本文選題：WDR5 + 真核表達(dá)�。� 參考：《大理大學(xué)》2017年碩士論文

【摘要】：WD重復(fù)蛋白5(WD repeat-containing protein 5,WDR5)是WD-40蛋白家族的成員,由333個氨基酸組成,其肽鏈含有7個WD重復(fù)結(jié)構(gòu)形成的β-折疊,是WDR5的主要功能結(jié)構(gòu)域。作為WD40家族的成員,它廣泛參與了生物體的基因表達(dá)調(diào)控,在混合譜系白血病的激活、腫瘤形成、VISA相關(guān)的信號復(fù)合體的裝配及IRF3和NF-κB的激活等方面都發(fā)揮了巨大作用。但迄今為止,WDR5還有許多生物學(xué)作用機(jī)理尚待闡明。本課題第二部分利用基因重組技術(shù)構(gòu)建人源WDR5全長結(jié)構(gòu)基因真核表達(dá)載體,建立穩(wěn)定表達(dá)WDR5的LNCaP細(xì)胞株。實(shí)驗(yàn)中通過PCR擴(kuò)增WDR5基因后,將WDR5插入pCI-neo載體中,酶切及測序鑒定重組質(zhì)粒。采用脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染法將重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染LNCaP細(xì)胞,Real Time-PCR檢測轉(zhuǎn)染細(xì)胞WDR5的mRNA表達(dá)水平。經(jīng)酶切及測序證實(shí)成功構(gòu)建了真核表達(dá)載體pCI-neo-WDR5構(gòu)建正確,重組質(zhì)粒轉(zhuǎn)染到LNCaP細(xì)胞后,經(jīng)G418篩選獲得穩(wěn)定表達(dá)的細(xì)胞株,Real Time-PCR方法檢測到WDR5基因在轉(zhuǎn)錄水平的表達(dá),初步表明穩(wěn)定表達(dá)WDR5的LNCaP細(xì)胞株的建立,為下一步WDR5的深入研究及應(yīng)用奠定了基礎(chǔ)。在哺乳動物個體發(fā)育過程中,DNA甲基化對性別決定和分化具有重要調(diào)節(jié)作用。近來在我們實(shí)驗(yàn)研究中證實(shí)了WDR5和SRY能共定位在SOX9的啟動子上,并且通過兩者協(xié)調(diào)作用上調(diào)SOX9的表達(dá),同時抑制beta-Catenin的表達(dá)。因此,WDR5在性別決定中起著重要的調(diào)節(jié)作用。但是WDR5如何參與及具體調(diào)節(jié)SOX9基因表達(dá)機(jī)制卻不清楚。故本課題的第三部分,我們應(yīng)用與WDR5直接緊密相關(guān)的組蛋白標(biāo)記H3K4me1/2/3抗體進(jìn)行染色體免疫沉降(ChIP)實(shí)驗(yàn),以驗(yàn)證WDR5分子對SOX9基因啟動子的初步表觀調(diào)節(jié)。
[Abstract]:WD repeat protein 5 (WD repeat-containing protein 5, WDR5) is a member of the WD-40 protein family and consists of 333 amino acids. Its peptide chain contains 7 WD duplicated beta folds. It is the main functional domain of WDR5. As a member of the WD40 family, it is widely involved in the regulation of gene expression in the biological body and the activation of the mixed lineage leukemia. The formation of tumor, the assembly of VISA related signal complex and the activation of IRF3 and NF- kappa B have played a great role. But so far, many biological mechanisms of WDR5 have yet to be elucidated. The second part of this subject uses gene recombination technology to construct eukaryotic expression vector of human WDR5 fully long structure gene and establish a stable expression of WDR5. In the experiment, the WDR5 gene was amplified by PCR, and WDR5 was inserted into the pCI-neo vector, and the recombinant plasmid was identified by enzyme digestion and sequencing. The recombinant plasmid was transfected into LNCaP cells by liposome transfection, and Real Time-PCR was used to detect the mRNA expression level of WDR5 in the transfected cells. The eukaryotic expression carrier was successfully constructed by enzyme digestion and sequencing. After the construction was correct, the recombinant plasmid was transfected into LNCaP cells and screened by G418 to obtain the stable expression of the cell line. The Real Time-PCR method was used to detect the expression of WDR5 gene at the transcriptional level. It preliminarily indicated the establishment of the LNCaP cell line that stably expressed WDR5, which laid the foundation for the further study and application of the next step of WDR5. DNA methylation plays an important regulatory role in gender determination and differentiation. In recent experimental studies, we have demonstrated that WDR5 and SRY can be Co located on the promoter of SOX9, and the expression of SOX9 is up-regulated through the coordination of both, and the expression of beta-Catenin is inhibited. Therefore, WDR5 plays an important role in the regulation of sex determination. It is not clear how WDR5 participates in and specifically regulates the mechanism of SOX9 gene expression. Therefore, in the third part of this topic, we use the histone labeled H3K4me1/2/3 antibody, which is closely related to WDR5, to carry out the chromosome immunization (ChIP) experiment to verify the preliminary apparent regulation of the WDR5 molecule on the SOX9 gene promoter.

