本文選題：核糖基化樣因子15 + 脂聯(lián)素�。� 參考：《第三軍醫(yī)大學(xué)》2016年博士論文

【摘要】：背景脂聯(lián)素(Adiponectin),又稱Acrp30或者Adipo Q或者Apm1或者Gbp28,是脂肪細胞特異分泌的脂肪因子。臨床研究和基礎(chǔ)實驗證實脂聯(lián)素的表達水平與肥胖誘發(fā)的疾病(比如胰島素抵抗、2型糖尿病和動脈粥樣硬化性心臟病)有非常密切的關(guān)系,故有低脂聯(lián)素血癥一說。脂聯(lián)素作為脂肪細胞中為數(shù)不多的“好”的脂肪因子,發(fā)揮著抗動脈粥樣硬化、增加胰島素敏感性、調(diào)節(jié)葡萄糖和脂質(zhì)代謝的作用,是理想的新藥研究對象。脂聯(lián)素的替代藥物還處于研發(fā)狀態(tài)。隨著疾病易患基因的大規(guī)模測序結(jié)果的出爐以及后基因組時代的到來,眾多基因被重新貼上了和疾病相關(guān)的標簽。就脂聯(lián)素而言,最新一項關(guān)于血漿脂聯(lián)素水平的GWAS研究顯示:除了位于脂聯(lián)素編碼基因Adipo Q位點的lead snp rs266717單核苷酸多態(tài)性呈現(xiàn)出于患者血液中脂聯(lián)素水平明顯相關(guān),新的ARL15基因存在單核苷酸多肽性(rs4311394)且與循環(huán)中脂聯(lián)素水平呈相關(guān)性。而rs4311394位點攜帶G等位基因的患者不僅發(fā)生心血管疾病和糖尿病機率大大增加,而且和多種代謝疾病相關(guān)。另一項研究歐洲肥胖兒童易患基因的大樣本基因芯片篩查的研究中也發(fā)現(xiàn)ARL15基因存在拷貝數(shù)變異(genomic copy number variations),致使兒童肥胖率增加。最新一項對北印度類風濕關(guān)節(jié)炎人群的GWAS研究也發(fā)現(xiàn)ARL15是一個新的非人類組織相容性抗原(HLA)的類風濕關(guān)節(jié)炎(RA)易患基因(rs255758)。在大量的疾病相關(guān)的基因芯片數(shù)據(jù)庫的分析下,脂聯(lián)素、肥胖、炎癥視乎可以用ARL15串聯(lián)起來。除了國外的研究借鑒,課題前期研究2型糖尿病并發(fā)大血管動脈粥樣硬化的易患基因中發(fā)現(xiàn):將可控的多危險因素控制后仍然有部分糖尿病病人發(fā)生大血管病變,對這部分人群進行疾病的差異基因核苷酸多態(tài)性分析發(fā)現(xiàn)ARL15基因不同的等位基因的大血管發(fā)生率顯著不同。基于上述一些證據(jù),提示我們ARL15可能是一個重要的遺傳位點,而且與炎癥、肥胖、糖尿病相關(guān)。已有的關(guān)于ARL15基因及其功能的研究在人白色脂肪、骨骼肌、肝臟、胰腺、心臟、腎臟、胃、垂體、胎盤等組織中均有表達,蛋白質(zhì)一級結(jié)構(gòu)分析認為它屬于Small GTP結(jié)合蛋白(簡稱小G蛋白)家族。該家族的生物學(xué)作用是負責細胞內(nèi)囊泡運輸和參與細胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)。所以我們假設(shè)ARL15可能是參與調(diào)節(jié)脂聯(lián)素及其受體信號通路整個過程的新的調(diào)節(jié)基因,它可能作用與脂肪細胞,介導(dǎo)脂聯(lián)素的生成和分泌;也可能作用于脂聯(lián)素的靶器官,調(diào)節(jié)脂聯(lián)素的下游信號通路,并通過反饋信號反饋到脂肪細胞間接調(diào)節(jié)脂聯(lián)素的生成和分泌。方法1.利用WB、RT-PCR、免疫熒光和ELISA方法,脂肪細胞分化前后脂聯(lián)素、ARL15表達水平以及脂肪細胞中的定位情況;在生理/胰島素抵抗狀態(tài)下,ARL15表達情況;2.利用WB和免疫熒光方法,在生理/胰島素抵抗狀態(tài)下,成熟骨骼肌細胞中ARL15表達水平,ARL15在骨骼肌細胞中的定位情況;3.利用WB方法,在生理/胰島素抵抗狀態(tài)下,胰島素信號通路上關(guān)鍵分子IRS-1/AKT變化情況;及脂聯(lián)素受體信號通路上關(guān)鍵分子AdipoR1及下游分子AMPK\PGC-1α表達情況和ARL15相關(guān)性研究;4.將ARL15過表達和敲降后,生理狀態(tài)/胰島素抵抗狀態(tài)下,脂肪細胞上清中脂聯(lián)素表達水平,骨骼肌細胞中脂聯(lián)素受體信號通路Adipo R1/AMPK/PGC-1α,胰島素信號通路上關(guān)鍵分子IRS-1/AKT的變化。結(jié)果1.ARL15在脂肪前體細胞和成熟細胞中有表達,ARL15的mRNA、蛋白水平與脂聯(lián)素的mRNA、蛋白水平正相關(guān);免疫熒光顯示ARL15與脂聯(lián)素存在共定位;2.成熟脂肪細胞中胰島素上調(diào)ARL15表達,TNF-α下調(diào)ARL15的表達;3.ARL15在成熟骨骼肌細胞中有表達;胰島素上調(diào)ARL15表達,胰島素上調(diào)AdipoR1表達并激活下游分子AMPK\PGC-1α;4.成功構(gòu)建了穩(wěn)定過表達和穩(wěn)定敲降A(chǔ)RL15的骨骼肌前體細胞株,為后續(xù)實驗提供了技術(shù)支持;5.通過在骨骼肌細胞中進行ARL15過表達(干擾)基因修飾,ARL15上調(diào)(下調(diào))Adipo R1的表達,提示ARL15可能參與脂聯(lián)素受體信號通路的激活;6.通過在骨骼肌細胞中進行ARL15過表達(干擾)基因修飾,接受胰島素刺激后ARL15上調(diào)IRS-1磷酸化水平高于對照組,提示ARL15可能參與胰島素信號通路的激活。結(jié)論ARL15很可能是一個新的調(diào)控脂聯(lián)素表達,同時也激活脂聯(lián)素受體信號通路和胰島素信號通路的重要分子。
[Abstract]:It is suggested that ARL15 gene has a very close relationship with obesity - induced disease ( such as insulin resistance , type 2 diabetes and atherosclerotic heart disease ) . The expression of ARL15 in skeletal muscle cells and the expression of ARL15 in skeletal muscle cells were studied by means of WB and immunofluorescence .

【學(xué)位授予單位】：第三軍醫(yī)大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2016
【分類號】：R363

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本文編號：1844930