本文選題：斑馬魚 + 清熱解毒��； 參考：《成都中醫(yī)藥大學(xué)》2015年博士論文

【摘要】：課題背景近年來,斑馬魚作為生物研究模型已經(jīng)成為一個研究熱點。斑馬魚早期發(fā)育過程中,胚胎透明,可直接觀察到各組織器官。并且斑馬魚新生血管簡單,觀察清晰,在顯微鏡下就能夠清楚觀察到節(jié)間血管、血流的形態(tài),并且該實驗?zāi)Ｐ捅徽J(rèn)為具有有高通量和活體實驗的特點,對于研究新生血管具有先天的研究優(yōu)勢�？剐律苌墒歉伟┚C合治療的關(guān)鍵環(huán)節(jié),而中藥抗腫瘤新生血管治療已經(jīng)得到部分文獻(xiàn)證實。根據(jù)文獻(xiàn)資料及臨床經(jīng)驗,清熱解毒類藥物是中醫(yī)治療肝癌的基礎(chǔ)方法。我們在文獻(xiàn)復(fù)習(xí)和專家共識基礎(chǔ)上,選擇6種清熱解毒類中藥進(jìn)行抗新生血管生成的篩選研究,以TG品系的flila-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚胚胎為生物模型,利用其綠色熒光蛋白顯影特質(zhì),在顯微鏡下觀察中藥水煎劑成分對斑馬魚體內(nèi)血管生成的抑制效果。對其中初篩通過確認(rèn)具有抑制血管生成作用的藥物進(jìn)行進(jìn)一步的定量對照試驗。試驗方案選用TG品系的flila-EGFP轉(zhuǎn)基因斑馬魚為動物模型。將新鮮配置好的中藥水提取物(工作濃度：200 μg/ml)(分別為：紫花地丁、白花蛇舌草、半邊蓮、魚腥草、漏蘆、野菊花)和陽性對照藥物-PTK787 (5 μg/ml)處理受精后22小時(22hpf)的斑馬魚胚胎直至48hpf。藥物處理實驗結(jié)束后,將各組將各藥物濃度處理后的胚胎在體式熒光顯微鏡(Nikon SMZ-1500體式熒光顯微鏡)下進(jìn)行血管表型觀察和拍照,拍照時相為48hpf,以分析各個樣品對斑馬魚體節(jié)間血管(ISVs)生成的影響。在血管篩選實驗中,同時對各個樣品誘導(dǎo)的斑馬魚發(fā)育毒性和死亡也進(jìn)行觀察和統(tǒng)計。初篩試驗后,對具有抗血管生成作用的藥物進(jìn)行ISVs定量計數(shù)對比和中藥藥昧共煎液水提物干預(yù)效果的對比。主要結(jié)果陽性對照組5 μg/ml PTK787能夠完全抑制新生血管,空白對照組0.1%DMSO無抑制新生血管作用,野菊花、漏蘆水提物可較為明顯抑制斑馬魚節(jié)間血管,而紫花地丁、白花蛇舌草、半邊蓮、魚腥草水提物不具有抑制斑馬魚節(jié)間血管的效應(yīng)。六種中藥水提取為均無導(dǎo)致斑馬魚死亡或者致畸現(xiàn)象。定量計數(shù)對照研究中,ISVs計數(shù)及新生血管抑制率結(jié)果相似,均提示野菊花水提物與野菊花漏蘆共煎液水提物抑制新生血管生成效應(yīng)與PTK787相當(dāng),并優(yōu)于漏蘆水提物。結(jié)論斑馬魚作為新興篩選新生血管的模型,具有體積小、胚胎透明、繁殖速度快等優(yōu)勢,可以作為以后此方面的研究重點。在當(dāng)今治療腫瘤需要求新求變的時代,并且更看重新生血管對于腫瘤生長、轉(zhuǎn)移和浸潤的作用,選用具有抗新生血管的中藥以達(dá)到抗腫瘤的目的成了研究熱點。本研究中,野菊花、漏蘆水提物顯示了較為優(yōu)異的抗新生血管的作用,但還需要開展進(jìn)一步研究,對藥物的抗新生血管生成作用基因組學(xué)、蛋白組學(xué)效應(yīng)等進(jìn)行深入探索。
[Abstract]:Background zebrafish as a biological research model has become a research hotspot in recent years. During the early development of zebrafish, the embryo is transparent and the tissues and organs can be observed directly. And the zebrafish neovascularization is simple, the observation is clear, under the microscope can clearly observe the internode blood vessel, the blood flow morphology, and this experimental model is believed to have the high throughput and the living body experiment characteristic, For the study of neovascularization has a congenital advantage. Anti-neovascularization is a key link in the comprehensive treatment of liver cancer, and the anti-tumor angiogenesis therapy of traditional Chinese medicine has been confirmed in some literatures. According to the literature and clinical experience, antipyretic and detoxifying drugs are the basic methods of traditional Chinese medicine in the treatment of liver cancer. On the basis of literature review and experts' consensus, six kinds of antipyretic and detoxifying herbs were selected to screen for anti-angiogenesis. The flila-EGFP transgenic zebrafish embryos of TG strain were used as biological model, and their green fluorescent protein (GFP) development characteristics were used. The inhibitory effect of Chinese traditional medicine decoction on the angiogenesis of zebrafish was observed under microscope. Further quantitative controlled trials were carried out to identify the drugs that could inhibit angiogenesis. The flila-EGFP transgenic zebrafish of TG strain was selected as animal model. Fresh Chinese medicine water extracts (working concentration: 200 渭 g / ml) were prepared. The zebrafish embryos were treated 22 hours after fertilization with -PTK787 + 5 渭 g / ml, a wild chrysanthemum, until 48hpf. At the end of the drug treatment experiment, the embryos treated with each drug concentration were observed and photographed under the Nikon SMZ-1500 phantom fluorescence microscope. 48 hpfs were taken to analyze the effect of each sample on ISVsproduction in zebrafish Internode. In the vascular screening experiment, the developmental toxicity and death of zebrafish induced by each sample were also observed and counted. After the primary screening test, the ISVs quantitative count of the drugs with anti-angiogenic effect and the intervention effect of the water extract of traditional Chinese medicine were compared. Results the positive control group (5 渭 g/ml PTK787) could completely inhibit the neovascularization, while the blank control group (0.1%DMSO) had no inhibitory effect on neovascularization. The water extract of Houttuynia cordata did not inhibit the internode blood vessels of zebrafish. No zebrafish death or teratogenicity were found in water extraction of six kinds of traditional Chinese medicine. The results showed that the water extract of Chrysanthemum chrysanthemi and chrysanthemum chrysanthemi had the same inhibitory effect on angiogenesis as PTK787, and it was superior to the water extract of chrysanthemum chrysanthemi. Conclusion zebrafish, as a new model for screening neovascularization, has the advantages of small size, transparent embryo and fast reproduction rate, which can be used as the research focus in the future. In the present age when the treatment of tumor needs to be new and changing, and more attention is paid to the role of neovascularization in tumor growth, metastasis and invasion, the choice of anti-angiogenic Chinese medicine to achieve the purpose of anti-tumor has become a hot research topic. In this study, the aqueous extracts of Chrysanthemum chrysanthemi and Flos chrysanthemi showed excellent anti-angiogenesis effects, but further studies were needed to explore the genomics and proteomics effects of the drugs.
【學(xué)位授予單位】：成都中醫(yī)藥大學(xué)
【學(xué)位級別】：博士
【學(xué)位授予年份】：2015
【分類號】：R-332;R285.5

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本文編號：1840267