本文選題：B細(xì)胞激活因子 + 受體��； 參考：《軍事醫(yī)學(xué)》2013年02期

【摘要】：目的獲得人類B細(xì)胞激活因子(B cell activating factor,BAFF)胞外段融合蛋白并對(duì)其生物活性進(jìn)行分析。方法構(gòu)建pET32a/BAFF的原核表達(dá)載體,進(jìn)行原核表達(dá)、親和純化,并通過SDS-PAGE、Western印跡進(jìn)行鑒定。利用非還原電泳后的Western印跡與HPLC分析融合蛋白在溶液中的存在形式。ELISA、Octet RED系統(tǒng)檢測(cè)rhBAFF結(jié)合受體TACI的能力并做出實(shí)時(shí)動(dòng)力學(xué)分析。MTS法檢測(cè)rhBAFF促進(jìn)B細(xì)胞增殖的活性。結(jié)果融合蛋白在大腸桿菌BL21中以可溶形式高效表達(dá),經(jīng)Ni-NTA純化獲得的目的蛋白純度超過90%;SDS-PAGE、Western印跡顯示在相對(duì)分子質(zhì)量為36×103位置有目的蛋白的特異條帶;非還原電泳及HPLC分析表明,重組蛋白以三聚體的形式存在;ELISA、Octet RED系統(tǒng)同時(shí)證實(shí)BAFF可與受體TACI結(jié)合;增殖實(shí)驗(yàn)證實(shí)重組蛋白具有生物學(xué)活性。結(jié)論成功獲得純度超過90%的rhBAFF可溶蛋白,實(shí)驗(yàn)證實(shí)為具有生物學(xué)活性的三聚體結(jié)構(gòu)。
[Abstract]:Objective to obtain the extracellular fusion protein of human B cell activator B cell activating factorial (BAFF) and analyze its biological activity. Methods the prokaryotic expression vector of pET32a/BAFF was constructed for prokaryotic expression, affinity purification, and identified by SDS-PAGEG Western blot. Western blot and HPLC after non-reductive electrophoresis were used to analyze the existing form of the fusion protein in solution. ELISAN Octet RED system was used to detect the ability of rhBAFF binding receptor TACI and real-time kinetic analysis was made to detect the activity of rhBAFF to promote the proliferation of B cells. Results the fusion protein was highly expressed in the soluble form of Escherichia coli BL21. The purity of the target protein purified by Ni-NTA was more than 90%. The specific band of the target protein was found at the position of relative molecular weight of 36 脳 10 ~ 3.The results of non-reductive electrophoresis and HPLC analysis showed that the fusion protein was highly expressed in E. coli. The recombinant protein existed in the form of trimer and the RED system confirmed that BAFF could bind to the receptor TACI, and the proliferation test confirmed that the recombinant protein had biological activity. Conclusion the rhBAFF soluble protein with purity of more than 90% was successfully obtained and proved to be biologically active trimer structure.
【作者單位】： 軍事醫(yī)學(xué)科學(xué)院基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究所免疫學(xué)研究室;解放軍第305醫(yī)院檢驗(yàn)科;
【基金】：國(guó)家重大新藥創(chuàng)制科技重大專項(xiàng)資助項(xiàng)目(20102X09401-407) 國(guó)家863計(jì)劃重大項(xiàng)目(2012AA02A302)
【分類號(hào)】：R392.1

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本文編號(hào)：1863759