【學(xué)位授予單位】：大理大學(xué)
【學(xué)位級別】：碩士
【學(xué)位授予年份】：2017
【分類號】：R3416

【相似文獻(xiàn)】

相關(guān)期刊論文 前10條

1 梁平,李濟(jì)潔,龐偉;P~(16)基因的研究進(jìn)展[J];廣西醫(yī)學(xué);2001年01期

2 汪坤福;朱貴明;張莉;張濤;荊鑫鑫;江旭東;王明富;;脂肪酸合成酶系多基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中國老年學(xué)雜志;2013年17期

3 羅剛,魏泓;豬Cathelicidin PMAP37基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J];第三軍醫(yī)大學(xué)學(xué)報;2003年14期

4 劉國通;楊成明;;pcDNA3.1-FKBP12.6基因表達(dá)載體的構(gòu)建及擴(kuò)增[J];華南國防醫(yī)學(xué)雜志;2006年04期

5 艾國平;譚虎;粟永萍;王濤;冉新澤;;雙基因表達(dá)載體的構(gòu)建及生物活性觀察[J];現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展;2008年03期

6 ;組織構(gòu)建中基因表達(dá)載體的構(gòu)建與表達(dá)[J];中國組織工程研究與臨床康復(fù);2010年50期

7 呂曉英;乳球菌基因表達(dá)載體系統(tǒng)的研究[J];現(xiàn)代預(yù)防醫(yī)學(xué);2003年01期

8 ;文摘和文題[J];藥物生物技術(shù);2011年01期

9 吳建平;蒲小勇;周云峰;王行環(huán);吳一龍;韓雪;王懷鵬;胡禮泉;葉林柏;徐戰(zhàn)平;陳浩陽;;人胰島素樣生長因子-1基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J];中華實(shí)驗(yàn)外科雜志;2007年11期

10 馮麗玲;盧文婕;曾慶平;;啤酒酵母鯊烯合酶基因的克隆及其基因表達(dá)載體的構(gòu)建[J];廣州中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報;2009年04期

相關(guān)會議論文 前9條

1 蒲小勇;王行環(huán);王懷鵬;徐戰(zhàn)平;羅耀雄;胡禮泉;吳一龍;;人胰島素樣生長因子1基因表達(dá)載體的構(gòu)建[A];第5次全國中西醫(yī)結(jié)合男科學(xué)術(shù)會議論文匯編暨男科提高班講義[C];2007年

2 王懷鵬;蒲小勇;王行環(huán);徐戰(zhàn)平;高煒城;楊中華;李世林;羅耀雄;陳浩陽;馮自衛(wèi);劉久敏;楊浣清;胡禮泉;;人胰島素樣生長因子1基因表達(dá)載體的構(gòu)建[A];中華醫(yī)學(xué)會第八次全國男科學(xué)學(xué)術(shù)會議論文集[C];2007年

3 李慶章;姜毓君;;β-CPP二聚體基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其結(jié)構(gòu)分析[A];動物生理生化學(xué)分會第八次學(xué)術(shù)會議暨全國反芻動物營養(yǎng)生理生化第三次學(xué)術(shù)研討會論文摘要匯編[C];2004年

4 劉國通;楊成明;;pcDNA3．1-FKBP12．6基因表達(dá)載體的構(gòu)建及擴(kuò)增[A];中華醫(yī)學(xué)會心血管病學(xué)分會第八次全國心血管病學(xué)術(shù)會議匯編[C];2006年

5 曾琪;胡巢鳳;;p53結(jié)合位點(diǎn)在NOD8基因調(diào)控中的作用[A];中國病理生理學(xué)會第九屆全國代表大會及學(xué)術(shù)會議論文摘要[C];2010年

6 任曉慧;張永亮;劉松財;戴建威;郝林琳;章倩倩;侯峰;呂鐵鋼;周立光;吳瓊;盧可;齊建英;;基于RNA復(fù)制子的SS基因表達(dá)載體的構(gòu)建及其在真核細(xì)胞中的表達(dá)[A];全國動物生理生化第九次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2006年

