度和時間的炎性反應(yīng),且各細胞因子表達量與下丘腦之間具有一定的調(diào)節(jié)作用。綜上所述本研究從系統(tǒng)疫苗學(xué)的角度在神經(jīng)-免疫層面對免疫BCG的小鼠進行了檢測,經(jīng)血清特異性抗體檢測、T細胞亞群含量分析、Treg細胞含量檢測、瘦素水平檢測及免疫相關(guān)細胞因子的檢測實驗,驗證了BCG免疫對機體的整體影響,為進一步探索BCG免疫誘導(dǎo)的免疫機制以及新型結(jié)核疫苗的研制提供了實驗依據(jù),并為日后的深入研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:The results of this study were as follows : 1 . The effect of BCG on the immune response of mice was studied . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The results were as follows : 1 . The effect of BCG on immune system was studied . The levels of serum leptin and leptin receptor in the hypothalamus , spleen and draining lymph nodes were detected by RT - PCR . The results showed that the levels of leptin and leptin receptor in the hypothalamus , spleen and drainage nodes were significantly higher than those in the control group .

【學(xué)位授予單位】：吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R392

【參考文獻】

相關(guān)期刊論文 前2條

1 武月章;安瀟瀟;張文慧;張林波;;BCG免疫對小鼠血清特異性抗體與脾臟免疫相關(guān)細胞因子表達的影響[J];吉林農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報;2015年06期

2 熊英;白彥萍;潘琳;楊頂權(quán);張立新;張小寧;;進行期銀屑病患者神經(jīng)內(nèi)分泌免疫網(wǎng)絡(luò)中相關(guān)介質(zhì)的表達[J];中日友好醫(yī)院學(xué)報;2010年03期

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本文編號：1889479