本文選題：miR-b + 慢病毒��； 參考：《中國(guó)兒童保健雜志》2013年11期

【摘要】：目的構(gòu)建人miR-146b慢病毒表達(dá)載體,包被病毒并檢測(cè)其在人脂肪細(xì)胞中過(guò)表達(dá)效果。方法以人基因組DNA為模板,PCR高保真擴(kuò)增包含miR-146b區(qū)域上下游各100bp左右的基因組DNA,亞克隆入慢病毒表達(dá)載體,與包裝質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染HEK-293T細(xì)胞,包裝病毒,收取病毒上清,純化后感染人脂肪前體細(xì)胞,36h開(kāi)始觀察熒光標(biāo)記,72h收取細(xì)胞,抽提RNA,Realtime PCR檢測(cè)慢病毒感染下miR-146b的相應(yīng)表達(dá)量。結(jié)果成功構(gòu)建人miR-146b慢病毒表達(dá)載體,包裝獲得的病毒感染人脂肪細(xì)胞的效率可達(dá)到85%以上,miR-146b過(guò)表達(dá)水平可接近4倍。結(jié)論本研究成功構(gòu)建了人miR-146b慢病毒表達(dá)載體,包被的慢病毒可以在人脂肪細(xì)胞中實(shí)現(xiàn)過(guò)表達(dá)效果,為后續(xù)功能研究奠定了基礎(chǔ)。
[Abstract]:Aim to construct a human miR-146b lentivirus expression vector and to investigate its overexpression in human adipocytes. Methods Human genomic DNA was used as template to amplify the genomic DNA containing the upstream and downstream 100bp of the miR-146b region, and subcloned into the lentivirus expression vector, then co-transfected with the packaging plasmid into HEK-293T cells to package the virus and collect the virus supernatant. After being purified and infected with human adipocyte precursor cells for 36 h, the fluorescent labeled cells were observed for 72 hours, and the miR-146b expression was detected by extractable RNAs Realtime PCR under lentivirus infection. Results the expression vector of human miR-146b lentivirus was successfully constructed. The efficiency of infected human adipocytes by packaging could reach more than 85% and the overexpression level of miR-146b could be nearly 4 times. Conclusion the expression vector of human miR-146b lentivirus was successfully constructed in this study. The coated lentivirus could be over-expressed in human adipocytes, which laid a foundation for further functional study.
【作者單位】： 南京醫(yī)科大學(xué)兒科研究所;南京醫(yī)科大學(xué)附屬南京婦幼保健院;
【基金】：國(guó)家自然科學(xué)基金(81100619) 江蘇省醫(yī)學(xué)創(chuàng)新團(tuán)隊(duì)項(xiàng)目(LJ201108) 南京市科技發(fā)展計(jì)劃(201104013)
【分類號(hào)】：R373

【參考文獻(xiàn)】

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本文編號(hào)：1838923