7 張弘;趙小朋;張志光;;Sox9在新生小鼠髁狀突軟骨細(xì)胞的表達(dá)及其意義[A];第八屆全國顳下頜關(guān)節(jié)病學(xué)及（牙合）學(xué)大會論文匯編[C];2011年

8 查長森;王震;陳云波;呂建新;;肺炎克雷伯菌耐氨基糖苷類抗生素基因aac(3)-Ⅰ的改構(gòu)與功能研究[A];華東六省一市生物化學(xué)與分子生物學(xué)學(xué)會2006年學(xué)術(shù)交流會論文集[C];2006年

9 韓冬梅;李秀錦;王幸興;王微;潘素敏;仲飛;;大腸桿菌不耐熱腸毒素A亞基基因表達(dá)載體的構(gòu)建及在大腸桿菌中的融合表達(dá)[A];全國動物生理生化第十一次學(xué)術(shù)交流會論文摘要匯編[C];2010年

相關(guān)重要報紙文章 前1條

1 唐婷　樸淑瑜;從基因的角度“看世界”[N];科技日報;2007年

相關(guān)博士學(xué)位論文 前10條

1 杜秋麗;大豆泛素化系統(tǒng)E2和E3酶基因的克隆與功能研究[D];南京農(nóng)業(yè)大學(xué);2009年

2 趙志東;牛ACSL1基因的轉(zhuǎn)錄調(diào)控研究[D];西北農(nóng)林科技大學(xué);2016年

3 王斌;脆性位點(diǎn)基因WWOX在人肝細(xì)胞癌中的表達(dá)及其功能機(jī)制的實(shí)驗(yàn)研究[D];福建醫(yī)科大學(xué);2014年

4 呂萍;小鼠Lrp5基因表達(dá)調(diào)控的研究[D];山東大學(xué);2005年

5 馬雪梅;神經(jīng)營養(yǎng)相關(guān)因子基因的克隆、表達(dá)及蛋白的純化研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);1997年

6 孫全喜;超長鏈多不飽和脂肪酸合成相關(guān)酶基因的克隆與鑒定及其在作物中的異源合成[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2011年

7 周偉光;果蠅嗅覺基因的篩選、鑒定及其功能的研究[D];四川農(nóng)業(yè)大學(xué);2006年

8 滕思勇;1. HERG通道孔區(qū)外口的錯義突變對其功能的影響 2. hKCNE4新基因的克隆、表達(dá)及功能研究[D];中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué);2002年

9 馬馨;轉(zhuǎn)賴氨酸基因小鼠和牛的研究[D];吉林大學(xué);2012年

10 梁宗敏;人源基因核糖體DNA區(qū)靶向載體VEGF165的構(gòu)建及其在細(xì)胞中的定點(diǎn)表達(dá)研究[D];中南大學(xué);2007年

相關(guān)碩士學(xué)位論文 前10條

1 段君君;WDR5對SOX9基因的初步表觀調(diào)控[D];大理大學(xué);2017年

2 楊嬌;綿羊Rad51基因的克隆與真核表達(dá)[D];石河子大學(xué);2015年

3 趙俊亞;Fat-1轉(zhuǎn)基因克隆渤海黑牛研究[D];內(nèi)蒙古大學(xué);2015年

4 寧孟影;豬Zfx基因干擾載體篩選及性控效果的驗(yàn)證[D];石河子大學(xué);2015年

5 陳晨;家蠶miR-0001和miR-0015對BmFib-L基因表達(dá)的調(diào)控作用研究[D];江蘇科技大學(xué);2015年

6 關(guān)小燕;番茄促分裂原活化蛋白激酶基因SlMAPK7的表達(dá)特性與功能分析[D];浙江大學(xué);2014年

7 宋靜;中間偃麥草抗白粉病相關(guān)基因TiAsp的克隆與功能研究[D];山東農(nóng)業(yè)大學(xué);2015年

8 羅蕊;EPSPS基因與Bar基因的克隆及在蓖麻中的功能驗(yàn)證[D];內(nèi)蒙古民族大學(xué);2015年

9 李麗新;喜樹sls-like基因在大腸桿菌中的表達(dá)與分析[D];黑龍江大學(xué);2012年

10 陳玉如;新生隱球菌格魯比變種毒力差異基因型菌株之間毒力相關(guān)基因的分析研究[D];貴陽醫(yī)學(xué)院;2014年

，

本文編號：1870623